Дифтерия коклюш студенты. Рудаков Н. В. Методические рекомендации к практическому занятию для студентов тема Коринебактерии. Бордетеллы. Микробиологическая диагностика дифтерии и коклюша Дисциплина микробиология, вирусология
 Скачать 42.38 Kb.
|
ОМСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТКафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии « Утверждаю» Зав.кафедрой профессор Рудаков Н.В. МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ к практическому занятию для студентов ТЕМА: Коринебактерии. Бордетеллы. Микробиологическая диагностика дифтерии и коклюша Дисциплина: микробиология, вирусология Факультет: педиатрический, лечебный Составитель кандидат медицинских наук, ассистент кафедры Рогатых Н.А. 1. Краткая информация: Количество часов на изучение данной темы: 180 мин Место проведения занятия: Занятие проводится в учебной комнате кафедры. Оснащение занятия: Слайды. Демонстрационные таблицы: 4,20,55,68,82 Материалы: Культура Corynebacterium diphteriae на среде Леффлера Набор красителей для окраски по Нейссеру Демонстрационные посевы Corynebacterium diphteriae на среде Клауберга Препарат-мазок Corynebacterium diphteriae , окраска по Нейссеру Реакция преципитации в геле для определения токсигенности дифтерийных бактерий Пестрый ряд – определение биохимических свойств коринебактерий Вакцины АКДС, АДС, АД Противодифтерийная сыворотка Демонстрационные посевы Bordetella pertussis на казеиново-угольном агаре (имитация) Препарат-мазок из чистой культуры Bordetella pertussis, окраска по Граму. 2. Актуальность темы: В настоящее время, несмотря на предпринимаемые меры вакцинопрофилактики, наблюдается рост инфекционной заболеваемости преимущественно детского возраста дифтерией и коклюшом. Инфекции могут протекать как в тяжелых так и вс тертых формах на фоне симптомов специфической интоксикации с возможностью тяжелых осложнений и даже летального исхода. Для подтверждения клинического диагноза, своевременного лечения и профилактики большое значение имеют лабораторные методы верификации диагноза, среди которых ведущая роль принадлежит бактериологическим, серологическим и молекулярно-генетическим методам. 3. Учебные воспитательные цели и задачи: - общая: на основе теоретических знаний и практических умений обучающийся должен: обладать способностью и готовностью анализировать социально-значимые проблемы и процессы, использовать на практике методы гуманитарных, естественнонаучных, медико-биологических и клинических наук в различных видах профессиональной и социальной деятельности, способностью и готовностью к логическому и аргументированному анализу, к публичной речи, ведению дискуссии и полемики , способностью и готовностью к формированию системного подхода к анализу медицинской информации, опираясь на всеобъемлющие принципы доказательной медицины, основанной на поиске решений с использованием теоретических знаний и практических умений в целях совершенствования профессиональной деятельности , способностью и готовностью проводить и интерпретировать результаты современных лабораторно-инструментальных исследований . - учебная: знать Студент должен знать: Биологические свойства возбудителей дифтерии и коклюша, принципы их классификации Методы микробиологической диагностики дифтерии и коклюша Особенности сложных методов окраски для выявления возбудителей дифтерии и коклюша (по Нейссеру, Леффлеру) Основные питательные среды, используемые для диагностики этих инфекций, их состав и принцип действия (среда Клауберга, казеиново-угольный агар, среда Пизу) Методику постановки реакции преципитации для определения токсигенности дифтерийных бактерий Основные серологические реакции, используемые в диагностике дифтерии и коклюша (РПГА, РСК, ИФА); молекулярно-генетические методы диагностики (ПЦР) Методы специфического лечения и профилактики, биопрепараты, используемые для этих целей. уметь Приготовить препарат-мазок из культуры дифтерийной палочки, окрасить, промикроскопировать Регистрировать биохимические ряды, учитывать результаты определения токсигенности и определять вид возбудителя дифтерии Описывать культуральные свойства коринебактерий и бордетелл на дифференциально-диагностических средах Подбирать необходимые методы и дифференциально=диагностические тесты для идентификации коринебактерий и бордетелл Регистрировать результаты серологических реакций при дифтерии и коклюше (РПГА, РСК) воспитательная - формирование ценностных установок и профессиональных качеств. . 4. Междисциплинарные и внутрипредметные связи: Знания, полученные при подготовке к занятию, будут базисными не только для микробиологии, а использоваться и на кафедрах инфекционных болезней, эпидемиологии и др. 5.Вопросы для поготовки к занятию, основные термины: ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ: Биологические свойства возбудителя дифтерии. Факторы патогенности и механизм их действия Методы микробиологической диагностики дифтерии Иммунитет при дифтерии и методы определения его напряженности. Биологические свойства возбудителя коклюша. Факторы патогенности и механизм их действия Методы микробиологической диагностики коклюша Биопрепараты, используемые для иммунопрофилактики, лечения и диагностики дифтерии и коклюша. Род Corynebacterium. Возбудитель дифтерии - Corynebacteriumdiphtheriae и большая группа близких по морфологическим и биохимическим свойствам микроорганизмов рода коринебактерий называют коринеформными бактериями или дифтероидами. Они представлены грамположительными неподвижными палочками, чаще с утолщениями на концах, напоминающими булаву (coryne - булава). Дифтероиды широко распространены в почве, воздухе, пищевых продуктах (молоке). Среди них можно выделить три экологические группы: - патогены человека и животных; - патогены растений; - непатогенные коринебактерии. Многие виды дифтероидов являются нормальными обитателями кожи, слизистых зева, носоглотки, глаз, дыхательных путей, уретры и половых органов. Дифтерия. Дифтерия - острое инфекционное заболевание преимущественно детского возраста, которое характеризуется интоксикацией организма дифтерийным токсином и характерным фибринозным (дифтеритическим) воспалением в месте локализации возбудителя (phther - пленка). Морфологические и тинкториальные свойства. C.diphtheriae - тонкие полиморфные палочки с булавовидными концами, часто содержащие волютиновые включения, выявляемые окраской метиленовым синим или по Нейссеру. При последнем методе палочки окрашены в желто - соломенный цвет, зерна волютина (полиметафосфата) - в темно - коричневый цвет. В культурах палочки находятся под углом друг к другу (особенности деления), образуя различные фигуры - растопыренных пальцев, V, Y, L и т.д. Имеют микрокапсулу, а также фимбрии, облегчающие адгезию к эпителию слизистых оболочек. Культуральные свойства. На простых средах коринебактерии дифтерии не растут. Они требуют сред с кровью или сывороткой крови (среды Леффлера, Ру), на которых рост отмечается уже через 10-12 часов, за это время сопутствующая (контаминирующая пробы) микрофлора полностью развиться не успевает. Наиболее часто применяют теллуритовую среду и теллурит - шоколадный агар Маклеода. Высокие концентрации теллурита калия в этих средах подавляют рост посторонней флоры. Коринебактерии дифтерии восстанавливают теллурит до металлического теллура, что придает их колониям темно - серый или черный цвет. У этого возбудителя выделяют биотипы - gravis, mitis, intermedius, отличающиеся по морфологии, антигенным и биохимическим свойствам, тяжести заболеваний у человека. Тип gravis чаще вызывает вспышки и более тяжелое течение, для него характерны крупные с неровными краями и радиальной исчерченностью колонии в виде маргаритки (R- формы). Тип mitis вызывает преимущественно легкие спорадические заболевания, образует на плотных средах мелкие гладкие колонии с ровными краями (S - формы). Тип intermedius занимает промежуточное положение, образует на плотных средах переходные по характеристикам RS - формы, однако еще более мелкие. На жидких средах вызывают помутнение сред, образуют крошковидный осадок. Биохимические свойства. Коринебактерии дифтерии ферментируют глюкозу, мальтозу. Отсутствие активности в отношении сахарозы и мочевины - важный дифференциальный признак среди дифтероидов. Обладают цистеназной активностью (расщепляют цистеин) - проба Пизу. Антигенная структура. Выделяют О - и К - антигены. Полисахаридные компоненты О- антигенов клеточной стенки обладают межродовыми свойствами, обусловливая неспецифические перекрестные реакции с микобактериями, актиномицетами (нокардиями). Поверхностные К- антигены - капсульные белки, обладают видовой специфичностью и иммуногенностью. Выделяют 11 серотипов. Серотипы 1 - 5 и 7 относятся к биовару gravis. Серотипирование культур проводят в РА с диагностическими сыворотками к соответствующим сероварам и полигрупповой агглютинирующей сывороткой. В серологической диагностике у людей чаще применяют РПГА, более чувствительную реакцию, чем РА. В настоящее время применяют также ИФА. Многие штаммы коринебактерий дифтерии (особенно нетоксигенные) обладают спонтанной агглютинабельностью и полиагглютинабельностью. Факторы патогенности. Токсигенные штаммы возбудителя дифтерии продуцируют сильный экзотоксин (термолабильный высокотоксичный иммуногенный белок). Нетоксигенные штаммы не вызывают заболевания дифтерией. Токсин вызывает необратимое блокирование удлинения полипептидной цепи, т.е. любого белкового синтеза. Поражаются в основном определенные системы: симпатико-адреналовая система, сердце и кровеносные сосуды, периферические нервы. Отмечаются структурные и функциональные нарушения миокарда, а также демиелинизация нервных волокон, приводящая к параличам и парезам. Способность к токсинообразованию проявляют лишь лизогенные штаммы, инфицированные бактериофагом (бета - фагом), несущим ген tox, который кодирует структуру токсина (т.е. несущие гены умеренного профага в своей хромосоме). Фаготипирование применяют для дифференциации штаммов коринебактерий дифтерии. Эпидемиология. Резервуар - человек (больной, реконвалесцент, бактерионоситель). Основной путь передачи - воздушно - капельный, сезонность - осенне-зимняя. Возбудитель хорошо сохраняется при низких температурах, высушенном состоянии (слюна, слизь, пыль). Клинико-патогенетические особенности. Возбудитель в месте внедрения вызывает фибринозное воспаление с образованием плотно спаянной с тканями фибринозной пленки. Существенное значение в вызываемой патологии имеет действие экзотоксина (описано в разделе “факторы патогенности”). По локализации выделяют дифтерию ротоглотки (наиболее часто), дыхательных путей, носа и редкой локализации (глаза, наружные половые органы, кожа, раневая поверхность). Дифтерия зева может быть причиной крупа и асфиксии. Лабораторная диагностика. Основной метод диагностики - бактериологический. Применяют для выявления больных, бактерионосителей, контактных. Стерильными тампонами берут материал для микроскопии и посевов - слизь из зева и носа, пленки с миндалин и других мест, подозрительных на наличие дифтеритических поражений. Возбудитель выделяют посевом на элективные теллуритовые среды и кровяной агар. На слизистой оболочке глаза часто выявляют C.xerosis (возможная причина хронических конъюнктивитов), в носоглотке - C.pseudodiphtheriticum (палочка Хофманна), выявляют и другие дифтероиды. Для дифференциации возбудителя дифтерии от дифтероидов используют такие показатели, как способность восстанавливать теллурит и образовывать темные колонии, пробу Пизу, ферментацию углеводов (глюкоза, мальтоза, сахароза) и мочевины, способность расти в анаэробных условиях (характерно для возбудителя дифтерии). Обязательным этапом является определение токсигенности культуры. Наиболее распространенные методы - биопробы на морских свинках, реакция преципитации в агаре. Используют также ИФА с антитоксином, генетические зонды и ПЦР для выявления фрагмента А гена tox. Лечение. Используют антитоксическую противодифтерийную сыворотку, антибиотики и сульфаниламидные препараты. Постинфекционный иммунитет - стойкий, преимущественно антитоксический. Для количественного определения уровня антитоксического иммунитета ранее применялась проба Шика (внутрикожное введение токсина), сейчас - РПГА с эритроцитарным диагностикумом, получаемым сенсибилизацией эритроцитов дифтерийным анатоксином. Профилактика. В основе - массовая иммунизация населения. Используют различные препараты, содержащие дифтерийный анатоксин - АКДС, АДС, АДС - М, АД и АД - М. Род Bordetella. Бордетеллы - мелкие коккобациллы, имеют форму овоидной палочки, грамотрицательны, неустойчивы во внешней среде. Основное значение имеют три вида. 1. B.pertussis - возбудитель коклюша - острого инфекционного заболевания, сопровождающегося воспалением гортани, трахеи и бронхов и приступообразным кашлем. 2. B.parapertussis - возбудитель паракоклюша. 3. B.bronchiseptica - возбудитель коклюшеподобного заболевания собак, кошек и кроликов, может вызывать у людей респираторные заболевания по типу ОРВИ (относительно редко). Культуральные особенности. Бордетеллы требовательны к средам, особенно возбудитель коклюша. Для первичной изоляции этих гемофильных микроорганизмов используют картофельно-глицериновый агар с добавлением крови (среду Борде - Жангу) или казеиново-угольный агар (КУА). На кровяных средах возбудитель коклюша вызывает образование мелких колоний металлического оттенка с потемнением сред, на КУА - буровато - коричневое окрашивание колоний. Основные формы колоний - гладкие (S) - так называемая I фаза (вирулентные культуры) через промежуточные формы переходят в шероховатые (R) - фаза IV, что сопровождается изменением культуральных, биохимических и антигенных свойств, потерей вирулентности. Антигенный состав. Имеются общие (родовые) и специфические (видовые) антигены. Видоспецифическими являются соматические О - антигены (агглютиногены), выявляемые в РА. Факторы патогенности. Главный фактор - термолабильный экзотоксин белковой природы, обладающий тропизмом к нервной и сосудистой системе. Имеется термостабильный эндотоксин, обладающий токсическими и сенсибилизирующими свойствами. Трахеальный цитотоксин вызывает повреждение мерцательного эпителия. Бактерии продуцируют гиалуронидазу, лецитиназу, плазмокоагулазу. Эпидемиология. Источник инфекции при коклюше и паракоклюше - больные типичными и стертыми формами инфекции. Механизм заражения - воздушно - капельный. Возбудитель, попавший на слизистую оболочку дыхательных путей, размножается, выделяет экзо - и эндотоксины, некротизирует слизистую, раздражают кашлевые рецепторы и кашлевой центр продолговатого мозга, вызывает спазматические приступы кашля. Лабораторная диагностика. Посев проводят методом “кашлевых пластинок” или материал берут заднеглоточным тампоном с посевом на агар Борде - Жангу и КУА. Идентификация выделенных культур проводится по морфологическим и культуральным свойствам, а также в РА со специфическими сыворотками. Для экспресс - диагностики и идентификации применяют метод флюоресцирующих антител. Для серологической диагностики используют различные методы - РА, РСК, РПГА с исследованием парных сывороток, взятых в динамике инфекционного процесса. Лечение. В основе лечения - антибактериальная терапия антибиотиками (гентамицин, ампициллин и др.). Иммунитет и иммунопрофилактика. Постинфекционный иммунитет стойкий, видоспецифический, обусловлен гуморальными и клеточными факторами. Для вакцинации используют убитые бордетеллы I фазы. В вакцине АКДС имеется коклюшный компонент (20 млрд. микробных тел/ мл). 6. Задания для самостоятельной работы При самостоятельной подготовке к занятию студентам рекомендуется пользоваться вопросами для подготовки к занятию, а также повторить сложные методы окраски (по Нейссеру), серологические реакции, используемые для типирования микроорганизмов (РА на стекле), определения токсигенности (РП в агаре), выявления антител в сыворотке больного (РПГА, РСК) Подготовить рефераты по темам: 1. Современные подходы к микробиологической диагностике и профилактике коклюша. 2. Эпидемиология дифтерийной инфекции – история и современность. 7. Рекомендуемая литература Основная литература1
3.6.2Дополнительная литература2
2 Оформляется в соответствии с требования НМБ ОмГМУ | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||