Главная страница
Навигация по странице:

  • Джозеф Джон Томсон

  • СЛАЙД 4. М ALDI - TOFMS (матрично-активированная лазерная десорбция/ионизация)

  • СЛАЙД 5. Лазерная десорбция Матричная лазерная десорбция

  • MALDI

  • СЛАЙД 7. Идентификация МО на MALDI - ToF MS : MALDI-ToFBiotyper

  • СЛАЙД 8. Программа Biotyper

  • 4600 штаммов микроорганизмов

  • СЛАЙД 10. Основные достоинства и преимущества MALDI-TOF MS

  • масс-спектрометр. Слайд массспектрометрия


    Скачать 19.02 Kb.
    НазваниеСлайд массспектрометрия
    Дата17.03.2019
    Размер19.02 Kb.
    Формат файлаdocx
    Имя файламасс-спектрометр.docx
    ТипДокументы
    #70716

    СЛАЙД 2. Масс-спектрометрияметод исследования вещества, основанный на определении отношения массы к заряду ионов, образующихся при ионнизации представляющих интерес компонентов пробы. Один из мощнейших способов качественной идентификации веществ, допускающий также количественное определение. Можно сказать, что масс-спектрометрия- это «взвешивание» молекул, находящихся в пробе.

    Масс-спектр-это зависимость интенсивности ионного тока (количества вещества) от отношения массы к заряду (природы вещества).

    Первые масс-спектры были получены в Великобритании в 1910г. Джозеф Джон Томсон (18.12.1856-30.08.40гг)

    СЛАЙД 3. Масс-спектрометр- инструмент, способный в условиях вакуума разделять находящиеся в газовой фазе заряженные частицы вещества согласно отношению их массы заряду (m/z).

    СЛАЙД 4. МALDI-TOFMS (матрично-активированная лазерная десорбция/ионизация) –десорбционный метод «мягкой» ионизации, обусловленной воздействием импульсами лазерного излучения на матрицу с анализируемым веществом.

    СЛАЙД 5. Лазерная десорбция

    Матричная лазерная десорбция – метод, при котором исследуемое вещество помещают в «матрицу» - перемешивают с веществом, имеющим меньший молекулярный вес и обладающим высокой способностью поглощать лазерное излучение (например, коричная кислота, 3-гидроксипиколиновая кислота, 6,7-гидроксикумарин и т.д.). Перемешивание происходит при помощи растворения вещества образца и вещества матрицы в одном растворителе и последующем испарении растворителя на специальной подложке. Далее смесь на подложке помещают в прибор и облучают короткими лазерными импульсами и захватывает с собой молекулы исследуемого вещества, которые частично ионизируются и увлекаются электрическим полем в масс-анализатор.

    MALDI- система получения ионов из твердой фазы

    ToF- время пролетный метод разделения ионов в вакууме.
    СЛАЙД 6. Применение MALDI-ToF MS в медицине

    • Идентификация микроорганизмов по масс-спектру рибосомальных белков

    • Белковое профилирование сывороточных и тканевых биомаркеров

    • Генотипирование единичных нуклеотидов полиморфизмов (SNP)

    • Антибиотикорезистентность

    • Генетический риск развития заболеваний человека


    СЛАЙД 7. Идентификация МО на MALDI-ToF MS:

    • MALDI-ToFBiotyper-программно-аппаратный комплекс, предназначенный для быстрой идентификации микроорганизмов с использованием MALDI-ToF масс-спектрометров серии FLEX (ex: Microflex)

    • Метод выявляет уникальный набор белков, исследуемых микроорганизмов-своеобразный «отпечаток пальца»

    • Идентификация происходит в основном по рибосомальным белкам, которые встречаются во всех микроорганизмах

    • Биоинформационная модель, основанная на анализе белков, позволяет надежную и точно проводить идентификацию конкретного микроорганизма до вида путем сопоставления получаемых масс-спектров белков с обширной базой данных.


    СЛАЙД 8. Программа Biotyper

    Принцип Biotyper основан на сопоставлении полученных масс-спектров рибсомальных белков (зеленые пики) с базой данных содержащие аналогичные эталонные спектры для большинства микроорганизмов (синие пики). После нахождения уникального набора масс-пиков, программа выдает наиболее вероятный результат. При этом указывается уловное значение Score, характеризующее качеств и точность анализа.

    По результатам сверки с базой данных, в которой имеется информация более чем для 4600 штаммов микроорганизмов система выдает результат идентификации с учетом точности произведенной оценки
    СЛАЙД 9. Работа с MALDI Biotyper

    • MALDIBiotyper адаптирован для пользователей не имеющих опыта масс-спектрометрии

    • Для анализа требуется единичная колония или небольшая аликвота жидкой среды

    • Необходимо выполнить несколько простых шагов

    • Программное обеспечение автоматизирует процесс накопления и анализа результатов

    • По итогам работы система генерирует подробный отчёт с результатами идентификации

    • Вся процедура занимает всего несколько минут.

    На начало 2018 года размер базы Biotyper составляет более 2500 видов микроорганизмов. Стоит отметить, что Bruker активно пополняет базу Biotyper. Так, еще 5 лет назад база имела записи о 1300 МО, а в начале 2012 в базе было 700 видов МО.

    СЛАЙД 10. Основные достоинства и преимущества MALDI-TOF MS:

    • позволяет отказаться от длительной, трудоемкой и ненадежной фенотипической идентификации микроорганизмов

    • невысокие требования к квалификации персонала

    • не требуется специальных расходных материалов

    •  быстрая и простая пробоподготовка — 5 мин/ образец

    • высокая чувствительность — 104−105 клеток — единичная колония или центрифугат жидкой культуры

    • возможность видовой идентификации любых видов культивируемых микроорганизмов: мицелиальных грибов, дрожжей, грам (+) и грам (-) бактерий

    • высокая скорость идентификации — 1 мин/ образец, 1,5 часа при одновременном исследовании 96 проб на панели

    • высокая точность видовой идентификации (превышает 98%) 

    • снижение себестоимости каждого исследования в 12−96 раз (в среднем в 37 раз) в сравнении с фенотипическими (ручными и автоматизированными) методами.


    написать администратору сайта