ВИЧ. Юля. Состав набора входит
 Скачать 20.01 Kb.
|
|
Для постановки ИФА в «ГБУЗ» города Кувандыка в иммунологической лаборатории используется тест-система суммарный спектр антител к структурным белкам вируса иммунодефицита человека (Бест – анти ВГС). Принцип иммуноферментного анализа основан на выявлении комплекса антиген-антитело с помощью фермента (пероксидаза, щелочная фосфатаза и др.) по изменению окраски специфического субстрата. Основной компонент твердофазных иммуноферментных тест-систем — полистироловый планшет с лунками или полистироловые шарики, на поверхности которых сорбирован антиген: вирусный лизат, рекомбинантные белки или синтетические антигенные детерминанты. Из всех модификаций твердофазного иммуноферментного анализа для диагностики вирус иммунодефицита человека, наиболее широко применяются непрямой и конкурентный варианты. Состав набора входит. Иммуносорбент – планшет полистироловый 96-луночный, в лунках планшета сорбированы рекомбинантные антигены – аналоги белков T. pallidum. Форма выпуска: 3 комплекта, в первом комплекте 1 планшет, во втором 2 планшета, в третьем комплекте 5 планшетов. Коньюгат – смесь рекомбинантных антигенов, конъюгированных с пероксидазой хрена. Прозрачная или слегка опалесцирующая фиолетового цвета жидкость. Форма выпуска: 3 комплекса, в первом комплексе 1 флакон 14,0 мл, во втором 1 флакон 28,0 мл, в третьем комплексе 2 флакона по 28,0 мл. К+ - контрольный положительный образец, содержащий антитела к T. pallidum, инактивированный. Прозрачная или слегка опалесцирующая малинового цвета жидкость. Форма выпуска: 3 комплекса, в первом комплексе 1 флакон 0,25 мл, во втором 1 флакон 0,5 мл, в третьем комплексе 1 флакон 1,0мл. К- - контрольный отрицательный образец, не содержащий антитела к T. pallidum, инактивированный. Прозрачная или слегка опалесцирующая зеленого цвета жидкость. Форма выпуска: 3 комплекса, в первом комплексе 1 флакон 0,25 мл, во втором 1 флакон 0,5 мл, в третьем комплексе 1 флакон 1,0мл. ПР – промывочный раствор. Концентрат (х25) фосфатно- солевого буферного раствора с твином (ФСБ-Т). Прозрачная или слегка опалесцирующая бесцветная или светло- желтого цвета жидкость, допустимо образование осадка, полностью растворяющегося при температуре от 35 до 39  и встряхивании. Форма выпуска: 3 комплекса, в первом комплексе 1 флакон 50,0 мл, во втором 1 флакон 120,0 мл, в третьем комплексе 2 флакона по 120,0 мл.Стоп-реагент – раствор серной кислоты (0,2М). Прозрачная, бесцветная жидкость. Форма выпуска: 3 комплекса, в первом комплексе 1 флакон 25,0 мл, во втором 1 флакон 50,0 мл, в третьем комплексе 2 флакона по 50,0 мл. ТМБ – Субстратный раствор – прозрачная бесцветная жидкость. Форма выпуска: 3 комплекса, в первом комплексе 1 флакон 14,0 мл, во втором 2 флакона по 14,0 мл, в третьем комплексе 5 флаконов по 14,0 мл. СБ – субстратный буферный раствор, цитратный буфер, содержащий раствор перекиси водорода. Прозрачная, бесцветная жидкость. Форма выпуска: 3 комплекса, в первом комплексе 1 флакон 25,0 мл, во втором 1 флакон 50,0 мл, в третьем комплексе 2 флакона по 50,0 мл. ТМБ – концентрат (х11). Раствор, содержащий 3,3’,5,5’ – тетраметилбензидин. Прозрачная, бесцветная жидкость. Форма выпуска: 3 комплекса, в первом комплексе 1 флакон 2,5 мл, во втором 1 флакон 2,5 мл, в третьем комплексе 2 флакона по 3,5 мл. Отбор и подготовка образцов к исследованию: Сбор образцов крови человека проводился в соответствии с текущей практикой методом венопункции. Для анализа использовались: - неразведенные образцы плазмы крови человека, содержащие ЭДТА, цитрат натрия, гепарин; - образцы сыворотки крови человека; Во избежание гемолиза нужно как можно быстрее отделялась плазма от эритроцитов или сыворотка от сгустка. Образцы, содержащие агрегаты или осадок, осветлялись центрифугированием. При постановке ИФА выполнялись следующие требования и рекомендации: Использовались валидированные дозаторы и оборудование. Использовались новые наконечники для каждого образца. Перед использованием набор реагентов выдерживался не менее 30 мин при комнатной температуре Перед использованием ванночки пластиковые для жидких реагентов ополаскивались водой дистиллированной Не использовалась одна и та же ванночка для внесения Конъюгата, ТМБ- Субстратного раствора или субстратной смеси. Не допускалось расплёскивание образцов или растворов, содержащих образцы. Не допускалось высыхание лунок планшета между отдельными операциями Соблюдались требования к промывке Многоразовые ванночки для ИФА анализаторов сразу после работы ополаскивались водой дистиллированной. Постановка ИФА осуществлялась следующим образом. Предварительно приготовленный согласно инструкции, прилагаемой к набору, исследуемый материал сыворотка, вносится в лунку планшета. Несколько лунок планшета заполняются контрольными сыворотками, содержащими и не содержащими антитела к возбудителю Вирус иммунодефицита человека. Планшет с внесенными контрольными сыворотками и исследуемым материалом инкубируется при условиях, указанных в инструкции, прилагаемой к диагностическому набору. Если специфические антитела присутствуют в сыворотке, они образуют комплекс с антигеном, сорбированным на поверхности лунок планшета. Не связавшиеся с антигеном антитела удаляются при отмывке планшета. Затем во все лунки планшета вносят конъюгат-антитела против иммуноглобулинов человека, меченые ферментом (пероксидаза, щелочная фосфатаза и др.). При последующей инкубации происходит образование комплекса антиген-антитело-конъюгат. Не связавшийся конъюгат удаляется во время отмывки планшета. Наиболее широко применяемым индикаторным ферментом для иммуноферментного анализа является пероксидаза хрена. Субстратом для нее является перекись водорода. Эта реакция протекает без видимых проявлений. Изменение окраски раствора происходит при окислении красителей (ортофенилендиамина или др.), который входит в состав субстратного раствора. Краситель из восстановленной формы переходит в окисленную окрашенную форму. Таким образом, происходит окрашивание только тех лунок, в которых присутствует комплекс антиген – антитело - конъюгат, чем больше в сыворотке антител, тем темнее окраска в лунке планшета. При использовании тест - системы иммуноферментной для качественного выявления антител к возбудителю Вирус иммунодефицита человека в сыворотке крови человека возможен только визуальный учет результатов реакции. При резко положительном (4+) результате субстратная смесь имеет темно - коричневый цвет, при положительном (3+) - коричневый цвет, при слабоположительном (2+) - светло - коричневый, при отрицательном (+,-) - светло - бежевый цвет или бесцветна. |