микробиология. Титрационный метод. Используется для определения количества санитарно показательнных микроорганизмов (смп)
 Скачать 17.17 Kb.
|
|
Титрационный метод. Используется для определения количества санитарно- показательнных микроорганизмов (СМП). 1-ый этап : гомогенизация материала. При необходимости приготовление суспензии с целью перевода микроорганизмов в жидкую фазу 2-ой этап : приготовление серии разведений. 3-ий этап: посев избранных объемов исследуемого материала (100, 10, 1 мл) и его разведений по 1 мл в жидкую питательную среду. Для повышения точности метода каждый объем может праллельно засеиваться в несколько порций питательной среды. Оптимальным является трехкратное повторение (достаточная достоверность при сравнительно небольшой стоимости) 4-ый этап: учет наличия роста на жидкой питательной среде и высев из положительных объемов на плотную питательную среду. 5-ый этап: идентификация микроорганизмов, выросших на плотной питательной среде. При этом учитываются культурные свойства и при необходимости проводятся дополнительные исследования (изучение морфологических, биохимическихсвойств) Если использован однорядный метод, как правило, результат выражается в виде титра искомого микроорганизма, за который принимается наименьший объем (наибольшее разведение), в котором еще он был обнаружен. Если был использован многорядный метод, учет результатов проводится с помощью специальных таблиц, позволяющих по комбинации положительных объемов, давших рост, определить титр, индекс (НВЧ). Количественные методы исследования микрофлоры пищевых продуктов Количественные методы исследования микрофлоры позволяют установить количество микроорганизмов в определенном объеме исследуемого материала – микробную обсемененность.Во всех видах продуктов, кроме кисломолочных, определение количества мезофильных аэробных и факультативно- анаэробных микроорганизмов проводят на плотной среде с термостатированием при 30С в течении 72 часов, в соответствиии с ГОСТом. Результаты исследований выражают количеством колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 г или см3 продукта. Определение количества микроорганизмов методом счета колоний Сущность метода счета колоний заключается в посеве определенного количества испытуемого материала в чашки Петри с расплавленной плотной питательной средой. При последующем выращивании посева из каждой клетки в результате ее размножения образуется колония. Таким образом, количество выросших колоний будет соответствовать количеству микроорганизмов, находящихся в посеянной пробе исследуемого объекта. Отвесить из средней пробы 1 г продукта в стерильный бокс. Принести навеску в стерильную ступку и тщательно растереть. Если продукт очень плотный, то растереть его со стерильный песком. Растертый продукт количественно и стерильно перенести в колбу со 100 см3 стерильной воды (первое разведение 100:1). Если исследуются такие продукты, как мука, крупа, компот, сахар, соль, пряности, то навеску продукта без растирания внести в колбу со 100см3 стерильной воды (первое разведение) Из колбы первого разведения после тщательного и осторожного взбалтывания (не замочить ватную пробку!!!!) в течение 5 мин, стерильной пипеткой взять 1см3 и внести в первую чашку Петри. Из этой же колбы, той же пипеткой взять еще 1 см3 и внести в пробирку с 9см3 стерильной воды (второе разведение, 1:1000) Из этой пробирки (второго разведения) после тщательного взбалтывания содержимого новой пипеткой отобрать 1 см3 жидкости и внести во вторую чашку Петри. Той же пипеткой из той же пробирки перенести 1 см3 во вторую пробирку с 9 см3 стерильной воды( третье разведение, 1:10000). После взбалтывания содержимогоэтой пробирки( третье разведение) из нее новой пипеткой 1 см3 жидкости перенести в третью чашку Петри. Таким образом, получаем разведения 1:1000, 1:10000 В чашки Петри вылить из пробирок теплый расплавленный мпа и перемешать пробу с питательной средой.Смешивать осторожно, легким вращательным движением закрытой чашки, чтобы не замочить ее края. Чашки поставить на горизонтальную поверхность для застывания среды. На крышке чашки карандашом указать фамилию студента, номер групппы и разведение. После застывания пит. Среды чашки перевернуть вверх дном и поместить в термомтат. Подсчитать колонии, выросшие на пит.среде в чашках Петри. Определить степень обсемененности бактериями изучаемого пищевоо продукта и оценить его по полученным результатам. Установить название семейства и рода преобладающих в посеве бактерий Изучение и определение группы санитарно- показательных м\о: КМАФАиМ, БГКП ; энтерококков по соответствующим ГОСТам Для обнаружения развития бактерий группы кишечной палочки следует смотреть пробирки со средой Кесслера. О развитии бактерий судят по помутнению среды, а о наличии газообразования- по накоплению газа в поплавке. Отметить тот наименьший объем исследуемого материала, который не вызвал указанне изменения среды, это и будет титр кишечной палочки. В случае отсутствия газообразования титр условно устанавливают по помутнению среды. После определения титра установить сходство выросших на среде. Эндо колоний с колониями, характерными для бактерий группы кишечной палочки. Среда Эндо является дифференциально-диагностической средой, т.е на этой среде по характеру роста возможно отличить кишечную палочку от других бактерий. В состав среды Эндо входят МПА, лактоза, фуксин и сернисто-кислый натрий. Отметить наличие или отсутствие типичных для кишечной палочки колоний, имеющих темно-красный или красный цвет с золотистым металлическим блеском. Образование таких колоний происходит вследствие того, что кишечная палочка сбраживает лактозу с выделением альдегидов. При взаимодействии альдегидов с находящейся в среде Эндо фуксинсернистой кислоты выделяется свободный фуксин. Для установления сходства морфологических признаков выросших на среде Эндо бактерий с признаками кишечной палочки из типичных и нетипичных колоний приготовить препараты: «раздавленная капля» и окрашенный по методу Грама. При микроскопировании препаратов отметить форму клеток, подвижность, наличие или отсутствие спор и отношение к окраске по Граму. Показатель БГКП приведен в соответствие с принятой международной номенклатурой. К БГКП относятся грамотрицательные, не образующие спор палочки, сбраживающие лактозу с образованием кислоты и газа при 36+-1С. Изучение и определение патогенных и условно-патогенных м\о по соответствующим ГОСТам. Обнаружение патогенной микрофлоры проводят путем посева продукта в регламентированных нормативными документами количествах на соответствующие питательные среды. В продуктах массового потребления патогенные микроорганизмы, в том числе сальмонеллы, не допускаются в 25г продукта. Исследование пищевых продуктов на листерии регламентировано ГОСТом Определение спор сульфитредуцирующих клостридий Определение методом прямого посева. Исследуемую пробу 20мл (2 пробирки по 10мл) прогревают на водяной бане в пробирках при температуре 75С в течение 15 мин для исключения вегетативных форм. Посевы заливают горячим железо-сульфитным агаром в количестве, превышающем объем воды в 2 раза. Посевы быстро охлаждают и инкубируют при 44С в течение 16-18ч. Подсчитывают черные колонии, выросшие в толще питательной среды. Результат анализа выражают в КОЕ спор сульфитредуцирующих клостридий в 20мл воды. Обнаружение бактерий родов сальмонелла и шигелла Посев исследуемой пробы в количестве 1л на среды накопления: селенитовый бульон, магниевую среду. Инкубация при 37С 18-20ч. Затем высев на элективно-дифференциальные среды и дальнейший традиционный ход исследования. |