Иллюстрации для микробиологии 2012. Учебнометодическое пособие к лабораторнопрактическим занятиям Оборудование бактериологической лаборатории
 Скачать 22.66 Mb.
|
|
http://vetfac.nsau.edu.ru СПбГАВМ Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии Ветеринарная микробиология. Иллюстрации Учебно-методическое пособие к лабораторно-практическим занятиям Оборудование бактериологической лаборатории      Дистиллятор; Центрифуга; Автоклав; Сухо-жаровой шкаф      Разнообразие форм прокариот Среди прокариот обнаружены организмы, имеющие различное строение. Некоторые бактерии имеют вид кольца, замкнутого или разомкнутого в зависимости от стадии роста (рис. 9). У прокариот, в основном размножающихся почкованием, описано образование клеточных выростов (простек), число которых может колебаться от 1 до 8 и более (рис. 10). Из природных субстратов выделены бактерии червеобразной формы и напоминающие шестиугольную звезду (рис.11, 12). Для некоторых видов характерно слабое или довольно хорошо выраженное ветвление (рис. 13). Описаны прокариоты, обладающие морфологической изменчивостью, в зависимости от условий имеющие вид палочек, кокков или обнаруживающие слабое ветвление. 1 — кокк; 2 — диплококк; 3 — сарцина; 4 — стрептококк; 5 — колония сферической формы: 6 — палочковидные бактерии (одиночная клетка и цепочка клеток); 7 — спириллы; 8 — вибрион; 9 — бактерии, имеющие форму замкнутого или незамкнутого кольца; 10 — бактерии, образующие выросты (простеки); 11 — бактерия червеобразной формы; 12 — бактериальная клетка в форме шестиугольной звезды; 13 — представитель актиномицетов; 14 — плодовое тело миксобактерии; 15 — нитчатая бактерия рода Caryophanon с латерально расположенными жгутиками: 16 — нитчатая цианобактерия. образующая споры (акинеты) и гетероцисты; 8, 15, 17, 18 — бактерии с разными типами жгутикования; 19 — бактерии, образующие капсулу; 20 — нитчатые бактерии группы Sphaeroillus , заключенные в чехол, инкрустированный гидратом окиси железа; 21 — бактерия, образующая шипы; 22 — Galionella.  ФОРМА ПРОКАРИОТ, ЗНАЧИМЫХ В ВЕТЕРИНАРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ  10 11 12 1.Стафилококки; 2.Диплококки (гонококки); 3.Диплококки (пневмококки); 4.Стрептококки; 5.Тетракокки; 6.Сарцины; 7.Бактерии (палочки, не образующие спор); 8. Бациллы; 9.Клостридии; 10.вибрионы; 11.Спириллы; 12.Спирохеты. ПОДВИЖНОСТЬ МИКРООРГАНИЗМОВМеханизмы движения в жидкостиБактерии способны передвигаться в жидкости, используя много механизмов, таких как жгутики (flagella), изменения поверхностного натяжения, изменения плавучести, полимеризацию актина, который окружает их, и множество еще неизвестных механизмов. Жгутики: Бактериальные жгутики (flagella) — это другие структуры, чем у эукариотов. В зависимости от места их расположение на клетке, бактерии разделяют на монотрихи (с одним жгутиком на конце), лофотрихи (с пучком жгутиков на конце) и перитрихи (с многими жгутиками по всей поверхности). Много бактерий (например E.coli) имеют два разных режима работы жгутиков: движение вперед и «танец» (tumbling). «Танец» позволяет им внести в свое движение необходимую «случайность».   Типы расположения жгутиков: A-Монотрихи; B-Лофотрихи; C-Амфитрихи; D-Перитрихи. Полимеризация актина: Несколько видов Listeria и Shigella двигаются внутри клеток-хозяев, узурпируя механизм полимеризации актина, который по обыкновению используется для движения самой эукариотичной клетки или внутриклеточного транспорта, хотя и другим путем. Продвигая полимеризацию актина на одном полюсе своей клетки, они могут формировать своего рода хвост, который толкает их сквозь цитоплазму клетки-хозяина. Продольные филаменты: Некоторые (спирохеты) имеют «продольные филаменты», то есть жгутики, расположенные между двух мембран, и передвигаются за счет движения всего тела. Изменение плавучести: Некоторые планктонные бактерии содержат газовые везикулы, немембранные органеллы, которые содержат некоторую часть газа. За счет регулирования их относительного объема водные бактерии могут выполнять вертикальные миграции. Передвижение на поверхностях  Ворсинки IV типа миксобактерии Myxococcus xanthus Все механизмы передвижения на поверхностях называются вместе бактериальным скольжением (bacterial gliding). Они включают использование ворсинок и прочие, еще неизвестные механизмы. Ворсинки: Некоторые бактерии, например Myxococcus, Pseudomonas и Neisseria, двигаются с по-мощью ворсинок IV типа (type four pili или TFP). При этом методе движения ворсинки протягива-ются с одного полюса бактерии, связываются с подкладкой и втягиваются назад, создавая значи-тельную силу в 80 пн (пиконьютонов). Подвижность бактерий может регулироваться различными положительными и отрицательными стимулами, такое поведение называется таксисом — например, хемотаксис, фототаксис, механотаксис, магнетотаксис и эластикотаксис. Бактерии одной группы, миксобактерии (Myxobacteria), формируют так называемые плодовые тела, где они превращаются в миксоспоры. Часто бактерии используют так называемое ощущение кворума, то есть меняют свое поведение в зависимости от плотности бактериального населения, замедляя свой рост и иногда увеличивая вероятность горизонтального переноса генов. Препараты живых микроорганизмов А  Б В А.Препарат «раздавленная капля», культура Sarcina sp. Б. Препарат «раздавленная капля», культура лептоспир (тёмнопольная микроскопия) В. Препарат «раздавленная капля», культура микрококков, прижизненная окраска по методу Наканиши (метиленовым синим). Окраска бактерий простыми методами А  Б А.Спирохеты (Borellia sp.)в патологическом материале, окраска генцианвиолетом. Б. Культура возбудителя ботулизма (Clostridium botulinum), окраска фуксином Циля.Окраска бактерий сложными методами. Окраска по Граму: А  Б В  Г . А.Золотистый стафилококк (Staphylococcus aureus) – Грамположителен. Б. Синегнойная палочка (Pseudomonas aeruginosa) – Грамотрицательна. В. Clostridium perfringens – молодые микробные клетки грамположительны, старые микробные клетки грамотрицательны. Г. Актиномицет (Аctinomycetes) – Грамположителен.Окраска кислото-щелоче-спиртоустойчивых микроорганизмов по Цилю-Нильсену  Возбудитель туберкулёза (Mycobacterium tuberculosis) окрашивается по Цилю-Нильсону в красный цвет, фон препарата – голубой.Окраска возбудителя туберкулёза аурамином (МФ)  Возбудитель туберкулёза (Mycobacterium tuberculosis) окрашивается аурамином в золотистый цвет, фон препарата – зеленый.Окраска бруцелл по Козловскому  Бруцеллы (Brucella melitensis) в мазке из патологического материала окрашиваются по Козловскому в красный цвет, остальная микрофлора и клетки ткани – в зеленый или синий цвет.Окраска на выявление биполярности микроорганизмов А  А. Pasteurella multocida в мазке из крови. Окраска по Михину (метиленовым синим); Б  Б. Yersinia pestis в мазке из патологического материала. Окраска по Романовскому-Гимза. Капсулы бактерий А  Б В А.Bacillus anthracis, окраска по Романовскому-Гимзе. Б.Bacillus anthracis, окраска по Михину. В.Klebsiella pneumonia, окраска по Бурри-Гинсу Споры бактерий А  Б В  Г  А. Clostridium tetani, окраска по Граму (вегетативные клетки тёмно-фиолетовые, споры не прокрашиваются); Б. Cl.chauvoei в патологическом материале, окраска по Романовскому-Гимза (споры не прокрашиваются); В. Bacillus anhtracis, окраска по Трухильо (вегетативные клетки красные, споры – зелёные); Г. Bacillus anhtracis, окраска по Мюллеру(вегетативные клетки синие, споры –красные); . КУЛЬТИВИРОВАНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ   Колонии микроорганизмов на плотной питательной среде   Посев по Дригальскому (на сектора плотной питательной среды). Цель посева – получение изолированных колоний.  КЛАССИФИКАЦИЯ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД Простые питательные среды: А. Мясо-пептонный бульон - МПБ (слева – рост синегнойной палочки на МПБ), Б. мясо-пептонный агар – МПА (рост листерий на МПА); В. мясо-пептонная желатина – МПЖ (рост возбудителя сибирской язвы на МПЖ). А  Б  В Специальные питательные среды: Г.Кровяной агар - обогащенная питательная среда для многих видов патогенных микроорганизмов, среда для определения гемолитических свойств микроорганизмов. Питательная основа- Мясо-пептонный агар; Дифференцирующее вещество - кровь (эритроциты); индикатора нет. Д.Сахарный бульон – обогащённая питательная среда для стрептококков и других требовательных микроорганизмов. Питательная основа - мясо-пептонный бульон; Г  .  Д. Специальные среды по особой рецептуре А. Сахарно-кровяной агар Цейслера для анаэробов; Б. Среда Петраньяни для возбудителей туберкулёза; А.  Б. Элективные, дифференциально-диагностические среды Желточно-солевой агар – предназначен для выделения чистой культуры стафилококков с подавлением роста сопутствующих микроорганизмов. Вырастающие стафилококки дифференцируются по наличию лецитовителазы. Питательная основа - мясо-пептонный агар, элективный фактор - 10% Na Cl, Дифференцирующее вещество - лецитин куриного яйца. Индикатора нет. Среда Плоскирева – предназначена для выделения патогенных энтеробактерий (Shigella spp., Salmonella spp.) и подавления роста E.coli. Поскольку рост сопутствующей флоры подавляется не полностью, вырастающие эшерихии отличают по способности расщеплять лактозу. Питательная основа - мясо-пептонный агар; элективный фактор - соли желчных кислот; дифференцирующее вещество – лактоза. Индикатор - феноловый красный.   Дифференциально-диагностические среды  Дифференциально-диагностические среды Гисса (Цветной ряд)   Среда Кода для дифференциации энтеробактерий Среда Кесслера для Е.coli Комбинированные дифференциально-диагностические среды (варианты 3-х сахарного агара)   Плотные элективные, дифференциально-диагностические среды для энтеробактерий   А. среда Эндо (малиновые колонии, часто с металлическим блеском, образуют лактозопозитивные E.coli; Б. Среда Плоскирева (желтые колонии образуют лактозонегативные Salmonella, тёмно-розовые колонии образуют E.coli).   В. Среда Левина Г. Висмут-сульфит агар   Д. Цитратный агар Симмонса Е. Хромогенный агар для дифференциации энтеробактерий Обогатительные (накопительные) среды Назначение – накопление искомых микроорганизмов перед высевом на плотную среду для выделения чистой культуры. Могут содержать элективный фактор для подавления роста сопутствующей микрофлоры или факторы роста, для поддержания роста требовательных микроорганизмов. Состав: Питательная основа; Элективный фактор (не всегда); Факторы роста (не всегда). Примеры: Солевой бульон – обогатительная среда для стафилококков. Рост посторонней микрофлоры подавляется.  Селенитовый бульон – обогатительная среда для сальмонелл. Прочая кишечная микрофлора подавляется. Питательная основа - мясо-пептонный бульон, элективный фактор - селенит натрия.  Транспортные среды   Исследование объектов внешней среды    Золотистый стафилококк - Staphylococcus aureus   A.Мазок из чистой культуры S.aureus; B.Рост культуры S.aureus на МПА; С. Д.  C.Лецитиназная активность S.aureus на желточно-солевом агаре Чистовича; Д.Нуклеазная активность S.aureus на ДНК-агаре  Е.Элективная среда для S. aureus – желточно-солевой агар с хлоридом лития – среда Байрда-Паркера. Лецитиназная активность S. aureus – в виде зон помутнения вокруг колоний Стрептококки - Streptococcus А.   А.Str. agalactiae в мазке из молока (окр.по Граму) Б. Str. pyogenes в мазке из гноя (окраска по Граму)    В. Str. equi – возбудитель мыта лошадей - в мазке из чистой культуры (окраска генцианвиолетом)  Г. Str.pneumoniae – возбудитель диплококковой септицемии – в мазке из крови (окраска по Граму) Культурально-биохимические свойства стрептококков    Гемолиз культуры стрептококков на кровяном агаре (видны зоны просветления агара вокруг колоний).   СAMP-тест: проявление скрытой гемолитической активности культуры Str.agalactiae в виде эффекта «крыла бабочки» в зоне влияния культуры S. aureus Синегнойная палочка - Pseudomonas aeruginosae Мазок из культуры P.aeruginosae, окраска по Граму.  Образование сине-зеленого пигмента при росте P.aeruginosae на жидкой и плотной среде   ОФ-тест на среде Хью-Лейфсона Рост P.aeruginosae на кровяном агаре («радужный лизис») Возбудитель гнилостных процессов протей - Proteus vulgaris   Proteus vulgaris - полиморфные палочки, перитрихи, по Граму красятся отрицательно; 
С D  
Возбудитель сибирской язвы - Bacillus anthracis   Сибирская язва у животных и человека A Б В Г
Б. Культура B.anthracis (окраска по Граму);
Г. Культура B.anthracis (окраска на спору по Мюллеру).   Рост Bacillus anhtracis на кровяном агаре. Колонии в R-форме Рост Bacillus anhtracis на мясо-пептонной желатине. Выявление и идентификация Bacillus anhtracis МФАЛИСТЕРИОЗ Возбудитель листериоза – Listeria monocitogenes А  Б А. L. monocytogenes в пат. материале; Б. Культура L.monocytogenes, окраска по Граму. В Г Д Рост культуры Listeria monocitogenes на плотных питательных средах: В.МПА; Г.PALCAM-агаре; Д.кровяном агаре. В.  Г.  В.CAMP-тест (проявление скрытой гемолитической активности Listeria monocitogenes в виде феномена «крыла бабочки» (3). Г. Тест на выявление лецитиназой активности листерий на лецитиново-угольном агаре. ПАСТЕРЕЛЛЁЗ А.  Б.  А.Пастереллёз -холера кур Б.Поражение лёгких при пастереллёзе Возбудитель пастереллёза – Pasteurella multocida В. Г.  В. Биполярно окрашенные пастереллы в крови (окраска по Михину); Г. Пастереллы в крови (окраска по Романовскому-Гимзе). Д.  Е.  Д. Pasteurella multocida, окраска по Граму (рисунок); E. Рост культуры Pasteurella multocida на кровяном агаре. РОЖА СВИНЕЙ (Эризипелоид)     Возбудитель рожи свиней – Erysipelothrix rusyopathiae     БРУЦЕЛЛЁЗ   А.  Б.  В.  Г. Д.  А.Brucella abortus в патологическом материале, окраска по Козловскому. Б.Культура Brucella melitensis, окраска по Козловскому. В. Рост Brucella sp. на плотной питательной среде. Д. Колонии Brucella sp. на плотной питательной среде. Е. Выявление бруцелл в мазке методом флюоресцирующих антител. СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЁЗА   А. ПОСТАНОВКА РАЗВЕРНУТОЙ РА; Б. Постановка РБП в лунках; СХЕМА ПОСТАНОВКИ РСК   ТУЛЯРЕМИЯ (чума зайцев)    Туляремия – антропозоонозная болезнь. Переносчиками могут быть членистоногие. Возбудитель туляремии – Francisella tularensis А.  Б.  А. Francisella tularensis, чистая культура, окраска по Романовскому-Гимза Б. Идентификация Francisella tularensis в мазке из патологического материала или культуры при помощи МФА. Культуральные свойства Francisella tularensis. Рост на среде Френсиса   ТУБЕРКУЛЁЗ   Положительная туберкулиновая проба у коровы; туберкулёзное поражение лёгких;   Возбудитель туберкулёза в мазке из пат. материала. Окраска по Цилю-Нильсену. А. Б. В.  А. Рост Micobacterium bovis на среде Петраньяни; Б. Рост микобактерий на среде Гельберга; В. Определение «Корд-фактора» патогенных микобактерий.   Колонии микобактерий на плотных питательных средах; ПАРАТУБЕРКУЛЁЗНЫЙ ЭНТЕРИТ  Паратуберкулёз у крупного рогатого скота (истощение, хроническая диарея).  Изменения в тонком кишечнике К.Р.С. при паратуберкулёзе (складчатость)   Micobacterium paratuberculosis в мазке из патологического материала. Окраска по Цилю-Нильсену. АНАЭРОБНЫЕ ИНФЕКЦИИ А.  Б. В. Г. Д.  Е. А. Cl.perfringens в патологическом материале, окраска по Граму Б. Cl.perfringens, культура, окраска по Граму В. Cl.chauvoei в патологическом материале, окраска по Романовскому-Гимза Г. Cl.septicum в патологическом материале, окраска по Мюллеру Д. Cl.nonyi в патологическом материале, окраска по Граму. Е. Cl.tetani в патологическом материале, окраска по Мюллеру. Возбудители анаэробных инфекций А.  Б. В.  Г.А. Рост Cl.septicum на сахарном агаре – сплошная нежная пленка, зона гемолиза. Б. Рост Cl.perfringens на сахарном кровяном агаре – мелкие колонии, вокруг колоний – гемолиз. В. Рост Cl. вotulinum на сахарном кровяном агаре – колонии крупные с корневидными отростками и зоной гемолиза. Г. Рост Cl. tetani на сахарном кровяном агаре – нежные, мелкие колонии с приподнятым центром и периферическими отростками в виде «паучков», вокруг колоний гемолиз.   Эксикатор Анаэростат БИОПРОБА ПРИ АНАЭРОБНЫХ ИНФЕКЦИЯХ   1.«Осиная талия», параличи и гибель мышки при введении непрогретого токсина Cl. botulinum; 2. Ригидность хвоста и лапки, тетанические судороги и гибель мышки при введении экстракта исследуемого материала с токсином Cl.tetani СУЛЬФИТРЕДУЦИРУЮЩИЕ КЛОСТРИДИИ А.  Б. А. Культура Cl.perfringens, окраска по Граму. Б. Колонии Cl.perfringens на КА Рост Cl.perfringens в железосульфитной среде Вильсона-Блера.Колибактериоз и сальмонеллёз А. Б. А. Культура E. coli, окраска по Граму; Б. Культура Salmonella enterica, окраска по Граму. Плотные дифференциально-диагностические, элективные среды для энтеробактерий Г.  Д. Среда Эндо с лактозой(индикатор – кислый фуксин). Г. Рост E. coli; Д. Рост Salmonella. Е  Ж  Среда Левина с лактозой (индикаторы эозин и метиленовым синий). Колонии E.coli фиолетовые или черные с металлическим блеском; колонии Salmonella – серовато-сизые, в тон среды. А Б А . Среда Плоскирева с лактозой. Б. Среда Симмонса с цитратом натрия;В  ГВ. Среда Мак-Конки; Г. Среда Висмут-сульфит агар;  Рост культуры E.coli на МПА.   Дифференциация энтеробактерий по биохимическим свойствам с помощью цветного ряда (сред Гисса) и комбинированной среды 3-х сахарный агар. Среды для выявления и дифференциации энтеробактерий при санитарно-микробиологических исследованиях Среда Кесслер для накопления и дифференциации E.coli   Среда Кода для исследования смывов с поверхностей при выявлении лактозопозитивных энтеробактерий;  А.  Б. Среды для накопления сальмонелл: А.Магниевая среда; Б.Селенитовый бульон; Б.  Среда Раппапорта-Вассилиадиса с соей (RVS-бульон) для накопления сальмонелл  Ксилоза-лизин-деоксихолатный агар (XLD-агар)  Бриллиантовый зелёный агар ЛЕПТОСПИРОЗ А.  Б. Строение лептоспир В. Г. В.Лептоспиры. Препарат «раздавленная капля» в тёмном поле. Г. Культура лкптоспир. Окраска по Граму. Д.  Д.Идентификация лептоспир с помощью МФА КАМПИЛОБАКТЕРИОЗ  Культура Campylobacter |