Юмагузина. Учреждение высшего образования башкирский государственный медицинский университет министерства здравоохранения российской федерации
 Скачать 1.4 Mb.
|
|
Состав: Приготовление: 1.Размешать 30,0 г в 1000 мл дистиллированной воды.2.Прокипятить до тех-пор пока частицы не растворятся.3. Профильтровать через ватно-марлевый фильтр.4.Автоклавировать при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин.Среда является модификацией прописи Сабуро. Рекомендуются для определения фунгистатической активности фармокологических препаратов. Среду используют для культивирования дрожжевых, плесневых грибов и ацидофильных бактерий. А так же с ее использованием увеличивается высеваемость культур C. albicans содержащиеся в крови. Гидролизат казеина и пептический перевар животной ткани – это источником питательных элементов, для того чтобы могли расти грибы и бактерии. Исследуемый продукт инкубируют при 22-25°С в течение 10 суток. Если получили аналогичный рост, то можно сделать вывод, что фунгистическое действие отсутствует. Продукт, обладающий фунгистатическим действием, используют большее соотношение среды и продукта или добавляют приемлемый стерильный компонент, инактивирующий это действие (Reeder, 1989).2.2.1. Приготовление инокулюма Инокулюм готовить путем суспендирования в 10 мл бульоне Мюллера-Хинтона 4-5 морфологически однородных колоний, выросшие на чистой неселективной твердой питательной среде, инкубируют при 37°С в течение 18-24 часов, и нужно суспендировать до мутности, эквивалентной 0,5 стандарта МакФарланд (1,5х108 КОЕ/мл). Инокулюм нужно развести в бульоне Мюллера-Хинтона (разведение 1:100), добавляя 100 мкл инокулюма к 9,9 мл бульона, для того чтобы получить требуемую плотность микробной культуры 5x106 КОЕ/мл. Планшеты нужно инокулировать не более 30 мин после приготовления инокулюма для, того чтобы сохранить необходимое число жизнеспособных клеток.  2.3. Проведение диско-диффузионного методаДДМ основан на способности антибактериальных препаратов диффундировать из пропитанных ими бумажных дисков в питательную среду, угнетающий рост микроорганизмов, посеянных на питательной среде. Ход работы: 1) На чашки Петри внести стерильную питательную среду Мюллера-Хинтона толщиной 0,5 мм. Затем чашки оставить при комнатной температуре для того, чтобы они застыли. 2) Инокулюм 1-2 мл нанести пипеткой на поверхность чашки Петри с питательной средой и распределить по поверхности стерильным шпателем. Приоткрытые чашки Петри подсушить при комнатной температуре около 10-15 мин. 3) Далее через 15 мин после того как проинокулировали на поверхность питательной среды нанести диски с АБП. Аппликацию дисков проводят при помощью стерильного пинцета. Расстояние от края чашки до диска и между дисками 15-20 мм. На одну чашку диаметром 100 мм можно поместить 6 дисков с антибиотиками. 4)После аппликации дисков чашки поставить в термостат кверху дном и инкубировать при температуре 35°С в течение 18-24 ч (зависит от вида микроорганизма). Учет результатов. После инкубации чашки нужно поместить кверху дном на темную матовую поверхность. Диаметр зон задержки роста нужно измерить с точностью до 1 мм с помощью кронциркуля.  2.4. Приготовление рабочих растворов антибиотиков Перед началом работы вещества необходимо довести до единой концентрации 0,1 мг/л. Для этого нужно взять навеску антибиотиков Цефтазидим 1 г, Цефтриаксон 1 г, Цефепим 1г, Цефозолин 1 г развести в 10 мл высоко-очищенной дистиллированной воды. (0,1 мг/л). Амикацин 500 г развести в 5 высоко-очищенной дистиллированной воды (0,1 мг/л). Цефоперазон 2 г развести в 20 мл высоко-очищенной дистиллированной воды (0,1 мг/л). 1)В эппендорф на 1,5 (№1) добавить 990 мкл Мюллера-Хинтона + 10 мкл вещества (цефтазидим). 2)В эппендорф на 1,5 (№2) добавить 900 мкл Мюллера-Хинтона + 100 мкл вещества из первого эппендорфа (2-е повторности). То же повторить для Цефтриаксона, Цефепима, Цефозолина, Амикацина, Цефоперазона. Готовые разведения использовали в день их приготовления. 3)Разведение антибиотиков в планшетах (предварительное). Каждый антибиотик развести 16 раз. В 10 лунок каждо горяда одним наконечником внести 100 мкл бульона Мюллера-Хинтона. Далее в 1-ю лунку внести 100 мкл разведенного антибиотика пепетировать и переносить через лунку, последние 100 мкл, сбросить. И так 16 раз для каждого антибиотика. Как выглядит схематично: сброс     
|