вфывфы. Вирусологическая диагностика натуральной оспы
 Скачать 20.28 Kb.
|
|
ВИРУСОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА НАТУРАЛЬНОЙ ОСПЫ Вирус натуральной оспы относится к семейству Poxviridae роду Orthopoxvirus. Материалом для исследования служат содержимое кожных элементов (папул, везикул, пустул), корочки. При отсутствии кожных поражений (на начальной стадии заболевания) – смывы или мазки из зева и крови. Отбор клинического материала осуществляют медицинские работники, предварительно вакцинированные, с соблюдением правил работы с возбудителями особо-опасных инфекций. Используют методы диагностики: экспресс-метод (РИФ), микроскопический (электронная микроскопия), вирусологический (индикация и идентификация), серологический. Экспресс-метод. Для быстрого обнаружения вируса в культуре клеток используют реакцию иммунофлуоресценции (РИФ). На покровные стекла с культурой клеток, обработанной исследуемым материалом наносят противооспенную люминесцирующую сыворотку, в которой специфические антитела мечены изотиоционатом флуоресцеина. Положительный ответ дают на основании обнаружения в люминесцентном микроскопе ярко-зеленого свечения в цитоплазме клеток, обусловленного наличием антигена вирусов натуральной оспы. Микроскопический метод. Электронная микроскопия является эффективным методом быстрого выявления вируса натуральной оспы. Обнаружение 2-3 и более характерных частиц вируса считается достаточным для постановки диагноза. В отпечатках из повреждений кожи и отделяемого носовой части глотки можно обнаружить тельца Гварниери, которые располагаются в цитоплазме вблизи ядра. В стадии папулы или везикулы ответ можно получить через 30 минут. Вирусологический метод. Исследуемый материал вводят в 12-дневный куриный эмбрион, инкубируют при t 35°С 48-72 часа. При вскрытии эмбрионов на хорион-аллантоисной оболочке (ХАО) выявляют специфические элементы (бляшки). Они круглой формы серо-белого цвета с гладкой блестящей выпуклой поверхностью с ровным краем, диаметром 0,5-1 мм. Идентификацию проводят с помощью специфической сыворотки, содержащей вируснейтрализующие антитела 1. в РН на курином эмбрионе из элементов поражения ХАО готовят 20% взвесь и после центрифугирования надосадочную жидкость соединяют со специфической сывороткой и эту смесь вводят в свежий куриный эмбрион. Эмбрион остается живым и бляшки отсутствуют. 2. в РТГА с надосадочной жидкостью 3. в РСК с надосадочной жидкостью Можно обнаружить вирус натуральной оспы путем обработки культур клеток исследуемым материалом. Индикацию проводят: 1. по ЦПД. В клеточном монослое появляются очаги дегенерации, где выявляются округленные и многоядерные клетки, утрачивающие отросчатость 2. в реакции гемадсорбции с куриными эритроцитами. Идентифицируют вирусы натуральной оспы в культурах клеток в реакции нейтрализации ЦПД, в реакции торможения гемадсорбции с иммунной сывороткой, РСК, РИФ, РОПГА. Серологический метод. Выявляют нарастание титров антител в парных сыворотках крови обследуемого в реакциях: РН на куриных эмбрионах, РН ЦПД, РТГА, РСК. Тема 36 Клиническая микробиология - это раздел частной медицинской микробиологии, который изучает микробиологическую диагностику заболеваний, вызываемых условно-патогенными микроорганизмами. Во второй половине двадцатого века были обозначены заболевания, которые вызываются микроорганизмами нормальной микрофлоры. Эти микроорганизмы назвали условно-патогенными потому, что их действие на организм человека проявляется лишь при определенных условиях (снижении иммунитета, нарушении микробиоценозов, когда микробы приобретают устойчивость к антибиотикам, способность вырабатывать токсические вещества и т.д.). Они способны вызывать гнойно-воспалительные заболевания, которые могут регистрироваться в лечебных заведениях разного профиля. К условно-патогенным микроорганизмам относятся многие представители семейства кишечных бактерий (клебсиеллы, протей и др.), стафилококки, стрептококки, синегнойная палочка, неспорообразующие анаэробы и др. Забор проб клинического материала Общим требованием к процедуре забора проб является исключение возможности дополнительной контаминации исследуемого материала. Поэтому исследуемый материал от больных собирают в посуду, соблюдая правила асептики. Материалом для бактериологического исследования являются: раневое отделяемое, мокрота, экссудаты, пунктаты, выпоты, биоптаты, фекалии, моча, отделяемое носоглотки, кровь и т. д. Выбор материала, подлежащего исследованию, зависит от характера и особенностей предполагаемого патологического процесса, патогенеза заболевания, его стадии, места максимальной локализации возбудителя и путей его выделения в окружающую среду и т. д. Раневое отделяемое Наиболее правильный способ взятия жидких материалов - объемно с помощью стерильного шприца. Отбор материала тампоном производят только при невозможности осуществления объемного метода. При аспирации материала из закрытых полостей кожу в месте прокола дезинфицируют антисептиками в течение 1-2 мин. Биоптаты из ран получают путем иссечения участка ткани из глубоких слоев раны или производят забор отделяемого тампоном после тщательной хирургической обработки раны с иссечением некротизированных тканей, промывания раневой поверхности физиологическим раствором и 70% этиловым спиртом для удаления поверхностно вегетирующей микрофлоры. Моча Для исследования мочи используют, как правило, среднюю порцию утренней мочи при естественном мочеиспускании после тщательного туалета наружных половых органов. Кровь По возможности взятие проб крови следует проводить до начала антибактериальной терапии. Если больной уже получает антибиотики, кровь следует забирать непосредственно перед очередным введением препарата. Кровь на исследование отбирают на высоте температуры и озноба шприцем из периферической вены после тщательной дезинфекции кожи в области венопункции (обрабатывают кожу 70% спиртом и после этого раствором антисептика, например йодопирона. йодоната или хлоргексидина). Забор крови производят после подсыхания обработанной поверхности и немедленно вносят ее над спиртовкой в сосуд с питательной средой в соотношении 1:10 и перемешивают. Слизистое отделяемое верхних дыхательных путей Взятие слизистого отделяемого верхних дыхательных путей производят тампоном натощак или через 2 часа после приема пищи и полоскания горла дезинфицирующим раствором и кипяченой водой. Мокрота Мокроту собирают утром натощак при снятых зубных протезах (если таковые имеются) после туалета полости рта (чистки зубов, полоскания зева и полости рта раствором антисептика и затем кипяченой водой) в стерильную банку во время приступа кашля или глубокого вынужденного покашливания. В случаях, когда отхождение мокроты затруднено, пациенту накануне дают отхаркивающие средства. Отделяемое из влагалища, шейки матки и цервикального канала Отделяемое из влагалища, шейки матки и цервикального канала берут на гинекологическом кресле под контролем зеркала с помощью ватного тампона или бактериологической петли. Транспортировка патологического материала в лабораторию Патологический материал для микробиологического исследования должен быть в течение 1-2 часов доставлен в лабораторию. При невозможности доставки в указанные сроки весь биоматериал хранят в холодильнике. Можно использовать среду для контроля стерильности и как транспортную, и как среду накопления. Непременное условие для получения адекватного результата - немедленная доставка проб в лабораторию. Забор проб и транспортировка патологического материала при исследовании на анаэробные бактерии Образцы клинического материала для исследования на анаэробы во избежание контакта с атмосферным воздухом получают при использовании инвазивных методов забора. Основное требование то же, что и при исследованиях на аэробную флору: предупреждение контаминации клинических образцов нормальной микрофлорой человека, сохранение жизнеспособности возбудителей и количественного соотношения микроорганизмов в исследуемых материалах. Для исследования на анаэробы в основном используются пунктаты закрытых полостей, абсцессов, тканевые и пункционные биопсии, транстрахеальный и другие аспираты, кровь, асцитическая жидкость, пункционная моча, суставная жидкость, костный мозг. Материалы, полученные при бронхоскопии или взятые с поверхности ран, а также мокрота, смывы из верхних дыхательных путей, естественно выпущенная моча не подлежат исследованию на анаэробы. При транспортировке необходимо максимально исключить контакт взятых образцов с кислородом воздуха и обеспечить быструю доставку в лабораторию. Для забора проб и транспортировки используют: пенициллиновые флаконы и другую посуду, заполненные бескислородной трехкомпонентной газовой смесью, углекислым газом или транспортной средой, закрытые резиновыми пробками и завальцованные алюминиевыми колпачками. Для забора и транспортировки могут быть использованы шприцы, которыми производится забор материала. В этом случае необходимо, чтобы объем материала был достаточно большим, а игла закрыта стерильной резиновой пробкой. Жидкие образцы, тканевые биопсии можно доставлять в пробирках с СО2, закрытых резиновыми пробками. Можно использовать транспортные среды типа модифицированной среды Cary-Blair, разлитые по 10-12 мл в пробирки, редуцированные перед забором материала на кипящей водяной бане в течение 15 минут и перекрытые затем резиновыми пробками. Взятый материал помещается на дно пробирки. Образцы проб нельзя хранить в холодильнике, так как некоторые виды анаэробов не переносят охлаждения и, кроме того, абсорбция кислорода быстрее происходит при низких температурах. |