Ответы микробиологии. микра 2. Вопросы для подготовки к экзамену для студентов спо специальность Сестринское дело
 Скачать 0.68 Mb.
|
|
Исходы взаимодействия вируса с клеткой Абортивный процесс-новые вирусные частицы не образуется, так как инфекционный процесс прерывается на одном из этапов Продуктивный процесс-завершается образованием нового поколения вирионов и гибелью (лизисом) зараженных клеток (цитолитическая форма). Некоторые вирусы выходят из клеток, не разрушая их (нецитолитическая форма). Интегративный тип, или вирогения — характеризуется встраиванием (интеграцией) вирусной ДНК в виде провируса в хромосому клетки и их совместным сосуществованием (совместная репликация).  50. Методы культивирования вирусов (в культуре клеток, в развивающихся куриных эмбрионах, в организме лабораторных животных). Виды и происхождение культур клеток, питательные среды, применяемые для их выращивания. Методы культивирования. 1.На лабораторных животных. Заражают животных (подкожно, внутримышечно, внутрибрюшинно), которые чувствительны к определенным вирусам: хорьков - вирусом гриппа, кроликов - вирусом бешенства, обезьян - вирусом полиомиелита. Индикация вируса проводится по признакам заболевания. Недостаток места - е все вирусы можно культивировать на животных, например, животные невосприимчивы к вирусам человека. 2. В куриных эмбрионах. Заражают куриный эмбрион (аллонтоисная полость, хорион-аллонтоисная оболочка, амниотическая полось, желточный мешок, сам эмбрион). Куриный эмбрион - очень удобен. Он защищён от попадания других микробов (стерильных), техника работы с ним проста, можно накопить большое количество вирусов. Индикация: а) по специфическим поражениям на хорион-аллантоисной оболочке, по гибели эмбриона. б) по реакции склеивания элитроцитов-реакции гемагглютинации (РГА). Недостатки метода: a) не вирусы (вирус полиомиелита, вирус ящура) можно вырастить в куриных эмбрионах: б) невозможно обнаружить микроб без вскрытия эмбриона; в) в нём много загрязняющих белков и других соединений. 51. Основные способы индикации (обнаружения) вирусов с использованием культур клеток (по ЦПД, по наличию включений, гемадсорбции, бляшкообразованию). Способы обнаружения (индикации) вирусов в тканевой культуре. Вирусы можно обнаружить следующим образом. 1.По цитопатическому действию (ЦПД). В результате размножения вирусов в клетках происходят морфологические изменения клеток (вакуолизация цитоплазмы, деструкция митохондрий, округление клеток). Часть клеток погибает и отслаивается от стекла. Вместо сплошного монослоя остаются отдельные клеточные островки, ЦПД обнаруживают под микроскопом (х8). По ЦПД можно не только обнаружить, но и идентифицировать вирусы. Например, вирус полиомиелита вызывает мелкозернистую деструкцию клеток3 аденовирусы вызывают образование скоплений клеток в виде виноградных гроздьев; вирус кори вызывает образование симпластов- многоядерных клеток. 2. Пообразованию включений. Включения- скопления вирусов в клетках. Они имеют различную форму и размеры. Их окрашивают по Романовскому-Гимзе или флюорохромами и наблюдают под микроскопом. 3. Погемадсорбции. Клетки, зараженные вирусами, эритроциты. Вирусы выходят на поверхность клеток и связывают эритроциты. Эритроциты добавляют к культуре и через некоторое время промывают физиологическим раствором. На поверхности клеток под микроскопом видны прилипшие эритроциты в виде разнообразных фигур. 4.Бляшки или негативные колонии-ограниченные участки, состоящие их дегенеративных клеток, которые вирусы способны образовать в многослойны клетки пол агаровым покрытием. Одна бляшка соответствует потомству одного виронаю. Титр вируса выражает числом бляшкообразующих единиц в 1мл. могут адсорбировать 52. Методы диагностики вирусных инфекций (вирусологический, серологический), их цели, принципы проведения. Методы диагностики вирусных инфекций. Вирусологический метод Цель: обнаружение вирусов Включает в себя культивирование и идентификацию. Материалами могут быть: кровь, различные секреты, биологические материалы органов и тканей человека. Кровь- арбовирусные заболевания Слюна- вирус бешенства, простого герпеса Носоглотка- грипп, корь, риновирус, аденовирус Фекалии - энтеровирус, ротовирусы, реовирус . Для выделения вирусов используют культуры клеток, куриные эмбрионы, иногда лабораторных животных. Источник получения клеток – злокачественные и нормальные ткани: эпителиальные, фибропластического типа. Вирусы хорошо размножаются в культурах клеток человека или почечных клеток обезьян. Большинство патогенных вирусов отличается по наличию тканевой или типовой специфичности. Серологический метод Цель: Метод основан на установлении значительного прироста вирусных антител в течении болезни. В-С антиген- антител 1)Взятие материалов для исследования: в большинстве – сыворотка крови. 2) выбор серологической реакции для данного случая зависит от цели исследования, предполагаемого заболевания, фазы болезни, материала для исследования, чувствительности реакции, возможностей конкретной лаборатории. Для выявления Ат, а также Аг используют реакции агглютинации (РА), пассивной гемагглютинации (РПГА)), иммунофлюоресценции (РИФ), торможения гемагглютинации (РТГА), преципитации, флоккуляции, реакцию связывания комплемента (РСК) и др. 3) постановка серологической реакции, 4) регистрация серологической реакции с целью определения присутствия серологических маркеров инфекции. Обоснованием для постановки диагноза: а) обнаружение антител к возбудителю болезни или диагностическом титре, т.е. в таком разведении сыворотки, в котором реакция может быть положительна только у больных и отрицательна у здоровых; б) нарастание титра антител при повторном исследовании в динамике болезни, что позволяет отличить заболевание от поствакцинального или постинфекционного иммунитета. _ Серологическая идентификация неизвестных микробов, выделенных при бактериологическом методе диагностики инфекционных болезней. Обоснованием для отнесения микроба к определенной серогуппе, сероварианту или виду является: а) взаимодействие микроба с адсорбированной моноспецифической сывороткой, содержащей антитела только к специфическим для микроба антигенам (из таких сывороток в процессе их производства сорбируются антитела к групповым антигенам); б) взаимодействие микроба с моноклональными антителами, полученными методом гибридомной техники, т.е. метода культивирования гибрада из плазматической клетки, синтезирующей антитела одной специфичности, с опухолевой клеткой, способной к длительному размножению в культуре; в) взаимодействие микроба с диагностической сывороткой в разведении, составляющем не менее половины титра этой сыворотки 53. Бактериофаги: определение, свойства фагов как представителей вирусов, классификация фагов по морфологии, организация генома. Строение Т-чётных фагов. Вирулентные и умеренные фаги. Репродукция вирулентных бактериофагов. Практическое применение бактериофагов (лечение, профилактика, диагностика). Фаготипирование бактерий. Выпускаемые лечебно-профилактические бактериофаги и их целевая направленность. Определение чувствительности бактерий к препарату лечебного бактериофага. Бактериофаги- вирусы, избирательно поражающие бактериальные клетки. Свойства как вирусов: -неклеточная форма жизни -содержит ДНК или РНК -отсутствует белок синтезирующей системы и самостоятельный метаболизм. -облигатные внутриклеточные препараты на генетическом уровне Морфология: 1-нитевидные фаги 2-фаги без отростка 3-фаги с аналогом отростка 4-фаги с коротким отростком 5-фаги с длинными не сокращающим отростком 6-фаги с длинным сокращающимся отростками. Строение Т- четного фага. -головка -хвостовой отросток -фибриллы -нуклеиновая кислота (ДНК и РНК) -капсид (белковая оболочка) -отросток (внутренний стержень) -сократительный чехол -базальная пластина Вирулентные и умеренные фаги Вирулентные-вызывают продуктивную инфекцию, при которой происходит репродукция фагов и лизис бактериальной клетки. Умеренные фаги-вызывают интегративную инфекцию, информируя бактериальную клетку, встраивается в ее генетический аппарат и репродуцируется в процессе деления пленки, не вызывая ее лизис. Фагодиагностика (фагоиндикация) – выделение бактериофагов из организма больного и объектов внешней среды (косвенно свидетельствует о наличии в материале соответствующих бактерий). Фаготерапия – применение бактериофагов с целью лечения инфекционных заболеваний (например, пиобактериофаг, брюшнотифозный и холерный бактериофаги). Фагопрофилактика – применения бактериофагов с целью предупреждения заболеваний в эпидемическом очаге (например, дизентерийный, сальмонеллезный и стафилококковый бактериофаги). Фаготипирование бактерий - это определение принадлежности выделенного бактериального штамма к тому или иному фаготипу. Применяется, как правило, в интересах эпидемиологического анализа. Лечебно-профилактические фаги Содержат только вирулентные фаги. Представляют стерильные очищенные фильтраты фаголизатов соответствующих видов бактерий. Они в отличии от антибиотиков не угнетают нормальную микрофлору, не подавляя иммунной защите,не обладают токсическим действием.
54. Природные микробиоценозы. Экологические связи в микробиоценозах. Микрофлора почвы. Источники и пути попадания патогенных микробов в почву. Условия и сроки их выживания в почве. Микрофлора водоемов. Источники и пути попадания патогенных микробов в водоемы. Условия и сроки выживания микробов в воде. Микробиоценоз – это совокупность популяций разных видов микроорганизмов, которые обитают в определенном биотопе (в водоеме, в полости рта). Природные микробиоценозы-это микроорганизмы, которые обитают в воде, почве, воздухе, организма человека и животных. Экологические связи в микробиоценозах -Нейтрализм – обитающие в одном биотопе популяции не оказывают друг на друга ни стимулирующего, ни подавляющего действия. -Симбиоз – обе популяции извлекают для себя пользу. -Сотрудничество – слабая степень взаимозависимости симбионтов. -Мутуализм – полная степень взаимозависимости симбионтов, при которой они выполняют разные, дополняющие друга, жизненные функции. - Комменсализм (нахлебничество) – комменсалы питаются остатками пищи хозяина, которые в его рационе не имеют значения. -Конкуренция (антагонизм) – подавление одной популяции другой. - Паразитизм – одна популяция (паразит), нанося вред другой популяции (хозяину), извлекает для себя пользу. Микрофлора почвы. Почва-естественная среда микроорганизмов, принимающие участие в круговороте веществ в природе. В почве находится несколько миллиардов микроорганизмов гнилостные аэробные и анаэробные бактерии, актиномицеты, грибы. Болезнетворные микроорганизмы попадают в почву с выделениями больных людей и животных, с отбросами, с трупами крыс и других животных. Возбудители кишечных инфекций могут находиться в почве от нескольких дней до месяца, иногда дольше. Споры сибирской язвы, ботулизма, столбняка и газовой гангрены могут сохраняться в почве десятки лет. Микрофлора водоемов. Источники и пути попадания патогенных микробов в водоемы. В морях, реках, озерах, и других водоемах, а также в грунтовых водах содержится значительное число видов микроорганизмов. Состав микрофлоры зависят от химического состава воды, температуры, содержания O2, PN, питательных веществ Различают пресные и морские воды. Пресные разделяют на поверхностные (реки, ручьи), стоящие (озера, пруды, водохранилища), подземные (почвенные, грунтовые), атмосферные (дождь, снег) К постоянно живущим в воде микроорганизмам относятся Azotobacter, Nitrobacter, Micrococcus, Proteus,Pseudomonas, Spirillum и др. Характер микрофлоры. Аутохтонная микрофлора – совокупность микроорганизмов, постоянно живущих и размножающихся в воде. Аллохтонная микрофлора – совокупность микроорганизмов, случайно попавших в воду и сохраняющихся в ней сравнительно короткое время. Источник загрязнения: бытовые и промышленные стоки 55. Микрофлора атмосферного воздуха, воздуха жилых помещений и лечебно-профилактических учреждений. Пути попадания, условия и сроки выживания микробов в воздухе. Микрофлора атмосферного воздуха Воздушным путем могут распространяться патогенные микробы, вызывающие болезни, животным человека В воздухе распространены бактерии, водоросли, дрожжи, споры, грибов на значительной высоте. Воздух является неблагоприятной средой для микроорганизмов. Отсутствие патогенных веществ, влаги, оптимальной температуры, губительные солнечные лучи и высушивание приводит к быстрой гибели микробов в воздухе. Микрофлору воздуха разделяют на: -резидентную (постоянно обнаруживаемую) -временную (обнаруживают спорадически) Микрофлора воздуха жилых помещений -В частных домах бактериальная обсеменённость воздуха выше, чем в благоустренных квартирах -Чем ниже этаж, тем больше бактерий в воздухе -Количество бактерий в воздухе жилых помещений не зависит от времени года -Днем бактериальная загрязненность снижается Микрофлора ЛПУ Классы чистоты для ЛПУ: в 1м3 воздуха\КОЕ, м3 -Особо чистые (А) Операционные, родильные залы, асептические боксы для ожоговых, Гематологических больных (до начала работы: не более200; вовремя: не более500) -Чистые (Б) Процедурные, перевязочные, аптеки, залы реанимации (до начала работы: не более500; вовремя: не более750) -Условно чистые (В) Палаты хирургических отделений, коридоры, примыкающие к операционным, родильным, чистые залам, смотровые, боксы и палаты инфекционных отделений, ординаторские, материальные, кладовые чистого белья (до начала работы: не более750; вовремя: не более1000) Грязные(Г) Коридоры и помещения административных зданий, туалеты, санитарные комнаты, лестничные марши лечебно-диагностических корпусов, комнаты для грязного белья и временного хранения отходов (количество колоний образующих единиц не нормируется) Пути попадания, условия и сроки выживания микробов в воздухе. Микроорганизмы (патогенные) попадают в воздушную среду в ЛПУ от людей-больных или бактерионосителей выделяясь главным образом через дыхательные пути. 56. Необходимость изучения и контроля состава микрофлоры окружающей среды. Понятие о микробном числе и санитарно-показательных микроорганизмах. Необходимость изучения микрофлоры окружающей среды. Микрофлору окружающей среды необходимо изучать для того, чтобы знать о наличии или отсутствии патогенности в микроорганизмах (бактерии, грибы, вирусы) ОМЧ-количество бактерий, имеющихся в определенном объёме, исследуемом материала. Этот показатель служит лишь для приближенных относительных оценок. Методы определения ОМЧ: -прямой подсчет бактерий в счетных камерах, под обычным или фазово-контрастным микроскопом -количественный посев на плотные питательные среды (менее точный) Санитарно-показательных микроорганизмах СПМ-микроорганизмы, постоянно обитающие в естественных полостях тела человека и животных 1.Группа А включает обитателей кишечника человека и животных, эти микроорганизмы расценивают как индикаторы фекального загрязнения. В нее входят бактерии группы кишечной палочки (БГКП) – эшерихии, энтерококки, протеи, сульфитвосстанавливающие клостридии (С. perfringens), термофилы, бактериофаги, ацинетобактер, аэромонады. 2.Группа В включает обитателей верхних дыхательных путей и носоглотки. В нее входят a- и b-гемолитические стрептококки, стафилококки (плазмокоагулирующие, лецитиназоположительные, гемолитические и антибиотикоустойчивые). 3.Группа С включает сапрофитические микроорганизмы, обитающие во внешней среде, их расценивают как индикаторы процессов самоочищения. В нее входят бактерии-аммонификаторы, бактерии-нитрификаторы, некоторые спорообразующие бактерии, грибы, актиномицеты, целлюлозобактерии, сине-зеленые водоросли. С помощью количественного метода выявляют степень загрязнения, исследуемого объекта, его эпидемиологическую опасность. 57. Методы изучения бактериальной загрязненности воздуха. Определение микробного числа воздуха при посеве аспирационным методом. Критерии бактериальной загрязненности воздуха в лечебных учреждениях (привести примеры). Методы изучения бактериальной загрязненности воздуха. -Седиментационный\ метод Коха. Суть метода заключается в осаждении микробных частиц и капель аэрозоли на поверхность плотной питательной среды под действием силы тяжести. -Аспирационный метод микробиологического исследования воздуха с применением прибора Кротова основан на использовании ударного действия воздушной струи, протянутой через щель прибора, на поверхность МПА в чашках Петри. Аппарат Кротова – это цилиндрический прибор, внутри которого имеется электромотор с центробежным вентилятором. Аспирационный метод – метод Кротова, является более точным количественным методом определения микробного числа воздуха. Посев воздуха осуществляется с помощью аппарата Кротова. Прибор Кротова устроен таким образом, что воздух с заданной скоростью просасывается через узкую щель плексигласовой пластинки, закрывающей чашку Петри с питательным агаром. При этом частицы аэрозоля с содержащимися на них микроорганизмами равномерно фиксируются по всей его поверхности, т.к. чашка находится в постоянном вращении. Для определения общего количества сапрофитных бактерий пропускают 100 л воздуха, а для определения дрожжевых и плесневых грибов и санитарно-показательных микроорганизмов – 250 л. Для определения роста сапрофитных бактерий используют МПА; плесневых грибов и дрожжей – сусло-агар и агар Сабуро; золотистого стафилококка – желточно-солевой агар; для выделения гемолитических стафилококков – кровяной агар с добавлением генцианового фиолетового (среда Гарро); для патогенных микроорганизмов – соответствующие элективные питательные среды Критерии бактериальной загрязненности воздуха в лечебных учреждениях (привести примеры). В помещениях операционного блока, послеоперационных платах, реанимационных халах, в том числе для ожоговых больных палат интенсивной терапии, родовых –общее число микробов должно быть не более 200 КОЕ\м3 до начала работы, и не более 500 КОЕ\м3 во время работы, СПМ не должно быть 58. Определение микробного числа воды. Колиформные бактерии как показатель фекального загрязнения воды. Определение наличия колиформных бактерий методом мембранных фильтров. Определение микробного числа воды Для оценки санитарного состояния исследуют: 1)водопроводную воду 2)дистиллированную воду 3)воду открытых водоемов На плотных средах колонии мелкие или средние (0,5-2,5млк), полупрозрачные, плоские, гладкие, редко шероховатые. Обладают ферментативной активностью: Разлагают глюкозу, мальтозу, лактозу, сахарозу с образованием кислоты. Фактор патогенности. 1) Белок М гласный фактор. Определяет адгезивные свойства, угнетает фагоцитов, обладает свойствами суперантигена 2) Капсула- маскирует стрептококки за счет гиалоуроновой кислота, аналогичной гиалуроновой кислоте в тканях хозяина. 3) Стрептококки вызывают выраженную воспалительную реакцию, в значительной степени обусловленную секрецией более 20 растворимых факторов - ферментов (стрептолизины S и О, гиалуронидаза, ДНК- азы, стрептокиназа, протеазы) и эритрогенных токсинов. Роль в патологии человека Основные значения стрептококки серологической группы А. (Streptococcus pyoqenes) включающий несколько десятков типов по М -антигену. Он является возбудителем ангины, скарлатины, ревматизма, некоторых кожных поражений. В экологическом отношении - это типичный облигатный паразит человека с основной локализацией на слизистой зева и воздушно- капельным путем передачи. Во внешней среде менее стоек, чем золотистый стафилококк. Метод микробиологической диагностики стрептококковых заболеваний. Микробиологическая диагностика: материал-гной, моча, кровь, мокрота. Бактериоскопический метод: окраска по Граму мазков из патологического материала. При положительно результате обнаруживают цепочки грам «+» кокков. Бактериоскопический метод: Исследуемый материал засевают на кровяной АГАР в чашку Петри. После инкубации при 37 °C в течении 24ч отмечают характер колоний и наличие вокруг них зон гемолиза. Из части материала, взятого из колоний и наличие вокруг них зон гемолиза. Из части материала готовят мазок окрашивают по Граму и микроскопируют. Для получения чистой культуры пересевают в пробирки со скошенным агаром и сахарным бульоном. На кровяном агаре стафилококк образует мелкие мутноватые колонии. В бульоне стрептококк дает придонно-пристеночный рост виде хлопьев, оставляя среду прозрачной. По характеру гемолиза на кровяном агаре стрептококки делятся на 3 группы: 1)негомологические 2)гомологические 3) β – гомологические, образующие вокруг образующие вокруг колонии полностью прозрачную зону гемолиза. Индефикация Серогруппу определяют в реакции преципитации с полисахаридным преципитиногеном С. Серовар определяют в реакции агглютинации. Выявленную культуру стрептококка проверяют на чувствительность к антибиотикам методом дисков. Профилактика специфической – нет. Неспецифическая - выявление, лечение больных; проведение планового обследования медперсонала, вакцинация стрептококковый бактериофаг(жидкий) – фильтрат фаголизата стрептококка (наружно); О-стрептолизин сухой (лиофильно высушенный фильтрат бульонной культуры стрептококка – активного продуцента О-стрептолизина. Применяется для постановки серологических реакций – определения анти-О-стрептолизина в сыворотке крови больных). Присоединяя к вакуумному насосу. Если анализируют несколько проб воды, то для каждой из них используют отдельный фильтр. После пропускания воды фильтры промокают на поверхность среды Эндо в чашки Петри, располагая их на питательной среде фильтрующей стороной вверх. Затем чашку инкубируют в термостате 24ч. При 37 °C. В Эндо входит лактоза, индикатор и МПА, поэтому БГКП образуют колонии красного цвета металлическим отливом. Их подсчитывают, готовят мазки, окрашивают по Граму и проверяется Оксидазоотрицательные бактерии, разлагающие лактозу до кислоты и газа, обнаруженные на фильтре, позволяют дать положительный ответ о наличие в воде БГКП. При анализе питьевой воды вычисляют количество БГКП, содержащихся в 100 мл. Для дифференциации ОКБ (общих колиформных бактерий) и ТКБ (термотолерантных колиформных бактерий) каждую выросшую на фильтре колонию БГКП засевают в две пробирки с лактозной средой. Одну из пробирок предварительно прогревают до 44ºС с тем, чтобы инактивировать ОКБ. Затем эту пробирку инкубируют при этой же температуре в течение 24 ч (для подтверждения наличия ТКБ). Вторую пробирку с посевом ставят в термостат при температуре 37ºС на 48 ч, чтобы убедиться в наличии ОКБ. 59. Стрептококки. Их классификация и биологические свойства, факторы патогенности. Роль в патологии человека. Методы микробиологической диагностики стрептококковых заболеваний. Препараты для специфической профилактики и терапии. Таксономия. Стрептококки относятся к семейству Streptococaceae, род:1) Streptococcus,2) Enterococcus,3) Aerococcus,4) Leuconostoc,5) Pediococcus,6) Lactococcus. Наиболее важны 1) и 2). Морфологические и культуральные свойства. Стрептококки — это мелкие(0,5-2,0мкм) шаровидные клетки, располагающиеся цепочками или парами, грамположительные, спор не образуют, неподвижные. Большинство штаммов образует капсулу, состоящую из гиалуроновой кислоты. Клеточная стенка содержит белки (М-, Т- и R-антигены), углеводы (группоспецифические) и пептидогликаны. Легко переходят в L-формы. Возбудители растут на средах, обогащенных углеводами, кровью, сывороткой, асцитической жидкостью. На плотных средах обычно образуют мелкие серые колонии. Капсульные штаммы стрептококков группы А образуют слизистые колонии. На жидких средах стрептококки обычно дают придонный рост. Стрептококки — факультативные анаэробы. По характеру роста на кровяном агаре они делятся на культуральные варианты: а-гемолитические (зеленящие), в-гемолитические (полный гемолиз) и негемолитические. Стрептококковые инфекции-группа острых и хронических,не- и спецефич.заболеваний человека.Делятся на острые и хронические заболевания. Резистентность. Чувствительны к физическим и химическим факторам окружающей среды, могут длительно сохранять жизнеспособность при низких температурах. Устойчивость к антибиотикам приобретается медленно. Патогенность. На основе полисахаридного антигена делятся на серогруппы (А, В, С..О). Стрептококки группы А вырабатывают более 20 веществ, обладающих антигенностью и агрессивностью. На поверхности клетки имеется белковый антиген М, который тесно связан с вирулентностью (препятствует фагоцитозу). Этот белок определяет типовую принадлежность стрептококков. Кофакторам патогенности относят стрептокиназу (фибринолизин), ДНКазу, гиалуронидазу, эритрогенин. Наиболее патогенны для человека гемолитические стрептококки группы А, называемые S. pyogenes. Этот вид вызывает у человека многие болезни: скарлатину, рожу, ангину, острый эндокардит, послеродовой сепсис, хронический тонзиллит, ревматизм. Иммунитет: постинфекционный нестойкий, ненапряженный. Микробиологическая диагностика. Материал для исследования – гной, моча, кровь, мокрота. Бактериоскопический метод: окраска по Граму мазков из патологического материала. При положительном результате обнаруживают цепочки грам «+» кокков. Бактериологический метод: Исследуемый материал засевают на кровяной агар в чашку Петри. После инкубации при 37 °С в течение 24 ч отмечают характер колоний и наличие вокруг них зон гемолиза. Из части материала, взятого из колоний, готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют. Для получения чистой культуры 1—3 подозрительные колонии пересевают в пробирки со скошенным кровяным агаром и сахарным бульоном. На кровяном агаре Streptococcus pyogenes образует мелкие мутноватые круглые колонии. В бульоне стрептококк дает придонно-пристеночный рост в виде хлопьев, оставляя среду прозрачной. По характеру гемолиза на кровяном агаре стрептококки делятся на три группы: 1) негемолитические; 2) а-гемолитиче-ские 3) β-гемолитические, образующие вокруг колонии полностью прозрачную зону гемолиза. Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация выделенной культуры по антигенным свойствам. По данному признаку все стрептококки делят на серологические группы (А, В, С, D и т. д.). Серогруппу определяют в реакции преципитации с полисахаридным преципитиногеном С. Серовар определяют в реакции агглютинации. Выявленную культуру стрептококка проверяют на чувствительность к антибиотикам методом дисков. Серодиагностика: устанавливают наличие специфических антигенов в крови больного с помощью РСК или реакции преципитации. Антитела к О-стрептолизину определяют для подтверждения диагноза ревматизма. Лечение: Антибиотики широкого спектра действия (пенициллины, устойчивые к в-лактамазе). При выделении стрептококка А – пенициллин. Химиотерапия антибиотиками, к которым выявлена чувствительность микроба – левомицетин, рифампицин. Профилактика: специфической – нет. Неспецифическая - выявление, лечение больных; проведение планового обследования медперсонала, вакцинация стрептококковый бактериофаг(жидкий) – фильтрат фаголизата стрептококка. Применятся наружно, внутрикожно, в/м., О-стрептолизин сухой (лиофильно высушенный фильтрат бульонной культуры стрептококка – активного продуцента О-стрептолизина. Применяется для постановки серологических реакций – определения анти-О-стрептолизина в сыворотке крови больных). 60. Стафилококки. Их классификация и биологические свойства, факторы патогенности. Роль в патологии человека. Методы микробиологической диагностики стафилококковых процессов. Препараты для специфической профилактики и терапии. Таксономия: относятся к отделу Firmicutes, семейству Мicrococcacae, роду Staphylococcus. К данному роду относятся 3 вида: S.aureus, S.epidermidis и S.saprophyticus. Морфологические свойства: Все виды стафилококков представляют собой округлые клетки. В мазке располагаются несимметричными гроздьями. Клеточная стенка содержит большое количество пептидогликана, связанных с ним тейхоевых кислот, протеин А. Грамположительны. Спор не образуют, жгутиков не имеют. У некоторых штаммов можно обнаружить капсулу. Могут образовывать L-формы. Культуральные свойства: Стафилококки — факультативные анаэробы. Хорошо растут на простых средах. На плотных средах образуют гладкие, выпуклые колонии с различным пигментом, не имеющим таксономического значения. Могут расти на агаре с высоким содержанием NaCl. Обладают сахаролитичес- кими и протеолитическими ферментами. Стафилококки могут вырабатывать гемолизины, фибринолизин, фосфатазу, лактамазу, бактериоцины, энтеротоксины, коагулазу. Стафилококки пластичны, быстро приобретают устойчивость к антибактериальным препаратам. Существенную роль в этом играют плазмиды, передающиеся с помощью трансдуцирующих фагов от одной клетки к другой. R-плазмиды детерминируют устойчивость к одному или нескольким антибиотикам, за счет продукции в-лактамазы. Антигенная структура. Около 30 антигенов, представляющих собой белки, полисахариды и тейхоевые кислоты. В составе клеточной стенки стафилококка содержится протеин А, который может прочно связываться с Fc-фрагментом молекулы иммуноглобулина, при этом Fab-фрагмент остается свободным и может соединяться со специфическим антигеном. Чувствительность к бактериофагам (фаготип) обусловлена поверхностными рецепторами. Многие штаммы стафилококков являются лизогенными (образование некоторых токсинов происходит с участием профага). Факторы патогенности: Условно – патогенные. Микрокапсула защищает от фагоцитоза, способствует адгезии микробов; компоненты клеточной стенки – стимулируют развитие воспалительных процессов. Ферменты агрессии: каталаза – защищает бактерии от действия фагоцитов, в-лактамаза – разрушает молекулы антибиотиков.Белок А(нарушение функции комплемента и фагоцитов) Ферменты агрессии:Плазмокоагулаза (свертывание плазмы – подавление фагоцитоза);Фибринолизин (растворение фибринного сгустка);Гиалуронидаза (отщепление сиаловых кислот – нарушение соединительнотканного барьера);Лецитиназа (расщепление лецитина – разрушение мембран клеток) Токсины:Гемолизины (мембраноповреждающие токсины) – α, β, γ, δ;Эксфолиатин (отслойка эпидермиса) Лейкоцидин (разрушение лейкоцитов – гной);Энтеротоксин (A, B, C, D, E, F) . Резистентность. Устойчивость в окружающей среде и чувствительность к дезинфектантам обычная. Патогенез. Источником инфекции стафилококков - человек и некоторые виды животных (больные или носители). Механизмы передачи — респираторный, контактно-бытовой, алиментарный. Иммунитет: Постинфекционный – клеточно-гуморальный, нестойкий, ненажряженный. Клиника. Около 120 клинических форм проявления, которые имеют местный, системный или генерализованный характер. К ним относятся гнойно-воспалительные болезни кожи и мягких тканей (фурункулы, абсцессы), поражения глаз, уха, носоглотки, урогенитального тракта, пищеварительной системы (интоксикации). Микробиологическая диагностика. Материал для исследования – гной, кровь, моча, мокрота, испражнения. Бактериоскопический метод: из исследуемого материала (кроме крови) готовят мазки, окрашивают по Граму. Наличие грам «+» гроздевидных кокков, располагающихся в виде скоплений. Бактериологический метод: Материал засевают петлей на чашки с кровяным и желточно-солевым агаром для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37С в течении суток. На следующий день исследуют выросшие колонии на обеих средах. На кровяном агаре отмечают наличие или отсутствие гемолиза. На ЖСА S. aureus образует золотистые круглые выпуклые непрозрачные колонии. Вокруг колоний стафилококков, обладающих лецитиназной активностью, образуются зоны помутнения с перламутровым оттенком. Для окончательного установления вида стафилококка 2—3 колонии пересевают в пробирки со скошенным питательным агаром для получения чистых культур с последующим определением их дифференциальных признаков. S.aureus – «+»: образование плазмокоагулазы, летициназы. Ферментация:глк, миннита, образование а-токсина. Для установления источника госпитальной инфекции выделяют чистые культуры стафилококка от больных и бактерионосителей, после чего проводят их фаготипирование с помощью набора типовых стафилофагов. Фаги разводят до титра, указанного на этикетке. Каждую из исследуемых культур засевают на питательный агар в чашку Петри газоном, высушивают, а затем петлей каплю соответствующего фага наносят на квадраты (по числу фагов, входящих в набор), предварительно размеченные карандашом на дне чашки Петри. Посевы инкубируют при 37 °С. Результаты оценивают на следующий день по наличию лизиса культуры. Серологический метод: в случаях хронической инфекции, определяют титр анти-а-токсина в сыворотке крови больных. Определяют титр АТ к риботейхоевой кислоте( компонент клеточной стенки). Лечение и профилактика. Антибиотики широкого спектра действия (пенициллины, устойчивые к в-лактамазе). В случае тяжелых стафилококковых инфекций, не поддающихся лечению антибиотиками, может быть использована антитоксическая противостафилококковая плазма или иммуноглобулин, иммунизированный адсорбированным стафилококковым анатоксином. Выявление, лечение больных; проведение планового обследования медперсонала, вакцинация стафилококковым анатоксином. Стафилококковый анатоксин: получают из нативного анатоксина путем осаждения трихлоруксусной кислотой и адсорбцией на гидрате оксида алюминия. Стафилококковая вакцина: взвесь коагулазоположительных стафилококков, инактивированных нагреванием. Применяют для лечения длительно текущих заболеваний. Иммуноглобулин человеческий противостафилококковый: гамма-глобулиновая фракция сыворотки крови, содержит стафилококковый анатоксин. Готовят из человеч. крови, с высоким содержанием антител. Применяется для специфического лечения. 61. Менингококки. Их классификация и биологические свойства, факторы патогенности. Роль в патологии человека. Методы микробиологической диагностики менингококковых инфекций. Препараты для специфической профилактики и терапии. Менингококковая инфекция — острая инфекционная болезнь, характеризующаяся поражением слизистой оболочки носоглотки, оболочек головного мозга и септицемией; антропоноз. Таксономия: возбудитель Neisseria meningitidis (менингококк) относится к отделу Gracilicutes, семейству Neisseriaceae, роду Neisseria. Морфологические свойства. Мелкие диплококки. Характерно расположение в виде пары кофейных зерен, обращенных вогнутыми поверхностями друг к другу. Неподвижны, спор не образуют, грамотрицательные, имеют пили, капсула непостоянна. Культуральные свойства. Относятся к аэробам, культивируются на средах, содержащих нормальную сыворотку или дефибринированную кровь лошади, растут на искусственных питательных средах, содержащих специальный набор аминокислот. Элективная среда должна содержать ристомицин. Повышенная концентрация СО2 в атмосфере стимулирует рост менингококков. Антигенная структура: Имеет несколько АГ: родовые, общие для рода нейссерии (белковые и полисахаридные, которые представлены полимерами аминосахаров и сиаловых кислот); видовой (протеиновый); группоспецифические (гликопротеидный комплекс); типоспецифические (белки наружной мембраны), которые разграничивают серотипы внутри серогрупп В и С. По капсульным АГ выделяют девять серогрупп (А, В, С, D, X, Y, Z, W135 и Е). Капсульные АГ некоторых серогрупп иммуногенны для человека. Штаммы серогруппы А вызывают эпидемические вспышки. В, С и Y - спорадические случаи заболевания. На основании различий типоспецифических АГ выделяют серотипы, которые обозначают арабскими цифрами (серотипы выявлены в серогруппах В, С, Y, W135). Наличие АГ серотипа 2 рассматривается как фактор патогенности. Во время эпидемий преобладают менингококки групп А и С, которые являются наиболее патогенными. Биохимическая активность: низкая. Разлагает мальтозу и глк. До кислоты, не образует индол и сероводород. Ферментация глк. и мальтозы – диф.-диагностический признак. Не образует крахмалоподобный полисахарид из сахарозы. Обладает цитохромоксидазой и каталазой. Отсутствие β-галактозидазы, наличие γ-глютаминтрансферазы. Факторы патогенности: капсула – защищает от фагоцитоза. AT, образующиеся к полисахаридам капсулы, проявляют бактерицидные свойства. Токсические проявления менингококковой инфекции обусловлены высокотоксичным эндотоксином. Для генерализованных форм менингококковой инфекции характерны кожные высыпания, выраженное пирогенное действие, образование AT. Пили, белки наружной мембраны, наличие гиалуронидазы и нейроминидазы. Пили являются фактором адгезии к слизистой оболочке носоглотки и тканях мозговой оболочки. Менингококки выделяют IgA-протеазы, расщепляющие молекулы IgA, что защищает бактерии от действия Ig. Резистентность. Малоустойчив во внешней среде, чувствителен к высушиванию и охлаждению. В течение нескольких минут погибает при повышении температуры более 50 °С и ниже 22 °С. Чувствительны к пенициллинам, тетрациклинам, эритромицину, устойчивы к ристомицину и сульфамидам. Чувствительны к 1 % раствору фенола, 0,2 % раствору хлорной извести, 1 % раствору хлорамина. Эпидемиология, патогенез и клиника. Человек — единственный природный хозяин менингококков. Носоглотка служит входными воротами инфекции, здесь возбудитель может длительно существовать, не вызывая воспаления (носительство). Механизм передачи инфекции от больного или носителя воздушно-капельный. Инкубационный период составляет 1—10 дней (чаще 2—3 дня). Различают локализованные (назофарингит) и генерализованные (менингит, менингоэнцефалит) формы менингококковой инфекции. Из носоглотки бактерии попадают в кровяное русло (менингококкемия) и вызывают поражение мозговых и слизистых оболочек с развитием лихорадки, геморрагической сыпи, воспаления мозговых оболочек. Иммунитет. Постинфекционный иммунитет при генерализованных формах болезни стойкий, напряженный. Микробиологическая диагностика: Материал для исследования - кровь, спинномозговая жидкость, носоглоточные смывы. Бактериоскопический метод – окраска мазков из ликвора и крови по Граму для определения лейкоцитарной формулы, выявления менингококков и их количества. Наблюдают полинуклеарные лейкоциты, эритроциты, нити фибрина, менингококки – грам «-», окружены капсулой. Бактериологический метод – выделение чистой культуры. Носоглоточная слизь, кровь, ликвор. Посев на плотные, полужидкие питательные среды, содержащие сыворотку, кровь. Культуры инкубируют в течение 20 ч. При 37С с повышенным содержанием СО2.Оксидазаположительные колонии – принадлежат в данному виду. Наличие N.meningitidis подтверждают образованием уксусной кислоты при ферментации глк. и мальтозы. Принадлежность к серогруппам – в реакции агглютинации (РА). Серологический метод – используют для обнаружения растворимых бактериальных АГ в ликворе, или АТ в сыворотке крови. Для обнаружения АГ применяют ИФА,РИА. У больных, перенесших менингококк – в сыворотке специфические АТ: бактерицидные, аггютинины, гемаггютинины. Лечение. В качестве этиотропной терапии используют антибиотики - бензилпенициллин (пенициллины, левомицетин, рифампицин), сульфамиды. +Профилактика. Специфическую профилактику проводят менингококковой химической полисахаридной вакциной серогруппы А и дивакциной серогрупп А и С по эпидемическим показаниям. Неспецифическая профилактика сводится к соблюдению санитарно-противоэпидемического режима в дошкольных, школьных учреждениях и местах постоянного скопления людей. 62.Гонококки. Биологические свойства. Патогенез гонококковой инфекции. Микробиологическая диагностика острой и хронической гонореи. Профилактика бленореи. Гонококки- вид грамотрицательных диплококков рода Neisseria. Вызывают гонорею — антропонозную венерическую инфекцию, характеризующуюся гнойным воспалением слизистых оболочек, чаще мочеполовой системы. Биологические свойства: Гонококк — неподвижный грамотрицательный парный кокк (диплококк), обе половинки которого имеют сходство с кофейными зернами, обращёнными вогнутой стороной друг к другу. Фагоцитированные полинуклеарными нейтрофилами гонококки чаще не погибают, а сохраняют жизнеспособность и вирулентность (эндоцитобиоз) и даже размножаются. В неблагоприятных условиях, в частности под воздействием антибактериальных препаратов, гонококки могут трансформироваться в L-форму или изменять свои свойства (так называемые формы Аша). Гонококки можно выращивать на искусственных питательных средах, они лучше растут при наличии нативного человеческого белка в атмосфере с повышенным содержанием CO2 при 37 °C. Устойчивые внутри организма носителя, во внешней среде гонококки мало устойчивы. Гонококки гибнут по мере высыхания субстрата, в котором находятся и при нагревании уже до 40—45 °C. Почти моментально они погибают в мыльной воде, на них губительно действуют слабые соли серебра, растворы антисептиков и многие антибиотики. В организме человека гонококки относительно быстро приобретают устойчивость к антибиотикам и сульфаниламидным препаратам; постепенно нарастает частота штаммов, продуцирующих бета-лактамазу (пенициллиназу). Патогенез гонококковой инфекции: • Входные ворота – цилиндрический эпителий слизистой оболочки уретры и шейки матки. • После адгезии гонококки путем эндоцитоза проникают внутрь эпителия , образуют в них вакуоли, в которых размножаются. После слияния вакуолей с базальной мембраной гонококки попадают в окружающую соединительную ткань , где вызывают воспаление. • Гонококки могут поступать в кровь и диссеминировать по организму, проникая в синовиальные оболочки суставов, сердце и другие органы. • У детей, рожденных инфицированными гонококками матерями, гонококки могут проникать в конъюнктиву и вызывать воспаление слизистой глаза — бленнорею. Микробиологическая диагностика острой и хронической гонореи: Материалом для исследования служит гнойное отделяемое из уретры, влагалища и шейки матки, из прямой кишки и глотки (Neisseria gonorrhoeae часто обнаруживают при бессимптомном течении болезни в отделяемом из прямой кишки у женщин и мужчин), с конъюнктивы глаза (при бленнорее), а также сыворотка крови. У мужчин материал необходимо забирать также из ротовой полости, глотки и прямой кишки. Результаты микробиологического исследования зависят от соблюдения правил забора материала из передней уретры и простаты. За 2-3 суток перед забором материала необходимо прекратить применение дезинфицирующих и антибактериальных препаратов, воздерживаться от мочеиспускания в течение 4-6 ч и провести туалет окружающих кожных покровов. Забор материала должен проводить лечащий врач. Для диагностики применяют бактериоскопический, бактериологический и серологический методы. Профилактика бленореи: Новорождённым сразу после рождения впускают за веки обоих глаз по одной капле 2% раствора азотнокислого серебра (ляписа) или пенициллина; для взрослых — соблюдение правил личной гигиены. При одностороннем процессе очень важно предупредить заболевание второго глаза, для чего на здоровый глаз надевают герметичную повязку с часовым стеклом, края которого приклеивают липким пластырем 63.Эшерихии. Их основные биологические свойства. Физиологическая роль в кишечнике человека и санитарно-показательное значение эшерихий. Эпидемиология колиэнтеритов. Микробиологическая диагностика колиэнтеритов. ЭШЕРИХИИ — (Escherichia), род энтеробактерий. Обитают в толстом кишечнике человека и животных; их присутствие в воде, почве и др. объектах служит показателем фекального загрязнения среды. Высокая биохомическая активность: Лактоза «+» Глюкоза «+» Индол «+» Н2S «-» Утилизация цитрата «- » Санитарно-показательные микроорганизмы- микробы, являющиеся представителями нормальной микрофлоры организма человека и служащие показателями санитарного неблагополучия объекта, т.е. его загрязнения выделениями человека. Непатогенные кишечные палочки вида E.coli являются санитарно-показательными бактериями. Этот вид имеет наибольшее санитарно- показательное значение, соответствует следующим требованиям СПМ: постоянно и в больших количествах присутствует в выделениях человека, не имеет других природных резервуаров и мест обитания, легко идентифицируется, поддается количественному определению. Физиологическая роль эшерихий: способствует гидролизу лактозы, участвует в продукции витаминов, выделяет колицины, которые тормозят рост энетеропатогенных кишечных палочек (т.е. угнетает патогенные микробы), стимулирует антителообразование и оказывает мощное иммуномодулирующее действие, способствует активации гуморального и местного иммунитета Колиэнтерит — это острое инфекционное воспаление толстого кишечника, вызываемое кишечной палочкой. Симптомы и лечение, а также причины этого коварного заболевания. Причины колиэнтерита: контакт с носителем или больным человеком. употребление зараженной пищи и воды. пользование зараженными предметами быта. вскармливание больного энтероколитом ребенка. Колиэнтерит — это острое инфекционное воспаление толстого кишечника, вызываемое кишечной палочкой. Бактериоскопический метод в диагностике колиэнтеритов в практике бактериологических лабораторий не применяется из-за сходства морфологических и тинкториальных свойств патогенных и условно-патогенных энтеробактерий. 64.Сальмонеллы. Классификация, биологические свойства. Сальмонеллы - возбудители брюшного тифа и паратифов А, В. Эпидемиология и патогенез брюшного тифа. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика. Сальмонеллы - возбудители сальмонеллезов. Эпидемиология и патогенез. Микробиологическая диагностика. Сальмонелла (лат. Salmonella) — род бактерий, факультативных анаэробов. Классификация сальмонеллРод сальмонеллы (лат. Salmonella) входит в семейство энтеробактерии (лат. Enterobacteriaceae), порядок энтеробактерии (лат. Enterobacteriales), класс гамма-протеобактерии (лат. γ proteobacteria), тип протеобактерии (лат. Proteobacteria), царство бактерии. В род сальмонеллы по современным представлениям входят 2 вида: Salmonella bongori и Salmonella enterica. Вид Salmonella enterica включает в свой состав 7 подвидов: I enterica, II salamae, IIIa arizonae, IIIb diarizonae, IV houtenae, VI indica и VII, каждый из которых имеет множество серотипов. Многие серотипы Salmonella enterica — возбудители заболеваний человека, в том числе, брюшного тифа, паратифа, сальмонеллеза. Сальмонеллы вида Salmonella bongori не патогенны для человека. Подвид Salmonella enterica enterica включает следующие серогруппы: A (наиболее известен серотип paratyphi A) B (серотипы: typhimurium, agona, derby, heidelberg, paratyphi B и др.) С (серотипы: bareilly, choleraesuis, infantis, virchow и др.) D (серотипы: dublin, enteritidis, typhi и др.) E (наиболее известен серотип anatum) |