Изучение макромолекул методом ЯМР-спектроскопии. Ямрспектроскопия основные понятия
Скачать 0.62 Mb.
|
ОГЛАВЛЕНИЕ Введение 3 1. ЯМР–спектроскопия: основные понятия 5 1.1. История развития ЯМР–спектроскопии 5 1.2. Понятие спектроскопии ядерного магнитного резонанса 7 1.3. Основные физические принципы ЯМР–спектроскопии 8 2. Параметры ЯМР–спектроскопии 11 2.1. Химический сдвиг 11 2.2. Спин–спиновое взаимодействие. Константа спин–спинового взаимодействия 14 2.3. Интенсивность сигнала 16 Заключение 19 Список использованных источников и литературы 6 ВВЕДЕНИЕ Молекулы, которые исследует биофизика, существенно отличаются от молекул неживой природы. Самыми сложными из известных молекул на сегодняшний день являются белки. Белки и нуклеиновые кислоты – это динамические системы, поведение которых определяют положение и функционирование каждого структурного элемента этих макромолекул. Молекулярная биофизика является основой исследования процессов жизнедеятельности клеток и систем всех уровней и их функций. Изучение живых систем на молекулярном уровне невозможно без использования самых разных методов физико–химической биологии. В настоящее время разработаны сложные физико–химические методы, позволяющие детально охарактеризовать биологические системы, в т.ч. на молекулярном уровне, одним из таких методов является метод ЯМР–спектроскопии. ЯМР–спектроскопия – это один из наиболее информативных методов исследования молекулярной структуры и динамики молекул, меж молекулярных взаимодействии, механизмов химических реакций и количественного анализа веществ в различных агрегатных состояниях. Начиная с 1953 г., когда были выпушены первые спектрометры ЯМР, техника ЯМР непрерывно совершенствуется, лавинообразно нарастает поток исследований, возникают новые и расширяются традиционные области применения в химии, физике, биологии и медицине. Исключительная роль метода ЯМР определяется тем, что он оказывается полезным, а часто незаменимым источником информации на всех стадиях исследования – от изучения состава сложных реакционных смесей до установления строения и динамических характеристик сложных соединений, распределения электронной плотности в них и межмолекулярных взаимодействий. Последние достижения спектроскопии ЯМР связаны с внедрением в практику импульсных методов регистрации и широким применением мини– и микро–ЭВМ, обеспечивающих регистрацию спектров, обработку и частичную расшифровку, а также позволяющих осуществить частичную или полную автоматизацию проведения сложных экспериментов. Это позволило в сотни и тысячи раз повысить эффективную чувствительность спектрометров, открыло возможности регистрировать спектры тяжелых и редких ядер, имеющих малые магнитные моменты или низкое природное содержание и, по существу, представляющих элементы всей периодической системы. Вышеизложенное обуславливает актуальность темы исследования настоящей работы. Объект исследования – физико–химические методы изучения макромолекул. Предмет исследования – метод ЯМР–спектроскопии. Цель исследования – изучение и анализ теоретических основ метода ЯМР–спектроскопии. Заявленная цель определила постановку следующих задач: Заявленная цель определила постановку следующих задач: 1) Проанализировать историю развития ЯМР–спектроскопии. 2) Дать понятие спектроскопии ядерного магнитного резонанса. 3) Выделить основные физические принципы ЯМР–спектроскопии. 4) Рассмотреть параметры ЯМР–спектроскопии, такие как: химический сдвиг, спин–спиновое взаимодействие, константа спин–спинового взаимодействия, интенсивность сигнала. Структурно работа состоит из введения, двух глав, включающих шесть параграфов, заключения и списка использованных источников и литературы. 1. ЯМР–спектроскопия: основные понятия 1.1. История развития ЯМР–спектроскопии Открытие ЯМР имеет весьма длинную и захватывающе интересную предысторию. В связи с усовершенствованием спектральных методов, продвинувших область спектроскопических измерений в диапазон сверхвысоких (примерно 103 – 106МГц; микрорадиоволны) и высоких частот (примерно 10–2 – 102 МГц; радиоволны), появились новые источники информации о структуре вещества. При поглощении и испускании излучения в этой области частот происходит тот же основной процесс, что и в других диапазонах электромагнитного спектра, а именно при переходе с одного энергетического уровня на другой система поглощает или испускает квант энергии. Разность энергий уровней и энергия квантов, участвующих в этих процессах, составляют около 10–7 эВ для области радиочастот и около 10–4 эВ для сверхвысоких частот. Существование ядерных моментов впервые было обнаружено при изучении и сверхтонкой структуры электронных спектров некоторых атомов с помощью оптических спектрометров с высокой разрешающей способностью. Сверхтонкая структура атомных спектров навела Вольфганга Паули в 1924 г. на мысль о том, что некоторые ядра обладают моментом количества движения (угловым моментом), а, следовательно, и магнитным моментом, взаимодействующим с атомными орбитальными электронами. Впоследствии эта гипотеза была подтверждена спектроскопическими измерениями, которые позволили определить значения угловых и магнитных моментов для многих ядер [7]. В 1921 г. Отто Штерн и Вальтер Герлах методом атомного пучка показали, что измеримые значения магнитного момента атома дискретны квантованию атома в неоднородном магнитном поле. В последующих экспериментах, пропуская через постоянное магнитное поле пучок молекул водорода, удалось измерить небольшой по величине магнитный момент ядра водорода. Дальнейшее развитие метода состояло в том, что на пучок воздействовали дополнительным магнитным полем, осциллирующим с частотой, при которой индуцируются переходы между ядерными энергетическими уровнями, соответствующими квантовым значениям ядерного магнитного момента. Первые успешные наблюдения ЯМР такого рода были выполнены с основными магнитными полями порядка нескольких кило эрстед, что соответствует частотам осциллирующего магнитного поля в диапазоне 105 –108 Гц. Резонансный обмен энергией может происходить не только в молекулярных пучках; его можно наблюдать во всех агрегатных состояниях вещества. В 1936г. Горнер пытался обнаружить резонанс ядер Li7 во фтористом литии ядер H1 в алюмокалиевых квасцах. Регистрацию поглощения высокочастотной энергии при резонансе в этих экспериментах предполагалось производить соответственно калориметрическим методом и по аномальной дисперсии. Основной причиной неудач этих опытов был выбор неподходящих объектов. Профессор Ю.А. Устынюк отмечает, что как следует из материалов архива российского физика Е.К. Завойского, первооткрывателя электронного магнитного резонанса, в 1943 г. он «…наблюдал сигналы ЯМР в конденсированной фазе, но не сумел добиться надежной воспроизводимости результатов и не опубликовал их» [12]. В конце 1945 года двумя группами американских физиков под руководством Ф. Блоха и Э.М. Пурселла впервые были получены сигналы ядерного магнитного резонанса. Они заметили, что ядра 1H и 31P (протон и фосфор–31) способны поглощать радиочастотную энергию при воздействии на них магнитного поля, сила которого специфична для каждого атома. При поглощении они начинали резонировать, каждый элемент на своей частоте. Это наблюдение позволило провести детальный анализ строения молекулы. С тех пор ЯМР нашел применение в кинетических и структурных исследованиях твердых тел, жидкостей и газов, в результате чего было присуждено 6 Нобелевских премий. 1.2. Понятие спектроскопии ядерного магнитного резонанса Спектроскопия ядерного магнитного резонанса – вид спектроскопии, которая регистрирует переходы между магнитными энергетическими уровнями атомных ядер, вызываемые радиочастотным излучением. Только ядра со спиновым квантовым числом I, отличным от «0», могут вызывать сигнал ЯМР, или быть активными в ЯМР. Спиновое квантовое число ядра определяется числом протонов и нейтронов в ядре. Существует эмпирическое правило: 1) I равно «0» для ядер с четным числом протонов и нейтронов; 2) I равно целым числам (1, 2, 3...) для ядер с нечетными числами и протонов, и нейтронов; 3) I равно полуцелым числам (1/2, 3/2, 5/2 и т.д.) для ядер с четными числами протонов и нечетными числами нейтронов и наоборот [10]. В приложенном магнитном поле с напряженностью НО ядро со спиновым числом I может принимать 2I + 1 ориентаций (или занимать 2I + 1 энергетических уровней). Количество энергии, на которое отличаются эти уровни (разность энергий уровней), возрастает с возрастанием НО, однако при данном значении НО разность энергий между двумя соседними уровнями есть величина постоянная. Разность энергий двух соседних уровней ΔЕ определяется выражением: ΔЕ=НОγh/2π, (1) где γ –гиромагнитное (магнитогирическое) отношение, постоянное для данного изотопа; НО –напряженность внешнего магнитного поля; h–постоянная Планка. В сущности, эксперимент ЯМР состоит в том, чтобы сообщить энергию ядру и перевести его с одного энергетического уровня на другой, более высокий уровень. Поскольку точное значение ΔЕ зависит от молекулярного окружения возбуждаемого ядра, имеется возможность связать величину ΔЕ со строением молекулы и в конечном итоге определить структуру всей молекулы. К сказанному следует добавить следующее: сигналы в спектрах ЯМР могут давать только ядра атомов, обладающих нечетным спиновым числом. Таким образом, наиболее распространенные изотопы углерода 12С, кислорода 16О и многие другие, например, дейтерий, являясь немагнитными, не регистрируются в ЯМР–спектрах. Из ядер атомов, наиболее часто встречающихся в органических соединениях, магнитным моментом обладают изотопы 1Н, 13С, 19F, 31P, 15N, 17O. Итак, спектроскопия ЯМР представляет собой спектроскопический метод наблюдения локальных магнитных полей вокруг ядер атомов. Образец помещают в магнитное поле, и сигнал ЯМР создается путем возбуждения образца ядер радиоволнами до ядерного магнитного резонанса, который регистрируется чувствительными радиоприемниками. Внутримолекулярное магнитное поле вокруг атома в молекуле изменяет резонансную частоту, тем самым открывая доступ к деталям электронной структуры молекулы и ее отдельных функциональных групп. Поскольку поля уникальны или очень характерны для отдельных соединений, в современной практике ЯМР–спектроскопия является окончательным методом идентификации мономолекулярных органических соединений. Точно так же биохимики используют ЯМР для идентификации белков и других сложных молекул. Помимо идентификации, ЯМР–спектроскопия предоставляет подробную информацию о структуре, динамике, состоянии реакции и химическом окружении молекул. 1.3. Основные физические принципы ЯМР–спектроскопии Ядра многих атомов могут быть представлены в виде очень маленьких стержневых магнитов с северным и южным полюсами. Ядро вращается с постоянной скоростью, а ось вращения точно совпадает с линией между северным и южным полюсами, как это показано на рисунке 1. Рис. 1 – Вращение ядра Поскольку ядро само по себе является заряженной частицей, а любая заряженная частица при движении создает вокруг себя магнитное поле, это означает, что создается ядерный магнитный момент μ. Он связан со спиновым угловым моментом, а количественно пропорционален квантовому числу углового момента (спину) I, что выражается через гиромагнитное отношение: γ=I/ μ [9]. Вторым принципом является ларморовская прецессия. Это явление состоит в движение макроскопического магнитного момента μ в однородном внешнем магнитном поле B0, при этом μ описывает конус с углом θ вокруг B0, как это показано на рисунке 2. Основной характеристикой прецессии является ее частота, определяемая формулой: ν0 = │γ│*B0/2π (2) Рис. 2 – Явление ларморовской прецессии Если же к этой системе приложить еще одно внешнее РЧ поле B1, перпендикулярное B0, то оно также наложит вращающий момент на μ [1]. Возможны два случая: поле B1 фиксировано по направлению и амплитуде, тогда возникнут слабые колебания прецессии μ, вызванные результирующим полем B0+B1; и поле B1 может вращаться вокруг B0 с той же частотой, что и μ. Если взаимная ориентация μ, B0 и B1 будет иная, то должна существовать сила F, которая будет направлена в противоположную сторону от B0 и будет увеличивать угол прецессии θ. Изменение θ будет означать поглощение энергии μ в B0, то есть при равенстве частот прецессии ν поля B1 и частоты поля B0 наступит резонансное поглощение энергии поля B0. Известно, что ядра 1H и 13C имеют спин 1/2, а ядро дейтерия, к примеру, 1. Если вращающееся вокруг своей оси ядро рассматривать с позиций квантовой механики, то окажется, что его ядерный угловой момент P квантуется. А при помещении ядра в сильное поле B0 угловой момент P ориентируется так, что его компонента Pz расположится по направлению внешнего поля, причем ее значение выразится: Pz = mI*h, (3) где h – постоянная Планка и mI = I, I–1,…, – I – магнитное квантовое число. То есть при включении внешнего поля B0 спиновые энергетические уровни ядер расщепляются на подуровни. Иными словами, с его помощью мы снимаем энергетическое вырождение: ядра с направленными «по полю» (α–ориентация) и «против поля» (β–ориентация) магнитными моментами имеют различную энергию (первая немного меньше второй) – и возникает возможность энергетического перехода с одного уровня на другой [13]. Этот переход и является физической основой спектроскопии ядерного магнитного резонанса, основанной на поглощении электромагнитного излучения определенными частот ядрами образца, помещенного в магнитное поле. В общем случае расщепление энергетических уровней в магнитном поле носит название эффекта Зеемана. 2. Параметры спектров ЯМР Основными характеристиками спектров ЯМР являются: химический сдвиг, мультиплетность, константа спин–спинового взаимодействия; интенсивность сигнала. Эти характеристики зависят от химического окружения данного ядра или группы ядер, от числа соседних ядер, обладающих магнитным моментом, от их относительного расположения, а также от числа анализируемых ядер в различных структурных фрагментах молекулы [3]. 2.1. Химический сдвиг Химическим сдвигом называют различие в расположении в спектре между пиками поглощения (резонанса) для ядер, входящих в разные группы (метильную, ароматическую, карбоксильную и т.д.). Формально химический сдвиг измеряют от резонанса «голого» (без электронов) ядра, то есть экранирование отсутствует и σ = 0. Однако на практике в химии принят другой стандарт – измерение сдвига протонов относительно стандартного соединения тетраметилсилана (обозначают ТМС), которое содержит 12 эквивалентных протонов. Таким образом, химический сдвиг является разностью резонансных частот ядер исследуемого образца и ядер ТМС. Выражается он через безразмерную величину δ = 106*(νоб. – νТМС)/νТМС [6]. Множитель 106 означает, что в спектре все химические сдвиги выражаются в миллионных долях (м. д.). Химические сдвиги часто встречающихся групп представлены на рисунках 3 и 4. На химические сдвиги в атоме влияют следующие факторы: – электронная плотность на атоме (чем она выше, тем сильнее сигнал смещен в сильное поле); – магнитная анизотропия соседних групп (диамагнитный и парамагнитный вклады в экранирование); – образование протоном водородной связи (следствие – смещение сигнала в слабое поле); – вид растворителя. Рис. 3 – – Химические сдвиги для 1Н Рис. 4 – Химические сдвиги для 13С 2.2. Спин–спиновое взаимодействие. Константа спин–спинового взаимодействия Сигналы протона (группы протонов) в спектре могут быть представлены в виде одиночной линии (такой сигнал называется «синглет») или в виде групп линий. Если сигнал представлен в виде двух линий определенной интенсивности (рис. 5) – сигнал называется «дублет»; в виде трех линий – «триплет», в виде четырех линий –«квадруплет», или «квартет». Сигнал может быть представлен группой из шести и более линий, в этом случае говорят о мультиплете. Рис. 5 – Сигналы ЯМР 1Н: а –синглет (обозначается с., s); б –дублет (д., d.); в –триплет(т.,t.), г –квадруплет (кв., q.) Каждая линия любого мультиплета будет отстоять от соседних линий того же мультиплета на одно и то же число герц. Интенсивность линий каждого мультиплета можно получить из таблицы, называемой треугольником Паскаля (таблица 1). Таблица 1 Треугольник Паскаля
Положение сигналов (химический сдвиг) в спектре определяется следующим образом [4]: – В случае синглета это не вызывает затруднений – указывается то значение м.д., при котором наблюдается сигнал (например, 7.27 м.д.). – Химического сдвига дублета: находится «центр тяжести» дублета и берется соответствующее значение м.д. – Химический сдвиг триплета, квадруплета и др. мультиплетов указывается двумя значениями: левое значение – положение крайне левого компонента мультиплета, правое значение – положение крайне правого компонента мультиплета. Химические сдвиги обычно приводят с двумя знаками после запятой. Расщепление сигнала протона на компоненты происходит благодаря спин–спиновым взаимодействиям – взаимодействие спинов протонов через электронные связи. Согласно принципу Паули, электроны, связывающие два ядра, спарены, т.е. их спины антипараллельны. В магнитном поле имеется определенная тенденция для каждого из ядер спаривать свой спин со спином одного из связывающих электронов таким образом, чтобы большинство из них было антипараллельными (соответствует устойчивому состоянию) [5]. Спин–спиновое взаимодействие через две связи называется геминальным. Спин–спиновое взаимодействие через три связи называется вицинальным. Константа спин–спинового взаимодействия (КССВ) – внутренняя характеристика каждого изучаемого соединения и она не зависит от напряженности внешнего магнитного поля B0. Константа спин–спинового взаимодействия зависит в наибольшей степени от гибридизации атома углерода (возрастает с увеличением s характера связи), от числа и электроотрицательности заместителей при атоме углерода (возрастает с ростом электроотрицательности заместителей), от природы взаимодействующих ядер, характера и числа связей через которые передается это взаимодействие, а также геометрии молекулы. Чем больше этих связей, тем, как правило, меньше константа. Для спектров первого порядка КССВ в Гц находят прямым измерением расстояния между пиками мультиплета. Обозначается она J и измеряется в Гц [2]. 2.3. Интенсивность сигнала Важным параметром спектров ЯМР (наряду с химическим сдвигом и константой спин–спинового взаимодействия) является интегральная интенсивность сигналов. В спектрах ЯМР интенсивность сигналов может быть описана площадью фигуры, которая находится под сигналом. Это интегральная интенсивность сигнала. Интенсивность сигнала пропорциональна количеству протонов каждого типа и измеряется площадью пика. Относительные интенсивности различных сигналов показаны в спектре ступенчатой интегральной кривой (рис. 6, 7). Рис. 6 – Спектр ЯМР 1Н 1–нитропропана Рис. 7 – Спектр ЯМР 1Н бензойной кислоты Однако высота ступеньки не дает точного числа протонов, отвечающих сигналу, а только пропорциональна этому числу. Сравнивая высоты ступенек, соответствующих различным сигналам в спектре, определяют относительные числа протонов, отвечающих этим сигналам. Вернемся к спектру 1–нитропропана (рис. 6). Площадь каждого из трех сигналов спектра проинтегрирована (каждый сигнал «охвачен» кривой линией в виде ступеньки). Вооружившись линейкой, измерим высоту ступеньки интегральной кривой каждого сигнала. В результате получим следующее. Для сигнала метильной группы высота ступеньки 3 см; высота ступенек для обеих метиленовых групп – 2 см. Это означает, что количество неэквивалентных протонов, обеспечивающих сигналы в спектре, пропорционально соотношению 3:2:2. На самом деле, соотношение протонов СН3:СН2:СН2в молекуле 1–нитропропана 3:2:2! На ЯМР–спектре могут не распечатываться интегральные кривые, в этом случае интегральные интенсивности сигналов визуализируются в цифровом формате. Площадь мультиплета отражает число протонов, вызывающих данный сигнал, а мультиплетность сигнала – число протонов, взаимодействующих с рассматриваемым протоном (или протонами). Таким образом, из спектра ЯМР получаем три главные параметра, позволяющие определять строение молекулы – химический сдвиг сигнала, его мультиплетность и интегральную интенсивность. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Подводя итоги работы, резюмируем следующее: Явление ядерного магнитного резонанса (ЯМР) впервые обнаружено в 1945 году двумя группами американских физиков под руководством Ф. Блоха и Э. Парселла. Спектроскопия ядерного магнитного резонанса сегодня является распространенным аналитическим методом, находящим применение во многих областях современной науки, медицины и промышленности. Трудно переоценить роль ЯМР в исследовании любых систем, от простейших органических молекул до сложнейших макромолекулярных ансамблей, таких как белки, нуклеиновые кислоты и их комплексы, практически всегда базируется на данных, полученных при помощи спектроскопии ЯМР. ЯМР представляет собой спектроскопический метод, основанный на изучении магнитных свойств атомных ядер. Некоторые ядра при помещении в сильное магнитное поле способны резонировать на характеристичных частотах в радиочастотном диапазоне электромагнитного спектра. Небольшие изменения указанной резонансной частоты предоставляют детальную информацию о молекулярной структуре исследуемых соединений. Основные физические принципы ЯМР спектроскопии: 1) Ядро является заряженной частицей, а любая заряженная частица при движении создает вокруг себя магнитное поле, это означает, что создаётся ядерный магнитный момент μ связан со спиновым угловым моментом, а количественно пропорционален квантовому числу углового момента (спину) I. 2) Ларморовская прецессия. Это явление состоит в движение макроскопического магнитного момента μ в однородном внешнем магнитном поле B0, при этом μ описывает конус с углом θ вокруг B0. Параметры ЯМР–спектроскопии: 1. В зависимости от местного электронного окружения разные протоны в молекуле резонируют на слегка отличающихся частотах. Так как и это смещение частоты, и основная резонансная частота прямо пропорциональны величине индукции магнитного поля, то это смещение преобразуется в независимую от магнитного поля безразмерную величину известную как химический сдвиг. Химический сдвиг определяется как относительное изменение относительно некоторых эталонных образцов. 2. Наиболее полезную информацию для определения структуры в одномерном ЯМР–спектре даёт так называемое спин–спиновое взаимодействие между активными ЯМР ядрами. Это взаимодействие возникает в результате переходов между различными спиновыми состояниями ядер в химических молекулах, что приводит к расщеплению сигналов ЯМР. Константа спин–спинового взаимодействия (КССВ) – внутренняя характеристика каждого изучаемого соединения и она не зависит от напряжённости внешнего магнитного поля. 3. Сигналы протонов различаются по интенсивности, которая прямо пропорциональна количеству протонов, участвующих в резонансе на данной частоте. Интенсивность сигнала оценивают по площади его пика. Итак, простота приготовления образцов, быстрота исследования и высокая информативность спектров ЯМР сделали этот вид спектроскопии одним из наиболее важных экспресс–методов изучения макромолекул. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ И ЛИТЕРАТУРЫ Брель А.К. Определение структуры органических соединений с помощью масс– и ЯМР–1H спектроскопии. Часть III: Учебно–методическое пособие / А.К. Брель, Н.А. Танкабекян, Е.Н. Жогло. – Волгоград: Изд–во ВолгГМУ, 2017. – 44 с. Бхакка Н. Применение ЯМР в органической химии: пер. с англ. / Н. Бхакка, Д. Уильямс. – М.: Мир, 1966. – 243 с. Гриненко Е.В. Химия. ФХМА. Физико–химические методы анализа органических соединений (ультрафиолетовая спектроскопия, инфракрасная спектроскопия, масс–спектрометрия, спектроскопия ядерного магнитного резонанса): учебное пособие для бакалавров, обучающихся по направлению подготовки 20.03.01 «Техносферная безопасность» / Е.В.Гриненко, Т.Г. Федулина, А.В. Васильев.– СПб.: СПбГЛТУ, 2018.– 102 с. Гуденко С.В. Введение в физику магнитного резонанса. Учебно–методическое пособие по курсу Общая физика / С.В. Гуденко. – М.: МФТИ,2013. – 36 с. Дзюба С.А. Основы магнитного резонанса: Учебное пособие / С.А. Дюба. – Новосибирск: Новосиб. гос. ун–т., 2010. – 294 с. Каратаева Ф.Х., Клочков В.В. Cпектроскопия ЯМР в органической химии. Часть I. Общая теория ЯМР. Химические сдвиги: Учебное пособие / Ф.Х. Каратаева, В.В. Клочков. – Казань: Казанский федеральный университет, 2012. – 96с. Крушельницкий А. ЯМР для «чайников», или Десять основных фактов о ядерном магнитном резонансе. / А. Крушельницкий // Троицкий вариант №9, 2013. URL: hhttps://elementy.ru/nauchnopopulyarnaya_biblioteka/431987/YaMR_dlya_chaynikov_ili_Desyat_osnovnykh_faktov_o_yadernom_magnitnom_rezonanse (дата обращения: 29.11.2020) Лундин А.Г., Федин Э.И. ЯМР–спектроскопия. – М.: Наука, 1986. – 224 с. Савицкий А.П., Евтушенко Е.Г., Кудряшова Е.В., Польшаков В.И., Голышев С.А. Физические методы биохимии. / А.П. Савицкий, Е.Г. Евтушенко, Е.В. Кудряшова, С.А. Голышев. URL: https://teach–in.ru/file/synopsis/pdf/biochemistry–savitskiy–M.pdf (дата обращения: 29.11.2020) Порхун В.И., Гоник И.Л., Аристова Ю.В. Введение в теорию и практику спектроскопии ядерного магнитного резонанса / В.И. Порхун, И.Л. Гоник, Ю.В. Аристов. Волгоград: ВолгГТУ, 2015. – 212 с. Талзи Е.П. Основы применения ЯМР и ЭПР спектроскопии в катализе. / Е.П. Талзи. Новосибирск, 2002. – 67 с. Устынюк Ю.А. Лекции по спектроскопии ядерного магнитного резонанса. Часть 1 (вводный курс). / Ю.А. Устынюк. М.: ТЕХНОСФЕРА, 2016. – 288с. Gerothanassis, P. Chemistry education: research and practice in Europe / P. Gerothanassis, A. Troganis, V. Exarchou, K. Barbarossou. – University of Ioannina, 2002. – Vol. 3, No. 2, pp. 229 – 252. |