Главная страница
Навигация по странице:

  • 3. Записать методы и сследования бактерий в живом состоянии

    		•

    Задания для СРОП. Задания для сроп Записать этапы микроскопии бактериального препарата


    Скачать 45 Kb.
    НазваниеЗадания для сроп Записать этапы микроскопии бактериального препарата
    Дата14.09.2020
    Размер45 Kb.
    Формат файлаdoc
    Имя файлаЗадания для СРОП.doc
    ТипДокументы
    #137828

    Задания для СРОП:


    1. Записать этапы микроскопии бактериального препарата


     

    1-й этап: приготовление микроскопического препарата.

    1.     Прожгите обезжиренное предметное стекло в пла­мени горелки.

    2.     На охлажденное предметное стекло, поло­женное на рабочий стол, петлей нанесите каплю изотони­ческого раствора хлорида натрия.

    3.     Бактериологическую петлю возьмите правой рукой и прожгите ее в пламени горелки.

    4.     Откройте чашку Петри и охлажденной петлей захватите небольшую часть культуры, закройте чашку. Движения не должны быть резкими и размашис­тыми.

    5.      Петлю с культурой опустите на стекло и разотрите материал рядом с каплей изотонического раствора хло­рида натрия, а затем постепенно эмульгируйте в этом рас­творе.

    6.     Остатки культуры на петле сожгите в пламени го­релки. Мазок оставьте для высыхания.

    7.     Мазок высушите на воздухе или держа предметное стекло высоко над пламенем спиртовки. 

             8. Зафиксируйте мазок, трехкратно проведя через верхнюю часть пламени            спиртовки мазком  вверх.  Цель фиксации: закрепить мазок на стекле и убить микробы.

     

    2-й этап: окраска препарата по методу Грама (сложный метод окраски).

    1.     На фиксированный мазок поместите бумажку с генциановым фиолетовым и нанесите несколько капель воды; выдержите 1-2 минуты. Снимите бумагу.

    2.     Не промывая препарата водой, слейте краситель и нанесите раствор Люголя на 1 минуту до полного почернения.

    3.     Слейте раствор Люголя и обработайте мазок 96% спиртом  в течение 30-60 секунд до прекращения отхождения красителя.

    4.     Препарат тщательно промойте водой.

    5.     Нанесите на препарат фуксин на 2-3 минуты, промойте водой и высушите.

    Основная ошибка, допускаемая при окраске по грамму, состоит в «переобесцвечивании» мазка этиловым спиртом. Грамположительные бактерии при этом могут утрачивать первоначальную окраску генциановым фиолетовым и приобретать красный цвет в результате последующей докраски  мазка фуксином. Грамотрицательные бактерии в свою очередь могут сохранят  сине-фиолетовый цвет. Для правильной окраски следует строго соблюдать технику обесцвечивания.

     

    3-й этап: микроскопия окрашенного мазка под иммерсией.

    1.     Установите освещение поля зрения с помощью плоского зеркала.

    2.     На окрашенный препарат нанесите каплю иммерсионного масла.

    3.     Поместите препарат на предметный столик, укрепив зажимами.

    4.     С помощью макровинта под контролем зрения осторожно опускайте иммерсионный объектив отмечен черной полоской до тех пор, пока фронтальная линза объектива не коснется масла.

    5.     С помощью макровинта установите ясное изображение объекта, для наибольшей четкости используйте микровинт. Нельзя допускать соприкосновения объектива с препаратом, так как это может повлечь поломку фронтальной линзы

    6.     После окончания работы поднимите тубус микроскопа, удалите препарат, осторожно удалите масло с линзы объектива с помощью кусочка базевой ткани, смоченной спиртом. Переведите револьвер на малый объектив 8.

    7.     Препарат опустите в емкость с дезинфицирующим раствором.

    3. Записать методы исследования бактерий в живом состоянии
    МИКРОСКОПИЯ БАКТЕРИЙ В ЖИВОМ СОСТОЯНИИ

    Исследование микроорганизмов в живом состоянии применяется главным образом для изучения формы и подвижности бактерий, при выявлении запасных веществ клетки. Определение формы и подвижности бактерий из свежевыделенной культуры проводится в препаратах «раздавленной» или «висячей» капли на предметном стекле, покрытом покровным.

    МЕТОДЫ ПРИГОТОВЛЕНИЯ НАТИВНЫХ ПРЕПАРАТОВ

    I. Метод «раздавленной капли». Для приготовления препарата «раздавленной капли» необходимо использовать хорошо обезжиренные стекла, т. к. на поверхности пыльных и жирных стекол микробные клетки не фиксируются.

    Материалы:

    1) предметное стекло;

    2) покровное стекло;

    3) изотонический раствор хлорида натрия;

    4) пробирка/чашка с культурой бактерий, выросших на плотной/ жидкой питательной среде;

    5) бактериологическая петля или стерильная пастеровская пипетка;

    6) спиртовка.

    Техника приготовления:

    1. На середину обезжиренного предметного стекла бактериологической петлей или стерильной пастеровской пипеткой наносят бульонную культуру и равномерно распределяют на площади в 1 см2.

    Для приготовления мазка из агаровой культуры на предметное стекло наносят каплю физиологического раствора и в ней эмульгируют одну петлю микробов, взятой со среды.

    2. Накрывают покровным стеклом, края которого смазаны вазелиновым маслом, и прижимают его к предметному так, чтобы не образовывались пузырьки воздуха, и жидкость не вышла за края стекла. Капля «раздавливается» между ними. Стеклянной палочкой прижимают покровное стекло к предметному.

    3. На покровное стекло наносят каплю иммерсионного масла и микроскопируют с объективом х90, окуляром х7 при слегка опущенном конденсоре.

    При работе с относительно крупными бактериями можно пользоваться сухими объективами х40 и даже х8 и обойтись без иммерсионного масла.

    Недостаток метода «раздавленной капли» - быстрое высыхание препарата, поэтому его надо микроскопировать сразу после приготовления.

    II. Метод «висячей капли» при определении подвижности бактерий выполняется по тому же принципу, но с различием в монтаже камеры.

    Материалы:

    1) предметное стекло с лункой;

    2) покровное стекло;

    3) изотонический раствор хлорида натрия (NaCl);

    4) пробирка/чашка с культурой бактерий, выросших на плотной/ жидкой питательной среде;

    5) бактериологическая петля или стерильная пастеровская пипетка;

    6) спиртовка.

    Техника приготовления:

    1. Берут покровное стекло, наносят на него 1 каплю исследуемой микробной взвеси.

    2. Накрывают перевернутым предметным стеклом с лункой, но с таким расчетом, чтобы капля оказалась в ее центре. Для сцепления стекол края лунки смазывают вазелиновым маслом. Предметное стекло слегка прижимают к покровному, в результате чего оба стекла склеиваются. После этого препарат переворачивают покровным стеклом кверху. Капля оказывается висячей над лункой. Получается герметически закрытая камера, в которой капля долго не высыхает.

    3. Микроскопию проводят так же, как в предыдущем методе.

    Оценка результата: неподвижные микробы в препаратах «раздавленной» и «висячей» капли создают картину броуновского движения, подвижные - проходят с одинаковой скоростью большие пространства, иногда через все поле зрения «вращаясь» вокруг своей оси.

    III. Прижизненная окраска бактерий. Для такой окраски применяются сильно разбавленные растворы красителей, которые не оказывают токсического действия на бактерии.

    Материалы:

    1) предметное стекло;

    2) покровное стекло;

    3) 0,001% раствора метиленового синего;

    4) пробирка/чашка с культурой бактерий, выросших на плотной/ жидкой питательной среде;

    5) бактериологическая петля или стерильная пастеровская пипетка;

    6) спиртовка.

    Техника приготовления:

    1. На середину предметного стекла наносят каплю 0,001% раствора метиленового синего, в которую следует внести взвесь бактерий.

    2. После чего приготовить препарат «раздавленная капля» и микроскопировать его.

    написать администратору сайта