Токсика 3. 1. Перечислите факторы, которые влияют на эффективность изолирования лек вв из биологического материала
 Скачать 71 Kb.
|
|
1. Перечислите факторы, которые влияют на эффективность изолирования лек.в-в из биологического материала. 1) степень измельчения биологического материала (чем мельче, тем лучше) 2) значение рН среды(обычно 2-3, при котором разрушаются связи «яд-белок») 3) природа и свойства в-в, взятых для изолирования ядов (гидрофильные, липофильные, амфифильные) 4) природа кислоты, взятой для подкисления экстрагента 5) ионная сила растворов 2. Назовите общие методы изолирования лекарственных веществ из биол.мат-ла. Приведите их сравнительную характеристику К общим методам изолирования относятся м- Васильевой и Стаса-Отто.
М-д Вассильеовй: только со свежеприготовленными, быстрее М-д Стаса-Отто: долго, дорого из-за спирта 3. ТСХ-скрининг: суть метода, групповые проявители для самых важных в токсикологическом отношении групп ЛС Суть метода заключается в следующем: на пластины количсетвенно наносят исследуемый экстракт в виде полосы, а по краям – смесь растворов стандартных вещ-в. Хроматографирование проводят в специальных камерах, после этого удаляют растворитель, рассматривают хроматограмму в УФ-свете, отмечают зоны флуоресценции и обрабатывают их реактивами для определения веществ. С помощью этого метода можно распределить препараты и их метаболиты, очистить от примесей, идентифицировать группы препаратов или индивидуальные вещ-ва, количественно оценить анализированный препарат. Проявители для кислых и слабощелочных: барбитураты – 5% серная к-та и 0,1% р-р дифенилкарбазона в хлороформе; салициловая к-та, пиразолон – 5% железа хлорида (3), для алкалоидов – р-в Драгендорфа. Проявители для щелочных и слабощелочных: фенотиазин – 10% серная к-та в этаноле; фенотиазин, пиразолон – 5% железа хлорид; алкалоиды – Драгендорф. 4,5. Основные этапы изолирования по м-ду Васильевой и Стаса-Отто
6. Основные этапы исследования экстракта из биологического материала на лекарственные вещ-ва. Методы, использующиеся на каждом из этапов Объекты исследования → изолирование ядов → очистка, концентрирование, разделение (ТСХ, экстракционный м-д) →предварительные исследования (ТСХ-скрининг) → ТСХ-скрининг в общих системах растворителей → ТСХ-скрининг в отдельных системах растворителей → подтверждающие исследования (физико-химические м-ды – спектроскопия, хроматография, электрофорез; фармакологические пробы; химические м-ды – р-ции осаждения, окрашивания, микрокристаллические р-ции) → количественное определение (все физико-химические м-ды приведенные ранее). 7. Назовите специальные м-ды изолирования барбитуратов. Их характеристика. 1. М-д Валова. Экстракция биологического материала водным раствором натрия гидроксида →центрифугирование → высвобождение центрифугата от белков (подкисливают серной к-той до рН=2, добавляют раствор натрия вольфрамата, кипятят, центрифугируют) → процеживание центрифугата → экстракция кислого центрифугата эфиром → экстрация водой после подщелачивания → экстракция эфиром после подкисления водной вытяжки до рН=2. 2. М-д Поповой Наставивание биологического материала с водой, подксиленной до рН=2-3 кислотой серной 3 раза →процеживание и центрифцгирование вытяжки →очистка центрифугата методом гель-хроматографии →экстракционное концентрирование с помощью хлороформа →выпаривание хлороформной вытяжки 8 Методы очистки экстрактов из биологического материала. Какие используются чаще всего 1. Фильтрование и центрифугирование (чаще) 2. Осаждение белков различными реактивами или при помощи температуры, высаливания, изменения рН (чаще) 3. Экстракция (чаще) 4. Хроматография (чаще) 5. Электрофорез на бумаге 6. Дистилляция с водяным паром и метод сублимации 7. Диализ 9. Какой метод изолирования используется при направленном судебно-токсикологическом исследовании на алкалоиды. Его характеристика Подготовка объекта к исследованию → 2-3 кратное настаивание объекта с 0,2ммоль/л раствором серной к-ты при рН=2,5 → Очистка первичных вытяжек → Очистка высаливанием безводным сульфатом аммония → центрифугирование → 2-кратная экстракция диэтиловым эфиром → подщелачивание кислой водной вытяжки раствором натрия гидроксида до рН=8,5-9 → экстракция веществ из из щелочной вытяжки хлороформом (3-4 раза) → объединение хлороформных вытяжек → исследование алкалоидов. 10. Назовите группы лек.в-в соответственно их характеру поглощения в УФ-области спектра. Примеры 1) не имеют характерного спектра поглощения (пахикарпин, конин) 2) имеют выборочное поглощение, которое не зависит от рН среды (атропин, промедол) 3) имеют выборочное поглощение, которое зависит от рН среды (морфин, барбитураты) 11. На чем основана экстракционная очистка биологических вытяжек. Рассмотреть на примере кислой и щелочной хлороформной вытяжек В основе метода лежит закон распределения вещ-в между растворителями, которые не смешиваются, а также их способность растворяться в органических растворителях, а солей, ими образованных, - в воде. Метод простой, доступный, эффективный. Для экстракции примесей из вытяжек необходимо установление соответствующего значения рН и использование соответствующего растворителя. При неправильном выборе этих факторов вместе с примесями могут экстрагироваться и яды. (Схемы на стр.94) 12. Охарактеризуйте м-д изолирования производных бензодиазепина из биологического материала при направленном анализе М-д Изотова. Объекты исследования → Изолирование (водой, подкисленной кислотой оксалатной с последующей экстракцией в водных растворителях) → Кислотный гидролиз → ТСХ-скрининг → определение продуктов кислотного гидролиза (УФ-лучи, образование азокрасителя) ; определение нативных соединений и метаболитов (Драгендорф, УФ-спектр, Браттон-Маршал) 13. Методы направленного анализа фенотиазина. М-д Саломатина (модиф. Сшедзински) Настаивание биол.мат-ла, подкисленного хлоридной кислотой, с ацетонитрилом при встряхивании→фильтрование ацетонитрильной вытяжки в водный раствор натрия сульфата→экстракция раствора эфиром после подкисления хлоридной кислотой до рН=3→экстракция водно-ацетонитрильной вытяжки эфиром после подщелачивания раствором натрия гидроксида до рН=13→экстракция эфирной вытяжки р-м 1 моль.л серной к-ты М-д Саломатина (модиф. Стаса-отто) Настаивание со спиртом, подкисленным оксалатной к-той до рН=2-3→ упаривание спиртовых вытяжек на водяной бане→ осаждение примесей 96 спиртом→ упаривание спиртовой вытяжки → растворение осадка в воде при нагревании и фильтровании→ подкиление водного р-ра о рН=2-3→экстракция эфиром→подщелачивание водной вытяжки до рН=13→экстракция эфиром→реэкстракция 0,5% р-м серной к-ты 14,15. Схема ТСХ-скрининга кислой и щелочной хлороформной вытяжки Общая система подвижных растворителей → проявители для зон (5% хлорида железа – салицилаты, пиразолоны, сульфат ртути и ДФК - барбитураты, Драгендорфа – пурины) ↓ ТСХ-исследование в отдельных системах растворителей → ТСХ-очистка ↓ Подтверждающие исследования Химические методы: реакции осаждения, образования кристаллов, осаждения Физ-хим: УФ, ИК, ГЖХ 16. Химизм предварительных р-ций на салициловую к-ту (с.113) 17. Схема имидо-имидольной таутомерии барбитуратов. Условия (с.115) 18. Химизм предварительной р-ции на барбитураты. Условия (с.117) 19. Химизм предварительной реакции на производные пиразолона 5 (с.124) 20. Какой реакцией анальгин можно отличить от антипирина. Химизм  Затем в пробирку к охлажденному раствору добавляют 2 капли 1 \%-ного раствора железа (III) хлорида. Наблюдают постепенное появление желто-красного окрашивания 21. Химизм мурексидной пробы на кофеин. (с.137) 22. Групповой реактив на опиаты. Формулы алкалоидов данной группы Кадмия йодид – Морфин (бесцветные иголки, собранные в пучки) , Кодеин (призматические и одиночные кристаллы в пучках) 23. Химизм реакции Витали-Морена (с.137) 24. Цветные реакции на производные фенотиазина. Химизм превращений (с.144) 25. Химическая формула алкалоида ациклического строения. «Цветной» реактив на хроматографическую пластину Соль Рейнеке – тонкие пластинки в виде треугольников 26. Химизм реакции образования азокрасителя продуктов кислотного гидролиза бензодиазепина. (с.148-150) 27. Химизм кислотного гидролиза. Значение в хим.токс.анализе. (с.149-150) 28. Какой из путей метаболизма бензодиазепина наиболее значимый. Химизм |