ИССЛЕДОВАНИЯ КАЛА ПРИ ДИСБАКТЕРИОЗЕ И КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЯХ - Студент 5 курса Лд-504/2
- Таджидинов О.Х.
- Организм человека густо заселен микробами. Больше всего микробов обитает в толстом кишечнике человека (до 3-4 кг. микробов в кишечнике взрослого человека). Микроорганизмы, населяющие кишечник называются микрофлорой кишечника. Для здорового человека характерен определенный качественный и количественный состав микрофлоры (то есть количество определенных видов микробов, населяющих кишечник) который называется нормальной микрофлорой кишечника.
- Нормальная микрофлора кишечника выполняет множество важных функций: она обеспечивает синтез некоторых витаминов в организме, препятствует размножению в кишечнике болезнетворных (патогенных) бактерий, кроме того, повышает защитные силы организма (иммунитет) и участвует в процессах пищеварения.
Показатели нормальной микрофлоры | | | - Тонкая кишка
- (103-105 в 1 мл)
| - Энтеробактерии Г- А Бактероиды Г- Ан
- Вейолонеллы veillonella Г- Ан Bifidobacterium Г+ Ан
- Lactobacillus Г+ Ан Eubacterium Г+ Ан
| - Толстая кишка
- (1011-12 в 1 г кала)
| - Actinomyces spp. G+ Ан, Bacillus spp. Г+ А,
- Bacteroides spp., Г- Ан, Вifidobacterium spp Г+ Ан., Сitrobacter spp. Г- А, clostridium Г+ Ан, Сorynebacterium spp. Г+ А, Enterobacter spp. Г- А, Escherichia coli. Г- А, Lactobacillus spp. Г+ Ан, Peptococcus spp. Г+ Ан, Рeptostreptococcus spp. Г+ Ан, Рseudomonas spp. Г- А, Streptococcus durans Г+ А, Str. Faecalis Г+ А, Str. faecium Г+ А, Staphylococcus spp. Г+ А, Veillonella spp. Г- Ан, Аcidominococcus Г- Ан, Аnaerovibrio, Вutyrovibrio, acetovibrio ( polar flagella), Campylobacter Г- А, Сoprococcus Г+ Ан, Disulfomonas, Eubacterium Г+ Ан, fusobacterium Г- Ан, prorionobacterium Г+ Ан, roseburia, ruminococcus Г+ Ан, selenomonas, spirochetes, succinomonas, wolinella Г- Ан, плесневые грибы, Candida spp.
| Нормальная микрофлора кишечника - Тонкая кишка. Проксимальные отделы тонкой кишки содержат небольшое количество микроорганизмов - не превышает 103-105 КОЕ/мл. Чаще всего встречаются лактобактерии, стрептококки и актиномицеты. Это обусловлено, по-видимому, низким значением рН желудка, характером нормальной двигательной активности кишечника, антибактериальными свойствами желчи.
- В дистальных отделах тонкой кишки количество микроорганизмов увеличивается, достигая 107-108 КОЕ/г, при этом качественный состав сопоставим с таковым микрофлоры толстой кишки.
- Толстая кишка. В дистальных отделах толстой кишки количество микроорганизмов достигает 1011-1012КОЕ/г, а количество встречающихся видов достигает 500. Преобладающими микроорганизмами являются облигатные анаэробы, их содержание в этом отделе пищеварительного тракта превышает таковое аэробов в 1000 раз.
- Облигатная микрофлора представлена в основном бифидобактериями, эубактериями, лактобактериями, бактероидами, фузобактериями, пропионобактериями, пептострептококками, пептококками, клостридиями, вейлонеллами. Все они высокочувствительны к действию кислорода.
- Аэробные и факультативно анаэробные бактерии представлены энтеробактериями, энтерококками и стафилококками.
- В пищеварительном тракте микроорганизмы локализуются на поверхности эпителиальных клеток, в глубоком слое мукозного геля крипт, в толще мукозного геля, покрывающего кишечный эпителий, в просвете кишечника и в бактериальной биопленке.
Дисбактериоз - Это клинико-лабораторный синдром, возникающий при целом ряде заболеваний и клинических ситуаций, который характеризуется изменением качественного и количественного состава нормофлоры определенного биотопа, а также транслокацией определенных ее представителей в несвойственные биотопы с последующими метаболическими и иммунными нарушениями. При дисбиотических нарушениях, как правило, происходят снижение колонизационной резистентности, угнетение функций иммунной системы, повышается восприимчивость к инфекционным заболеваниям.
Причины, приводящие к возникновению дисбактериозов: - • Длительная антибиотико-, химиоили гормонотерапия. Чаще всего дисбиотические нарушения возникают при использовании антибактериальных препаратов, относящихся к группе аминопенициллинов [ампициллин, амоксициллин, линкозаминов (клиндамицин и линкомицин)]. В этом случае наиболее тяжелым осложнением следует считать возникновение псевдомембранозного колита, ассоциированного сClostridium difficile.
- • Воздействие жесткого γ-излучения (лучевая терапия, облучение).
- • Заболевания желудочно-кишечного тракта инфекционной и неинфекционной этиологии (дизентерия, сальмонеллезы, онкологические заболевания).
- • Стрессовые и экстремальные ситуации.
- • Длительное пребывание в стационаре (инфицирование госпитальными штаммами), в условиях замкнутого пространства (космические станции, подводные лодки).
Стадии дисбактериоза - • I стадия компенсированная - фаза латентная (субклиническая). Происходит уменьшение количества одного из представителей индигенной микрофлоры без изменения других составляющих биоценоза. Клинически не проявляется - компенсированная форма дисбактериоза. При этой форме дисбактериоза рекомендуется диета.
- • II стадия - субкомпенсированная форма дисбактериоза. Происходят снижение количества или элиминация отдельных представителей индигенной микрофлоры и увеличение содержания транзиторной условно-патогенной микрофлоры. Для субкомпенсированной формы характерны дисфункция кишечника и местные воспалительные процессы, энтерит, стоматит. При этой форме рекомендуются диета, функциональное питание, а для коррекции - пре- и пробиотики.
- • III стадия - декомпенсированная. Основные тенденции изменения микрофлоры нарастают, условно-патогенные микроорганизмы становятся доминирующими, и отдельные представители распространяются за пределы биотопа и появляются в полостях, органах и тканях, в которых они обычно не встречаются, например E. coli в желчных путях, Candida в моче. Развивается декомпенсированная форма дисбактериоза вплоть до тяжелых септических форм. Для коррекции этой стадии нередко приходится прибегать к так называемой селективной деконтаминации - назначению антибактериальных препаратов из группы фторхинолонов, монобактамов, аминогликозидов per os с последующей длительной коррекцией микрофлоры с помощью диетического питания, пре- и пробиотиков.
Показания к проведению микробиологического исследования кала - - длительно протекающие кишечные расстройства, при которых не удается выделить патогенные микроорганизмы, - затянувшийся период реконвалесценции после дизентерии и других острых кишечных заболеваний, - дисфункция кишечника у лиц, длительно подвергающихся воздействию радиации, химических веществ и т.п., а также при интенсивной антибиотико- и/или иммунодепрессивной терапии, длительной химиотерапии, гормональной терапии, - наличие бактериемии, гнойно-воспалительных очагов, трудно поддающихся лечению (пиелиты, холециститы, язвенный колит, энтероколит, вялотекущие пневмонии), - предоперационный период у лиц с факторами риска развития дисбактериоза кишечника, - аллергические заболевания (атонический дерматит, бронхиальная астма и пр.), трудно поддающиеся лечению.
- У детей первого года жизни показаниями к проведению исследования кала на микробиоценоз дополнительно к вышеперечисленным являются: - внутриутробная инфекция, - раннее искусственное вскармливание, - непереносимость грудного молока, - иммунодефицитные состояния, - частые острые респираторные инфекции, - задержка нарастания и падение массы тела, отставание в физическом развитии, - стоматит, молочница.
Правила сбора кала на дисбактериоз - Материал (кал) на кишечный дисбактериоз собирается до начала лечения антибактериальными и химиотерапевтическими препаратами. Для исследования собирают свежевыделенный кал.
- За 3 - 4 дня до исследования отменить приём слабительных препаратов, касторового и вазелинового масла и прекратить введение ректальных свечей. Кал, полученный после клизмы, а также после приёма бария (при рентгеновском обследовании) для исследования непригоден.
- До сбора анализа помочитесь в унитаз, далее путём естественной дефекации в подкладное судно соберите испражнения (следить, чтобы не попала моча). Подкладное судно предварительно обрабатывается любым дезинфицирующим средством, тщательно промывается проточной водой несколько раз и ополаскивается кипятком.
- Кал собирается в чистый, одноразовый контейнер с завинчивающейся крышкой и ложечкой.
- На контейнере необходимо указать вашу фамилию, инициалы, дату рождения, дату и время сбора материала, запись должна быть сделана разборчивым почерком. В направительном бланке обязательно должен быть указан диагноз и дата начала заболевания, сведения о приёме антибиотиков. При взятии материала необходимо соблюдать стерильность.
- По возможности сбор материала на исследование должен осуществляться до назначения антибиотиков (если невозможно, то не ранее, чем через 12 часов после отмены препарата).
У новорожденных: - 1. утром тщательно прогладить фланелевую пелену и подложить под ребенка
- 2. после опорожнения кишечника стерильным шпателем взять кал в объеме 5-10 г (1 чайная ложка), поместить взятый материал в стерильную банку/контейнер и сразу же закрыть крышкой.
- 3. доставить собранный материал в бактериологическую лабораторию не позднее 1,5-2 часов после сбора материала.
У детей и взрослых - Утром пациент должен опорожнить кишечник в чистое (обдать кипятком) сухое судно без следов дезинфицирующих средств, надеть перчатки и стерильным шпателем взять кал в объеме 5-10 г (1 чайная ложка), поместить взятый материал в стерильную банку/контейнер и сразу же закрыть крышкой. Использованный шпатель и перчатки поместить в полиэтиленовый пакет, завязать и выбросить. Вымыть руки.
- ЕСЛИ судно (горшок) отсутствует, то необходимо взять чистый лист писчей бумаги, прогладить его горячим утюгом с двух сторон до желтоватого цвета. Удалить воду из подставки унитаза, поместить подготовленный лист бумаги. Далее после опорожнения кишечника стерильным шпателем взять кал в объеме 5-10 г (1 чайная ложка), поместить взятый материал в стерильную банку/контейнер и сразу же закрыть крышкой. Использованный лист после процедуры также помещают в полиэтиленовый пакет.
- Доставить собранный материал в бактериологическую лабораторию не позднее 1,5-2 часов после сбора материала.
Условия, соблюдение которых обязательно: - не допускается замораживание;
- не допускается длительное хранение (более 5 - 6 часов);
- не пригодны никакие транспортные среды, кроме указанной;
- не допускается неплотно закрытый контейнер;
- не подлежит исследованию биоматериал, собранный накануне.
методы диагностики дисбактериоза кишечника: - бактериологический анализ (определение состава фекальной микрофлоры, отражающий микробный состав лишь нижних отделов кишечника — наиболее доступный метод, однако недостаточно точный);
- биохимический экспресс-метод определения ферментативной активности надосадочной фракции фекалий;
- высоковольтный электрофорез на бумаге с целью обнаружения бета-аспартилглицина, бета-аспартиллизина, бета-аланина, 5-аминовалериановой и гамма-аминомасляной кислот и др.;
- ионная хроматография;
- газожидкостная хроматография;
- исследование микрофлоры в биоптате тощей кишки, полученном в ходе эндоскопического исследования, — наиболее точный метод, который, однако, из-за технических сложностей не может применяться достаточно широко.
Лабораторная диагностика дисбактериоза кишечника - Метод исследования - бактериологический: мерный посев исследуемого материала с целью определения количества микроорганизмов наиболее значимых групп. Этапы исследования:
- приготовление серийных разведений суспензии испражнений;
- посев на питательные среды из разведений;
- учет результатов посева и ориентировочная идентификация микроорганизмов;
- оценка результатов.
Для подтверждения дисбактериоза используют также: - Копрологическое исследование кала (несомненным признаком является наличие в кале большого количества переваренной клетчатки, внутриклеточного крахмала и йодофильной микрофлоры);
- посев желчи, которая в норме стерильна;
- посев мочи (бактериурия с высевом из мочи кишечной микрофлоры - признак генерализации дисбактериоза).
При дисбактериозе нарушается нормальное соотношение между анаэробной и аэробной микрофлорой - Это прежде всего выражается в: - снижении концентрации бифидобактерий на 1-2 порядка, - снижении концентрации лактобактерий на 1-2 порядка, - нарастании концентрации кишечных палочек с измененными свойствами, - снижении концентрации нормальных кишечных палочек (< 1 млн. на 1 г. фекалий) или увеличение их содержания в 1 г фекалий > 1 млрд., - нарастании концентрации других условнопатогенных микроорганизмов.
Микробиологическе критерии дисбактериоза - - нарастание количества условнопатогенных микроорганизмов одного или нескольких видов в кишечнике при нормальном количестве бифидобактерий; - нарастание одного или нескольких видов условнопатогенных микроорганизмов при умеренном снижении концентрации бифидобактерий (на 1-2 порядка); - снижение содержания облигатных представителей микробиоценоза (бифидобактерий и/или лактобацилл) без регистрируемого увеличения количества сапрофитной или условнопатогенной микрофлоры кишечника; - умеренное или значительное(< 107) снижение содержания бифидобактерий, сочетающееся с выраженными изменениями в аэробной микрофлоре - редукцией лактобацилл, появлением измененных форм кишечной палочки, обнаружением одного или нескольких представителей условнопатогенных микроорганизмов в высоких титрах до 107 - 108 КОЕ/г). Снижение числа анаэробных представителей облигатной микрофлоры, обладающих высокой антагонистической активностью, создает условия для развития условнопатогенных микроорганизмов: энтеробактерий, стафилококков и грибов рода Candida.
Острые кишечные инфекции - Острые кишечные инфекции это группа инфекционных болезней, при которых наблюдается преимущественное поражение кишечника.
- Возбудителями острых кишечных инфекций являются различные виды бактерий и вирусов.
- Острые кишечные инфекции нередко приводят к сильному пищевому отравлению. Основные симптомы острых кишечных инфекций - это сильный понос, боли в животе, тошнота, рвота, повышение температуры. У детей острая кишечная инфекция может проявляться сильным беспокойством, поносом, отказом от пищи.
- Более 60% всех случаев кишечной инфекций встречается у детей. Каждый год от кишечных инфекций в мире умирает около 1 млн. детей (большая часть в возрасте до 2 лет). Ведущим симптомом (который ведет к тяжелым последствиям) кишечных инфекций является сильный понос (диарея). Чаще всего кишечные инфекции встречаются в теплое время года (летом).
Этиология ОКИ - Причиной развития острых кишечных инфекций могут быть бактерий (сальмонелла, шигеллы, стафилококк, холера и др.), а также вирусы (энтеровирус, ротавирус). Кишечные инфекции, передаются преимущественно, через пищу, воду, предметы обихода. Возбудители кишечных инфекций быстро развиваются в еде, в воде, на грязных руках.
Вирусные кишечные инфекции - сем Reoviridae –Реовирус, ротовирус
- сем Picornaviridae –Риновирус, Энтеровирус 69-71
- Норовирус (вирус Норфолк)
Норовирус - Норовирус (старое название — вирус Норфолк, по названию города в штате Огайо, где он впервые был идентифицирован) является одной из главных причин ОКИ во всем мире — как в развивающихся, так и в развитых странах, в том числе и в России. По оценкам, в США 80–90% случаев вспышек эпидемических гастроэнтеритов вызывается норовирусом
- Для выявления норовируса в кале больных широко используется метод ПЦР, обладающий высокой чувствительностью. Этот метод пригоден и для диагностики спорадических случаев, и для инфекционных вспышек, а также используется как метод подтверждения
- Диагностические наборы, основанные на методе ИФА, а также иммунохроматографические экспресс-тесты, хотя несколько уступают в чувствительности ПЦР-анализу, тем не менее обеспечивают быструю и надежную диагностику инфекции в эпидемическом очаге.
- Набор для ИФА RIDASCREEN Norovirus (R-Biopharm) был первым в мире набором, при помощи которого определялись вирусы, принадлежащие к обеим опасным для человека геногруппам GI и GII. При специфичности близкой к 100%, чувствительность современных наборов третьего поколения составляет 80%. Это позволяет, исследуя 2–3 образца, полученных во время вспышки, определить ее норовирусную этиологию с эффективностью, практически не уступающей ПЦР.
- Экспресс-тест RIDA QUICK Norovirus (R-Biopharm) – первый в мире быстрый тест, предложенный для диагностики норовирусной инфекции, — имеет сходные с ИФА показатели чувствительности и специфичности. Время, необходимое для проведения анализа, составляет 20 минут.
- Альтернативой ИФА являются использование быстрых иммунохроматографических тестов. Постоянное совершенствование технологии привело к тому, что их чувствительность и специфичность близки к соответствующим показателям наборов для ИФА. При этом экспресс-тесты выполняются быстро (как правило, не более, чем за 15 минут), проведение анализа и интерпретация результата очень просты, для проведения анализа не требуется специальное оборудование. Очень важно, что анализ может быть проведен непосредственно в инфекционном очаге, что позволяет избежать потери времени на транспортировку образца в лабораторию.
Принцип работы иммунохроматографического экспресс-теста. - 1 – образец, содержащий аналит; 2 – конъюгат; 3,4 – иммобилизованные антитела (тестовая и контрольная полосы); 5 – подушечка для образца; 6 – подушечка для конъюгата; 7 – мембрана; 8 – подушечка для абсорбции реагентов; 9 – подложка для мембраны; 10 – тестовая полоса: положительный результат; 11 – контрольная полоса: достоверный результат теста.
- Положительный результат экспресс-теста RIDA Quick Verotoxin / О157 Combi
- Формат теста: вверху – тест-кассета, внизу – тест-полоска. 1 – участок внесения образца. 2 – участок расположения конъюгата. 3 – реакционная зона; слева направо – контрольная полоса (С); тестовая полоса, свидетельствующая о наличии в образце веротоксина (T2); тестовая полоса, свидетельствующая о наличии антигенов штамма O157 (T1). 4 – участок абсорбции реагентов (закрыт пленкой с названием теста).
Эшерихии (род Escherichia) - Прямые грамотрицательные палочки размером 0,4-0,6x2-6 мкм, подвижные за счет перитрихиально расположенных жгутиков.
- Культуральные свойства. На плотных средах образуют колонии в R- и S-формах. Колонии в S-формах гладкие, блестящие, полупрозрачные. На жидких средах образуют диффузное помутнение и придонный осадок.
- Биохимические свойства. Обладают выраженной биохимической активностью. Биохимическими свойствами, составляющими основу дифференциальной диагностики при бактериологическом исследовании, являются:
- • продукция кислоты и газа при ферментации глюкозы;
- • ферментация лактозы;
- • отсутствие продукции сероводорода;
- • продукция индола.
- Микробиологическая диагностика осуществляется бактериологическим методом. Материалом для исследования при кишечных эшерихиозах служат испражнения, при парентеральных - материал из соответствующего инфекционного очага (моча, отделяемое раны, кровь, ликвор). Исследуемый материал (кроме крови и ликвора) засевается на дифференциальные лактозосодержащие среды, после инкубации при 37 С в течение 18 ч отбираются колонии, агглютинирующиеся поливалентной ОВ-агглютинирующей сывороткой, которые подвергаются идентификации до вида по биохимическим тестам с последующим определением их серологического варианта.
Клебсиеллы (род Klebsiella) - Морфология. Неподвижные грамотрицательные палочки размером 0,3-1,5x0,6-0,8 мкм, имеющие капсулу. Располагаются единично, парами или цепочками.
- Культуральные свойства. За исключением вида K. granulomatis, который на искусственных питательных средах растет плохо, и его культивируют в желточном мешке куриного эмбриона, остальные виды клебсиелл нетребовательны к питательным средам. На жидких средах вызывают диффузное помутнение. На плотных образуют блестящие выпуклые слизистые колонии.
- Биохимические свойства. Способны расщеплять лактозу, поэтому относятся к группе колиформных бактерий. Дифференциация внутри рода на виды и внутри вида. Разделение K. pneumoniae на подвиды производится на основе биохимических свойств. Для клебсиелл характерно отсутствие продукции сероводорода. Они
- способны утилизировать цитрат, малонат, расщеплять мочевину. В отличие от других видов, K. oxytica продуцирует индол.
- Микробиологическая диагностика. Используют бактериологический метод исследования. Материал для исследования, выбор которого зависит от локализации инфекционного процесса, засевают на лактозосодержащие дифференциальные питательные среды с последующим выделением чистой культуры возбудителя и ее идентификацией до вида и подвида. Серологическая диагностика проводится постановкой РСК с О-антигенами. Диагностику донованоза проводят бактериоскопическим методом путем обнаруже- ния телец Донована в мазках из биоптата гранулем, окрашенных по Романовскому-Гимзе.
Шигеллы (род Shigella) - Род получил название по имени К. Шига, который в 1898 г. детально изучил микроб, известный в настоящее время под названием S. dysenteriae, серовара 1.
- Род Shigella включает 4 вида, которые различаются по биохимическим свойствам и антигенной структуре: S. dysenteriae - 12 сероваров; S. flexneri - 9 сероваров; S. Boydii - 18 сероваров; S. sonnei - 1 серовар.
- Морфология. Шигеллы - неподвижные палочки размером 0,5- 0,7x2-3 мкм, спор и капсулу не образуют.
- Культуральные свойства. Хорошо культивируются на простых питательных средах. На плотных средах образуют мелкие гладкие блестящие полупрозрачные колонии, на жидких - диффузное помутнение. Жидкой средой обогащения является селенито- вый бульон. У S. sonnei отмечена при росте на плотных средах S-, R-диссоциация.
- Биохимические свойства. Шигеллы обладают слабой биохимической активностью по сравнению с родами Escherihia и Salmonella.
- Основные биохимические признаки, необходимые для идентификации при выделении чистой культуры:
- • не образуют газ при ферментации глюкозы;
- • не расщепляют лактозу;
- • не продуцируют сероводород.
- S. dysenteriae не расщепляет маннитол. S. sonnei способен ферментировать лактозу медленно, в течение 72 ч.
- Микробиологическая диагностика. Основным методом является бактериологический, материалом для исследования служат испражнения.
- Для посева отбирают гнойно-слизисто-кровяные образования из средней порции кала, которые непосредственно высевают на ряд разных лактозосодержащих и других дифференциальноэлективных плотных питательных сред. В случае выявления бак- терионосителей посев испражнений обязательно проводится в селенитовый бульон с последующим выделением возбудителя на плотных дифференциально-элективных питательных средах.
- Среди выросших на этих средах колоний отбирают лактозоотрицательные, которые идентифицируют до вида и серовара, выделенные культуры S. flexneri - до подсероваров, а S. sonnei - до хемоваров. В качестве вспомогательного используют серологический метод с постановкой РНГА.
Спасибо за внимание! |
Скачать 2.75 Mb.