Вопросы для подготовки к экзамену по микробиологии. Экзаменационные вопросы гори в аду, микроба!!!!! Ирина
 Скачать 1.25 Mb.
|
|
18. Какие препараты могут быть использованы для создания антитоксического иммунитета? Подберите 2-3 из них, поясните принцип их получения и использования. Иммунные сыворотки и получаемые из них иммуноглобулины - биологические препараты, содержащие антитела. Они предназначены для создания пассивного антитоксического, антибактериального или антивирусного иммунитета у человека, нуждающегося в защите от инфекции или других потенциально-опасных веществ, обладающих антигенными свойствами. Гетерологичные иммунные сыворотки получают из крови животных, подвергнутых интенсивной иммунизации антигеном Иммуноглобулины человека готовят из донорской или плацентарной крови, предварительно смешивают сыворотки, полученные из крови разных лиц, и поэтому концентрация в них антител невелика. Например: противокоревой иммуноглобулин используют и для профилактики гепатита, коклюша, менингита и других инфекционных заболеваний. 19. Объясните суть метода молекулярной гибридизации нуклеиновых кислот. Его чувствительность и диагностическая значимость. Метод молекулярной гибридизации позволяет выявить степень сходства различных ДНК. Он применяется при идентификации микробов для определения их точного таксономического положения. Метод основан на способности двунитевой ДНК при повышенной температуре (90 °С) в щелочной среде денатурировать, т.е. расплетаться на две нити, а при понижении температуры на 10 °С вновь восстанавливать исходную двунитевую структуру. 20.Объясните суть методов определения чувствительности культур бактерий к антибиотикам. Проведите учет результатов, сделайте вывод. Метод дисков На поверхность агара в чашке Петри наносят бактериальную суспензию определенной плотности и затем помещают диски, содержащие определенное количество антибиотика. Диффузия антибиотика в агар приводит к формированию зоны подавления роста микроорганизмов вокруг дисков. После инкубации чашек в термостате при температуре 35о- 37оС в течение ночи учитывают результат путем измерения диаметра зоны вокруг диска в миллиметрах. При зоне диаметром до 10 мм штамм считают устойчивым, 11-15мм – малочувствительным, 15-25мм – чувствительным. Метод серийных разведений в жидкой среде Метод последовательных разведений антибиотиков. Готовят серию двукратных разведений антибиотика в жидкой или плотной питательной среде, а затем в пробирки или на поверхность чашек Петри с каждым из разведений засевают испытуемую культуру микробов. После инкубации в термостате определяют минимальную подавляющую концентрацию антибиотика по отсутствию роста в пробирке или на чашке с одним из разведений. 21. Принципы фаготипирования культур бактерий на примере стафилококков, учет. Для фаготипирования бактерий рекомендуется применять хорошо подсушенный 1,5% мясо-пептонный агар с 5% глицерина. ФАГОТИПИРОВАНИЕ СТАФИЛОКОККОВ В различных местностях циркулируют разные фаготипы стафилококков. Поэтому определение их у стафилококковых культур имеет большое значение для выяснения возможного источника инфекции и путей ее распространения. Определение лизируемости стафилококков названными бактериофагами выполняется следующим образом. ПОДГОТОВКА КУЛЬТУР К ФАГОТИПИРОВАНИЮ 1. Определение плазмокоагулирующей способности культур (бактериофагами цитируется только коагулазоположительные штаммы). 2. Подготовка культуры: носер в МПБ с pH -7, 2-7, 4, выращивание при +37 °C 18-24 часа. 3. На следующий день - пересев в свежий МПБ с тем же pH, подращивание культуры в термостате в течение 3 часов. ФАГОТИПИРОВАНИЕ 1. Чашки со свежеприготовленным 1,25% МПА подсушить в термостате в течение 1-1,5 часов. 2. Разделить дно чашки карандашом по стеклу на 23-24 квадрата, в каждом из которых подписать типы испытуемых бактериофагов. 3. Засеять чашку 0,2 мл 3-4 часовой культуры выделенного стафилококка и равномерно распределить шпателем по поверхности среды. 4. Подсушить посев в термостате при +37 °C в течение 30-45 минут. 5. В каждый квадрат петлей нанести каплю соответствующего бактериофага в десятикратном разведении (1:10), произведенном в бульоне Хоттингерa. 6. Каплю фага подсушить, чашки поставить в термостат на 18-20 часов в перевернутом виде. 7. Учет результатов и определение фаготипа стафилококка производится по наличию стерильного пятна на месте лизиса культуры. Положительным считается результат, степень лизиса при котором определяют не менее как на 2 плюса. В этом случае зона лизиса составляет около 50% площади в месте нанесения бактериофага. Во многих случаях культуры стафилококков лизируются не одним, а несколькими фагами, образуя своеобразую фагомозаику из стерильных пятен. Стафилококки, обнаруживающие одну и ту же мозаику или отличающиеся на 1 фаг, считаются идентичными. 22. Промикроскопируйте мазок из стафилококков. Опишите их морфологические и тинкториальные свойства. Отличительные особенности стафилококков и стрептококков: • отсутствие способности к спорообразованию, • сферическая форма, • положительная окраска по Граму Стафилококки представлены неподвижными клетками. В мазках стафилококки расположены одиночно, парами или гроздями винограда 23. Признаки патогенности стафилококков, классификация Род стафилококки входит в семейство Staphylococcae, порядок Bacillales, класс Bacilli, тип Firmicutes, царство Бактерии. род: Staphylococcus виды: S.aureus – наиболее патогенный S.epidermidis – наименее патогенный S.saprophyticus – очень редко вызывает болезни. Патогенез и факторы вирулентности: проникает в организм через поврежденную кожу и слизистые оболочки; энтеротоксины – с пищевыми продуктами (мясо, молоко и др.); образуют и выделяют экзотоксины: гематоксин, лейкоцидин, энтеротоксин, некротоксин; образуют и выделяют ферменты: коагулазу, фибринолизин, гиалуронидазу, ДНК-азу. 24. Промикроскопируйте мазок из стрептококков опишите его морфологические и тинкториальные свойства Стрептококки. В семейство Streptococcaceae входит семь родов, из которых для человека наибольшее значение имеют стрептококки (род Streptococcus) и энтерококки (род Enterococcus). Наиболее значимые виды — S.pyogenes (стрептококки группы А), S.agalactiae (стрептококки группы В), S.pneumoniae (пневмококк), S.viridans (зеленящие стрептококки, биогруппа mutans), Enterococcus faecalis. Морфология. Стрептококки (от греч. streptos — цепочка и coccus — зерно) — грамположительные цитохромнегативные бактерии шаровидной или овоидной формы, растущие чаще в виде цепочек, преимущественно неподвижные, не имеют спор. Патогенные виды образуют капсулу (у пневмококка имеет диагностическое значение). Факультативные (большинство) или строгие анаэробы. 25. Препарат сделанный из материала от больного с подозрением на ОСТРУЮ ГОНОРЕЮ сделайте вывод. В свежих культурах гонококки представляют неподвижные диплококки размером 1,25-1,0x0,7-0,8 мкм, образующие капсулу Характерен полиморфизм гонококков — в мазках встречают относительно мелкие или крупные клетки, а также палочковидные формы. Хорошо окрашиваются анилиновыми красителями (метиленовым синим, бриллиантовым зелёным и др.). Образуют L-формы, в том числе под действием пенициллина. Под влиянием химиопрепаратов быстро меняют свойства и образуют грамположительные формы. Гонококки имеют сложно организованную клеточную стенку; наличие тех или иных её компонентов обусловливает их внутривидовую дифференцировку. По наличию пилей гонококки разделяются на пять типов. 26. Менингококки. Это диплококки, круглые или слегка овальные, бобовидной формы, соединенные между собой по длинной оси вогнутыми сторонами, размером 0,6—0,8 мкм. В мазках из чистых культур могут находиться беспорядочно; в патологическом материале характерно парное расположение клеток различной величины и разной интенсивности окраски. Все нейссерии, в том числе и менингококки, грамотрицательны. Спор не образуют, жгутиков не имеют. В организме человека могут образовывать нежную капсулу, которую утрачивают при культивировании на искусственных средах. Чистая культура N. meningitidis, окраска по Граму 27. На среде Эндо образуют плоские красные колонии средней величины. Красные колонии могут быть с темным металлическим блеском (Е. coli) Биохим. Свойства: Ферментируют с образованием кислоты и газа лактозу, глюкозу, маннит, мальтозу, сахарозу и другие углеводы. Большая часть культур образует индол и сероводород; желатин не разжижают. Встречаются варианты, не разлагающие лактозу и сахарозу. Культуральные свойства: Кишечная палочка имеют типичную для энтеробактерий форму и представлены короткими подвижными палочками с закруглёнными концами. • На плотных средах бактерии образуют плоские выпуклые мутные S-колонии с ровными или слегка волнистыми краями (3-5 мм в диаметре) либо сухие плоские R-колонии с неровными краями. • В жидких средах растут диффузно, вызывая помутнение среды и образование осадка (реже формируют поверхностную плёнку или пристеночное кольцо). • На средах Хисса кишечная палочка может образовывать газ. На селективно-дифференциальных средах колонии принимают цвет, соответствующий окраске среды. На агаре Эндо лактоза-положительные эшерихии образуют фукс и ново-красные колонии с металлическим блеском, лактоза- отрицательные — бледно-розовые или бесцветные с тёмным центром. На среде Левина бактерии формируют тёмно- синие колонии с металлическим блеском, а лактоза-отрицательные — бесцветные, на среде Плоскирева — соответственно красные с жёлтым оттенком или бесцветные. На КА могут давать полный гемолиз. 28. Промикроскопируйте и опишите мазок из чистой культуры брюшнотифозных бактерий. S. tvphi — прямые с закругленными концами грамотрицательные палочки (0,7-1,5 х 2- 5мкм). Подвижны (перитрихи). Имеют микрокапсулу. Факультативные анаэробы. Имеют О-, Н-, Vi-антигены. Внутри вида выделяют фаговары А, В, С. Факторы вирулентности: эндотоксин, каталаза, супероксиддисмутаза, белки наружной мембраны, микрокапсула Мазок из чистой культуры S. typhi. Окраска по Граму. 29. Поясните суть раннего метода диагностики брюшного тифа. Подберите среды и препараты, поясните последовательность. Диагностика: Из нативных испражнений готовят суспензию в 0,9%-м растворе хлорида натрия в соотношении 1:5 - 1:10, оставляют на 30 мин. для оседания крупных частиц. После этого одну каплю надосадочной жидкости засевают на чашки с плотными питательными средами и 1 мл суспензии - в среду обогащения (соотношение материал - среда должно быть 1:5). Все посевы инкубируют при 37 °С на дифференциально-диагностических средах 18 - 24 ч, на висмут-сульфит агаре - 24 - 48 ч. Через 24 ч проводят высев со сред обогащения на плотные среды (висмут-сульфит агар или среду Эндо). Колонии, характерные для данных возбудителей, выросшие на плотных средах, отсевают на полиуглеводную среду. Для выделения S. Typhi предпочтительнее использовать висмут-сульфит агар (ВСА). Типичные колонии S. Typhi имеют черный цвет и окружены черным или коричневым ободком с металлическим блеском. Однако при обильном росте S. Typhi часто не дает характерного почернения ВСА, поэтому чашки должны быть засеяны так, чтобы обеспечить рост отдельных колоний. 30. Промикроскопируйте мазок из шигелл и опишите. Шигеллы — прямые, грамотрицатеольные палочки с закругленными концами, размерами 2—3X0,5—0,7 мкм, не имеют жгутиков, не образуют капсул. Не подвижны. Большинство шигелл снабжены фимбриями общего типа, которые выполняют функцию адгезии к эпителию слизистой оболочки толстой кишки. Имеются половые пили, участвующие в конъюгации. (Мазок из чистой культуры S. flexneri. Окраска по Граму) 31. Ферментативные свойства микробов, засеянных в среды Гисса Среды Гисса (пестрый ряд). Готовится на основе пептонной воды, к которой добавляют химически чистые моно- ди- полисахариды и многоатомные спирты, индикатор и стеклянный поплавок в виде перевернутой маленькой пробирки, для улавливания газообразных продуктов. В состав сред Гисса входит МПБ для определения индола и сероводорода (продукты разложения белков). В состав дифференциально-диагностических углеводных сред входят различные соединения, которые можно условно назвать сахарами: моносахариды, полисахариды, многоатомные спирты. При утилизации углеводов в качестве конечных продуктов образуются кислоты и газообразные продукты. Соответственно расщепление углевода регистрируют по изменению рН среды и выделению газообразных продуктов. Закисление пита- тельной среды улавливают при помощи различных индикаторов. Индикатор BP, входящий в состав сухих сред Гисса, меняет цвет от розового в щелочной среде через серый при нейтральном рН до голубого или ярко-синего в кислой среде. 32. Морфологические и тинкториальные свойства возбудителя чумы. Y. pestis — овоидная палочка. Очень полиморфны. В мазках с плотной питательной среды палочки бывают удлиненными, нитевидными, описаны также фильтрующиеся формы. Бактерии чумы не имеют спор, жгутиков, образуют нежную капсулу. Грамотрицательны. Ввиду неравномерного распределения цитоплазмы концы палочек окрашиваются интенсивнее. Такая биполярность хорошо видна при окраске их метиленовым синим. При росте в жидких средах образуются пленка с отходящими от нее нитями и хлопьевидный осадок. На плотных средах колонии по характеру роста вначале напоминают битое стекло; затем центр их уплотняется, окружается неровными фестончатыми краями в виде кружевного платочка. Характерно образование S (авирулентные) -и R (вирулентные)- форм колоний. Биохимическая активность невелика. Сбраживает с образованием кислоты глюкозу, маннит, мальтозу, арабинозу и левулезу. 33. Опишите препарат приготовленный из культуры холерного вибриона. Поясните ускоренный метод диагностики холеры по Ермольевой. Слегка изогнутая грамотрицательная полиморфная палочка. Монотрих. Спор и капсул не образует. Вибрионы относятся к хемоорганотрофам с окислительным и бродильным типами метаболизма. Ферментируют многие углеводы: глюкозу, мальтозу, сахарозу и другие с образованием кислоты. Разжижают желатин, образуют индол, восстанавливают нитраты в нитриты. Продуцируют такие ферменты как лецитиназа, лизиндекарбоксилаза, орнитиндекарбоксилаза, нейраминидаза. Способность восстанавливать нитраты и образовывать индол лежит в основе положительной нитрозоиндоловой пробы - реакции холера-рот. Вибрионы хорошо растут на простых средах при щелочной реакции рН = 8,5-9,0. На плотных средах образуют небольшие прозрачные круглые колонии, на жидких - пленку с легким помутнением среды. Вибрионы - факультативные анаэробы. По рекомендации 3. В. Ермольевой материалы, взятые от больного, засеваются в пептонную воду, в которую добавлен 0,5% растворимый крахмал. При положительных результатах спустя 6 часов отмечается агглютинация холерных вибрионов, концентрирующихся в верхнем слое среды, последняя не посинеет от добавления еще раствора Люголя с 0,5% растворимого крахмала, ибо холерные вибрионы характерны сильным диастатическим ферментом, разлагающим крахмал с образованием декстринов. Метод Ермольевой состоит в посеве материала в три пробирки: в 1-й - 1% пептонная вода; во 2-й - 1% пептонная вода и агглютинирующая холерная О-сыворотка; в 3-й - 1% пептонная вода с 0.5% растворимого крахмала. Через 3-4 ч инкубации во 2-й пробирке в присутствии холерных вибрионов происходит агглютинация, в 3-й пробирке происходит разложение крахмала; при добавлении раствора Люголя через 6 ч отсутствует синее окрашивание. 34. Морфологические и тинкториальные свойства бруцелл. Возбудители бруцеллеза B.melitensis, B.abortus, B.suis, B.canis, B.ovis . Мелкие, грамотрицательные палочки овоидной формы. Не имеют спор, жгутиков, иногда образуют микрокапсулу. В одном препарате (особенно в молодых культурах) наблюдают кокки и удлинённые палочки. Клетки бруцелл В. melitensis чаще представлены кокковидными формами, В. abortus и В. suis — палочками с закруглёнными концами; бруцеллы в мазках располагаются беспорядочно, нередко в виде скоплений. Бруцеллы легко окрашиваются анилиновыми красителями. Хемоорганотрофы, каталаза- и оксидаза- положительны (кроме В. ovis и В neotomae). Бруцеллы — строгие аэробы. Температурный оптимум 37 °С; оптимальный рН 6,6-7,4. Они требовательны к питательным средам. Посевы обычно проводят на 5% КА (с кровью барана) или печёночный агар. 35. Учет реакции Райта Постановка: Для постановки реакции агглютинации на бруцеллёз применяют свежие сыворотки, взятые от исследуемых животных. Допускается исследование сыворотки, консервированной фенолом до 0,5% со сроком их давности не свыше 15 дней. Реакцию ставят на физиологическом растворе (0,85 о/о) поваренной соли в четырёх разведениях: для свиней, коз, овец и собак 1 :25; 1 :50; 1 :100; 1 :200; для крупного рогатого скота, лошадей верблюдов 1 :50; 1 :100; 1 :200; 1 :400 в количестве 1 см3 каждого разведения, в пробирках с ровным выпуклым дном. При массовых исследованиях допускается постановка реакции в двух первых разведениях: для свиней, коз, овец и собак 1 :25 и 1 :50; для крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов 1 :50 и 1 :100. Для предохранения от прорастания посторонней микрофлоры рекомендуется постановка реакции на фенолизированном 0,5 % физиологическом растворе. Одновременно ставят следующие контроли: а) с отрицательной (негативной) сывороткой в тех же разведениях, как и испытуемые сыворотки, б) с положительной (позитивной) сывороткой до предельного её титра, в) антиген с 1 см3 физиологического раствора. Во все пробирки, в том числе и контроли, при постановке реакции микронипеткой вводят по 0,05 см3 антигена, содержащего в 1 см3 10 млрд. микробных тел. Затем все пробирки тщательно встряхивают до получения равномерной взвеси. Учет: Оценка реакции агглютинации в крестах следующая: ++++ — полное просветление жидкости при наличии явно выраженного зонтика (при встряхивании зонтик разбивается на хлопья, комочки, в крупинки). +++ те же явления, которые отмечаются для четырёх крестов, но жидкость слегка опалесцирует (недостаточно полное просветление). ++ — просветление жидкости выражено слабо. Имеется наличие зонтика, который при встряхивании разбивается на хлопья, комочки и крупинки. + — отсутствие или весьма незначительное просветление при наличии слабо выраженного зонтика или его следов. При встряхивании жидкости заметны комочки и крупинки. — отрицательная реакция агглютинации. Отсутствие просветления и зонтика. Микробы могут оседать в виде точки— пункта; при встряхивании разбиваются в равномерную муть. |