Экзаменационные вопросы по дисциплине Микробиология, вирусология
 Скачать 0.77 Mb.
|
|
Раздел 6. Частная микробиология. 1. Принципы и методы микробиологической диагностики инфекционных заболеваний. Первый принцип лабораторной диагностики – обнаруение возбудителя в исследуемом материале Основу микробиологической диагностики инфекционных заболеваний составляют микроскопические, микробиологические, биологические, молекулярно-генетический, серологические и кожно-аллергологические методы Микроскопический метод основан на микроскопии исследуемого материала, с целью определения морфологии, взаиморасположения клеток и тинкториальных свойств. Культуральный метод основан на выделении чистой культуры возбудителя с целью ее идентификации по определенным свойствам (морфологическим, культуральным, биохимическим и др.). Серологический – основан на выделении в биологических жидкостях (чаще крови) человека специфических АГ с помощью различных реакций: агглютинации, преципитации, связывания комплимента, иммунной флюоресценции и т.д. Биологический метод основан на заражении лабораторных животных исследуемым материалом с целью воспроизведения у них инфекционного процесса, постановки реакции нейтрализации и (или) последующего выделения накопленного возбудителя. Молекулярно-генетический – позволяет обнаружить возбудителя по нескольким молекулам ДНК, содержащимся в крови или поражённых клетках хозяина. Его целесообразно проводить в случаях, когда: трудно выделить чистую культуру возбудителя из-за сложности культивирования; возбудитель характеризуется высокой антигенной изменчивостью; в исследуемом материале имеется крайне низкая концентрация возбудителя или наблюдается длительная его персистенция в организме человека. Второй принцип лабораторной диагностики – обнаружение изменений в иммунитете. Серологический – основан на выделении в биологических жидкостях (чаще крови) человека специфических антител к соответствующим возбудителям с помощью различных реакций: агглютинации, преципитации, связывания комплимента, иммунной флюоресценции и т.д. Кожно-аллергический метод обнаруживает повышенную чувствительность макроорганизма к определенным возбудителям или продуктам их жизнедеятельности (аллергены), применяются для выявления инфицированности организма (но не заболевания) соответствующим микрорганизмом. 2. Стафилококки. Таксономия. Свойства. Характеристика токсинов, ферментов и факторов персистенции. Вызываемые заболевания, источники инфекции, пути передачи, патогенез, особенности иммунитета. Принципы и методы лабораторной диагностики. Таксономия: Царство: прокариоты Отдел: скотобактерии Класс: бактерии Семейство: Мicrococcacae Вид: S.aureus, S.epidermidis и S.saprophyticus Морфологические свойства: Все виды стафилококков представляют собой округлые клетки. В мазке располагаются несимметричными гроздьями. Клеточная стенка содержит большое количество пептидогликана, связанных с ним тейхоевых кислот, протеин А. Спор не образуют, жгутиков не имеют. У некоторых штаммов можно обнаружить капсулу. Могут образовывать L-формы. Тинкториальные свойства: Грамположительны. Культуральные свойства: Стафилококки — факультативные анаэробы. Хорошо растут на простых средах. На плотных средах образуют гладкие, выпуклые колонии с различным пигментом. Могут расти на агаре с высоким содержанием NaCl – ЖСА. Обладают сахаролитическими и протеолитическими ферментами. Стафилококки могут вырабатывать гемолизины, фибринолизин, фосфатазу, лактамазу, бактериоцины, энтеротоксины, коагулазу, гиалуронидазу, нейраминидазу, лецитиназу, каталазу, Эксфолиативный токсин Стафилококки пластичны, быстро приобретают устойчивость к антибактериальным препаратам. Существенную роль в этом играют плазмиды, передающиеся с помощью трансдуцирующих фагов от одной клетки к другой. R-плазмиды детерминируют устойчивость к одному или нескольким антибиотикам, за счет продукции в-лактамазы. Антигенная структура. Около 30 антигенов, представляющих собой белки, полисахариды и тейхоевые кислоты. В составе клеточной стенки стафилококка содержится протеин А, который может прочно связываться с Fc-фрагментом молекулы иммуноглобулина, при этом Fab-фрагмент остается свободным и может соединяться со специфическим антигеном. Чувствительность к бактериофагам (фаготип) обусловлена поверхностными рецепторами. Многие штаммы стафилококков являются лизогенными (образование некоторых токсинов происходит с участием профага). Факторы патогенности: Условно – патогенные. Микрокапсула защищает от фагоцитоза, способствует адгезии микробов; компоненты клеточной стенки – стимулируют развитие воспалительных процессов. Ферменты агрессии: каталаза – защищает бактерии от действия фагоцитов, в-лактамаза – разрушает молекулы антибиотиков. Резистентность. Устойчивость в окружающей среде и чувствительность к дезинфектантам обычная. Патогенез. Источником инфекции стафилококков - человек и некоторые виды животных (больные или носители). Механизмы передачи — респираторный, контактно-бытовой, алиментарный. Иммунитет: Постинфекционный – клеточно-гуморальный, нестойкий, ненапряженный. Клиника. Около 120 клинических форм проявления, которые имеют местный, системный или генерализованный характер. К ним относятся гнойно-воспалительные болезни кожи и мягких тканей (фурункулы, абсцессы), поражения глаз, уха, носоглотки, урогенитального тракта, пищеварительной системы (интоксикации). Микробиологическая диагностика. Материал для исследования – гной, кровь, моча, мокрота, испражнения. Бактериоскопический метод: из исследуемого материала (кроме крови) готовят мазки, окрашивают по Граму. Наличие грам «+» гроздевидных кокков, располагающихся в виде скоплений. Культуральный метод: Материал засевают петлей на чашки с кровяным и желточно-солевым агаром для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37С в течении суток. На следующий день исследуют выросшие колонии на обеих средах. На кровяном агаре отмечают наличие или отсутствие гемолиза. На ЖСА S. aureus образует золотистые круглые выпуклые непрозрачные колонии. Вокруг колоний стафилококков, обладающих лецитиназной активностью, образуются зоны помутнения с перламутровым оттенком. Для окончательного установления вида стафилококка 2—3 колонии пересевают в пробирки со скошенным питательным агаром для получения чистых культур с последующим определением их дифференциальных признаков. S.aureus – «+»: образование плазмокоагулазы, летициназы. Ферментация: глюкозы, маннита, образование а-токсина. Для установления источника госпитальной инфекции выделяют чистые культуры стафилококка от больных и бактерионосителей, после чего проводят их фаготипирование с помощью набора типовых стафилофагов. Фаги разводят до титра, указанного на этикетке. Каждую из исследуемых культур засевают на питательный агар в чашку Петри газоном, высушивают, а затем петлей каплю соответствующего фага наносят на квадраты (по числу фагов, входящих в набор), предварительно размеченные карандашом на дне чашки Петри. Посевы инкубируют при 37 °С. Результаты оценивают на следующий день по наличию лизиса культуры. Серологический метод: в случаях хронической инфекции, определяют титр анти-а-токсина в сыворотке крови больных. Определяют титр АТ к риботейхоевой кислоте (компонент клеточной стенки). Лечение и профилактика. Антибиотики широкого спектра действия – пенициллины (устойчивые к в-лактамазе). В случае тяжелых стафилококковых инфекций, не поддающихся лечению антибиотиками, может быть использована антитоксическая противостафилококковая плазма или иммуноглобулин, иммунизированный адсорбированным стафилококковым анатоксином. Выявление, лечение больных; проведение планового обследования медперсонала, вакцинация стафилококковым анатоксином. Стафилококковый анатоксин: получают из нативного анатоксина путем осаждения трихлоруксусной кислотой и адсорбцией на гидрате оксида алюминия. Стафилококковая вакцина: взвесь коагулазоположительных стафилококков, инактивированных нагреванием. Применяют для лечения длительно текущих заболеваний. Иммуноглобулин человеческий противостафилококковый: гамма-глобулиновая фракция сыворотки крови, содержит стафилококковый анатоксин. Готовят из человеч. крови, с высоким содержанием антител. Применяется для специфического лечения. 3. Стрептококки. Таксономия. Свойства и классификация по антигенной структуре. Характеристика токсинов и ферментов. Отличия пневмококков от других стрептококков. Вызываемые заболевания, иммунитет, принципы и методы лабораторной диагностики. Таксономия. Царство: прокариоты Отдел: скотобактерии Класс: бактерии Семейство: Streptococcacae Вид: S. pyogenes, S. pneumoniae, S .faecalis, Морфологические и культуральные свойства. Стрептококки — это мелкие шаровидные клетки, располагающиеся цепочками, грамположительные, спор не образуют, неподвижные. Большинство штаммов образует капсулу, состоящую из гиалуроновой кислоты. Клеточная стенка содержит белки (М-, Т- и R-антигены), углеводы (группоспецифические) и пептидогликаны. Легко переходят в L-формы. Возбудители растут на средах, обогащенных углеводами, кровью, сывороткой, асцитической жидкостью. На плотных средах обычно образуют мелкие серые колонии. Капсульные штаммы стрептококков группы А образуют слизистые колонии. На жидких средах стрептококки обычно дают придонный рост. Стрептококки — факультативные анаэробы. По характеру роста на кровяном агаре они делятся на культуральные варианты: α-гемолитические (зеленящие), β-гемолитические (полный гемолиз) и негемолитические-γ. Резистентность. Чувствительны к физическим и химическим факторам окружающей среды, могут длительно сохранять жизнеспособность при низких температурах. Устойчивость к антибиотикам приобретается медленно. Патогенность. На основе полисахаридного антигена делятся на серогруппы (А, В, С, О). Стрептококки группы А вырабатывают более 20 веществ, обладающих антигенностью и агрессивностью. На поверхности клетки имеется белковый антиген М, который тесно связан с вирулентностью (препятствует фагоцитозу). Этот белок определяет типовую принадлежность стрептококков. Кофакторам патогенности относят стрептокиназу (фибринолизин) О и S стрептолизин, ДНКазу, гиалуронидазу, эритрогенин. Наиболее патогенны для человека гемолитические стрептококки группы А, называемые S. pyogenes. Этот вид вызывает у человека многие болезни: скарлатину, рожу, ангину, острый эндокардит, послеродовой сепсис, хронический тонзиллит, ревматизм. Иммунитет: постинфекционный нестойкий, ненапряженный. Микробиологическая диагностика. Материал для исследования – гной, моча, кровь, мокрота. Бактериоскопический метод: окраска по Граму мазков из патологического материала. При положительном результате обнаруживают цепочки грам «+» кокков. Бактериологический метод: Исследуемый материал засевают на кровяной агар в чашку Петри. После инкубации при 37 °С в течение 24 ч отмечают характер колоний и наличие вокруг них зон гемолиза. Из части материала, взятого из колоний, готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют. Для получения чистой культуры 1—3 подозрительные колонии пересевают в пробирки со скошенным кровяным агаром и сахарным бульоном. На кровяном агаре Streptococcus pyogenes образует мелкие мутноватые круглые колонии. В бульоне стрептококк дает придонно-пристеночный рост в виде хлопьев, оставляя среду прозрачной. По характеру гемолиза на кровяном агаре стрептококки делятся на три группы: 1) негемолитические; 2) а-гемолитические 3) β-гемолитические, образующие вокруг колонии полностью прозрачную зону гемолиза. Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация выделенной культуры по антигенным свойствам. По данному признаку все стрептококки делят на серологические группы: S. pyogenes (группа А) - ангины, хронический тонзиллит, раневые инфекции, гнойные поражения кожи и подкожной клетчатки, флегмоны, сепсис и др. Скарлатинозные стрептококки (относятся к группе А, но отличаются способностью продуцировать эритрогенный токсин) вызывают скарлатину. S. agalactia (группа В) - сепсис новорожденных (заражение при родах), послеродовые инфекции, менингиты, урогенитальные инфекции у женщин и др. S. equisimis (группа C) и S. anginosus (группа G) - фарингиты, гнойная раневая инфекция, заболевания мочеполовой системы и др. Энтерококки (группа D) - поражение желчевыводящих путей, эндокардиты, раневая инфекция. Группа Виридан - патологические процессы в ротовой полости - кариес, заболевания пародонта (S. mutans), инфекции дыхательных путей (S. pneumoniae) Серогруппу определяют в реакции преципитации с полисахаридным преципитиногеном С. Серовар определяют в реакции агглютинации. Выявленную культуру стрептококка проверяют на чувствительность к антибиотикам методом дисков. Серодиагностика: устанавливают наличие специфических антигенов в крови больного с помощью РСК или реакции преципитации. Антитела к О-стрептолизину определяют для подтверждения диагноза ревматизма. Лечение: Антибиотики широкого спектра действия – пенициллины (устойчивые к в-лактамазе). При выделении стрептококка А – пенициллин. Химиотерапия антибиотиками, к которым выявлена чувствительность микроба – левомицетин, рифампицин. Профилактика: специфической – нет. Неспецифическая - выявление, лечение больных; проведение планового обследования медперсонала, вакцинация стрептококковый бактериофаг(жидкий) – фильтрат фаголизата стрептококка. Применятся наружно, внутрикожно, в/м., О-стрептолизин сухой (лиофильно высушенный фильтрат бульонной культуры стрептококка – активного продуцента О-стрептолизина. Применяется для постановки серологических реакций – определения анти-О-стрептолизина в сыворотке крови больных). 4. Возбудитель скарлатины. Таксономия. Свойства. Иммунитет, определение его напряжённости. Принципы и методы лабораторной диагностики. Таксономия. Царство: прокариоты Отдел: скотобактерии Класс: бактерии Семейство: Streptococcacae Вид: S. pyogenes Эпидемиология. Основной путь передачи инфекции - воздушно-капельный - от больного человека (или носителя) к здоровому. После перенесенного заболевания остается стойкий иммунитет. Поэтому взрослые люди, как правило, не болеют скарлатиной. Наиболее восприимчивы к скарлатине дети. Факторы патогенности стрептококков группы А: (1)Токсины (экзотоксины) 1. О-стрептолизин - мембраны эритроцитов, других клеток, лизосом, кардиотоксическое действие. 2. S-стрептолизин - эритроциты, разрушение лизосом, мембран митохондрий 3. Лейкоцидин - лизис полиморфно-ядерных лейкоцитов - агрессия 4. Цитотоксины - нарушение белкового синтеза в клетках. 5. Эритрогенный токсин ГЗТ - токсин продуцируется только скарлатинозными стрептококками. 6. Пирогенные токсины - пирогенный экзотоксин А (S.pyogenes) - токсическое действие на эндотелий, приводит к возникновению токсического шока. (2) Ферменты 1. Гиалуронидаза - обеспечивает распространение микробов в тканях. 2. Стрептокиназа (фибринолизин) 3. ДНКаза 4. Протеиназа (3) Перекрестно реагирующие антигены (ПРА) Гиалуроновая кислота стрептококков сходна с таковой в канальцах почек гломерулонефриты М-белок стрептококков аналогичен по антигенным свойствам миозину миокарда миокардиты Полисахарид стрептококков перекрестно реагирует с гликопротеинами сердечных клапанов эндокардиты По аутоимунному механизму связанному с ПРА стрептококков развивается такое заболевание как ревматизм. (4) Адгезины - липотейхоевые кислоты, белки клеточной стенки 5) Факторы агрессии (первые четыре - защита от фагоцитоза) 1. Антихемотаксический фактор 2. Имунноглобулиновый Fc-рецептор 3. Капсула (стрептококки групп А и В) 4. М-белок 5. Лейкоцидин Лабораторная диагностика – гной, кровь, отляемое носоглотки, везикулы, пустулы бактериоскопически – посев на кровяной агар – гемолиз, сахарный бульон – помутнение. Иммунитет: напряженный антитоксический гуморально-клеточный с преобладанием гуморального. РПГА – реакция пассивной гемагглютинации (определение напряженности поствакцинального противодифтерийного и противоскарлатинозного антитоксических иммунитетов) Под РПГА понимают реакцию, в которой АТ-а взаимодействуют с высокодисперсными АГ (гаптенами), предварительно адсорбированными на корпускулярных носителях - эритроцитах, которые при этом склеиваются. Компоненты РПГА, применяемой для определения напряженности поствакцинального противодифтерийного антитоксического иммунитета: 1) испытуемая сыворотка крови в разведениях от 1:10 до 1:20480; 2) диагностикум дифтерийный эритроцитарный – дифтерийный анатоксин, адсорбированный на поверхности эритроцитов; 3) физиологический раствор; 4) противодифтерийная контрольная сыворотка с активностью 10МЕ/мл; 5) полистероловые пластины (при их отсутствии – пробирки). Испытуемую сыворотку разводят физ. раствором от 1:10 до 1:20480 в 12 лунках. Вносят по 1 капле диагностикума в каждую лунку. Ставят контроли специфичности реакции с иммунной противодифтерийной антисывороткой (положительная реакция) и нормальной сывороткой (отрицательная реакция). Противодифтерийную контрольную сыворотку (с активностью 10МЕ/мл) разводят от 1:10 до 1:20480 и вносят также по 1 капле диагностикума. Оставляют при комнатной температуре на 3 часа (максимум на 15-20 часов) и читают реакцию. При положительной реакции, в результате образования комплекса (АГ-АТ) на поверхности эритроцитов, последние склеиваются и равномерно покрывают все дно пробирки или всю лунку пластинки в виде зонтика с неровными краями. При отрицательной реакции эритроциты выпадают в осадок в виде маленького диска с ровными краями («пуговки»). Титром антитоксина в исследуемом материале считают последнее максимальное разведение, которое еще вызывает агглютинацию эритроцитов. Расчет активности испытуемой сыворотки производят по формуле: Х=(10ЧА)/В, где: Х – активность испытуемой сыворотки в МЕ/мл.; 10 – титр контрольной сыворотки в МЕ/мл.; А – максимальное разведение испытуемой сыворотки с положительным результатом; В – максимальное разведение контрольной сыворотки с положительным результатом. Неиммунными считаются лица с титром антитоксина менее 0,03 МЕ/мл. (1:20). РПГА с целью определения напряженности противоскарлатинозного антитоксического иммунитета ставят с анатоксином S. pyogenes, адсорбированным на поверхности эритроцитов. 5.Пневмококки, таксономия. Свойства. Серологические группы. Отличительные признаки от других стрептококков. Вызываемые заболевания. Принципы и методы лабораторной диагностики. Таксономия. Царство: прокариоты Отдел: скотобактерии Класс: бактерии Семейство: Streptococcacae Вид: S. pneumonia Морфология: Гр(+) стрептококки. Имеют ланцетовидную форму. Могут изменять форму (полиморфизм). Располагаются попарно (диплококки), каждая пара окружена макрокапсулой. Под капсулой располагается М-белок, похожий по своим свойствам на М-белок S. pyogenes, обеспечивает адгезию. Тип дыхания: Факультативный анаэроб Питание: Рост на МПА, МПБ, расщепляет ряд углеводов, ферментативная активность выражена умеренно. Культивируют на питательных средах с добавлением крови - кровяной агар. Пневмококки на кровяном агаре образуют зеленоватую зону гемолиза, то есть относятся к -гемолитическим стрептококкам. Антигены: 1) Клеточной стенки 2) Капсульные (К-антигены) - более 80 вариантов 3) М-белок Факторы патогенности: Токсины: пневмолизин - мембранотоксин, похожий на О- стрептолизин. Капсула обладает токсичностью. |