Печень. гепатопротекторы 1. Исследование тема диссертации и автореферата по вак 03. 01. 04, кандидат медицинских наук Бачко, Сергей Сергеевич
 Скачать 252 Kb.
|
Заключение диссертации по теме "Биохимия", Бачко, Сергей СергеевичВЫВОДЫ 1. У крыс, при создании токсического поражения печени, вызванного воздействием четыреххлористого углерода, наблюдается формирование синдромов цитолиза, внутрипеченочного холестаза, а также активация процессов перекисного окисления липидов, формировие вторичной дислипидемии, абсолютной гипопротеинемии, гипогликемии, диспротеинемии и дислипопротеидемии. 2. Проведенный анализ химического состава изучаемых липофильных продуктов растительного происхождения, с известными и предполагаемыми гепатопротективными свойствами, показал наличие в их составе значительного количества моно- и полиненасыщенных жирных кислот, жиро- и водорастворимых витаминов. 3. Изучение особенностей влияния на интенсивность свободнорадикального окисления отобранных для исследования растительных масел и лекарственных препаратов в опытах in vitro показало наличие наиболее выраженных антиоксидантных свойств у -льняного масла, масел черного и грецкого орехов, препарата фосфоглив. 4. Исследуемые масла черного и грецкого орехов, льна, а также ; препарат фосфоглив проявили выраженные гепатопротективные свойства, регистрируемые на основании снижения активности ряда индикаторных (AJIT, ACT) и экскреторных (у-ГТП, ЩФ) ферментов печени, а также снижения концентрации билирубина в сыворотке крови крыс. Наиболее выраженный гепатопротективный эффект был обнаружен у препарата фосфоглив и льняного масла. 5. Применение исследуемых липофильных продуктов для лечения животных с моделью острого токсического поражения печени способствовало снижению интенсивности процессов липопероксидации, нормализации работы ферментов антирадикальной защиты, а также характеризовалось тенденцией к восстановлению нормального протекания липидного, белкового и углеводного обменов. 6. Использование льняного масла, масел черного и грецкого орехов, а также препарата фосфоглив для лечения токсического поражении является мощным и эффективным патогенетическим фактором в терапии данного состояния. ЗАКЛЮЧЕНИЕ В ходе проведенного исследования у лабораторных животных после введения четыреххлористого углерода были обнаружены значительные морфо-функциональные изменения в печени и крови. Выраженная гиперферментемия свидетельствовала о повреждении гепатоцитов и проникновении значительного количества ферментов в кровь. Преимущественное увеличение активности AJIT - цитоплазмотического фермента, в отличие от ACT, имеющего митохондриально-цитоплазматическую локализацию, свидетельствовало о повреждении внешних мембран гепатоцитов под действием CCI4. Увеличение активности у-ГТП и ЩФ в крови лабораторных животных также указывало на массивный некроз гепатоцитов, возникающий под воздействием на организм крыс четыреххлористого углерода. Однако повышение концентрации билирубина, преимущественно за счет его прямой фракции, на фоне высокой активности у-ГТП и ЩФ указывала не только на формирование синдрома цитолиза у подопытных животных, но и на развитие синдрома внутрипеченочного холестаза, а также позволяла диагностировать паренхиматозный тип желтухи. Одним из наиболее вероятных механизмов, объясняющих подобные биохимические изменения в крови подопытных животных, является активация процессов перекисного окисления липидов. Это связано с тем, что свободные радикалы, образующиеся из CCU, способствуют повреждению мембран клеток, модуляции апоптоза, развитию окислительного стресса. Согласно полученным данным, при интоксикации тетрахлорметаном, в крови животных наблюдалась активация процессов ПОЛ, регистрируемая по нарастанию концентрации вторичных продуктов липопероксидации, реагирующих с ТБК. Обнаруженное при этом снижение активности СОД и каталазы в крови животных с моделью острого токсического поражения печени, по-видимому, связано с окислительной модификацией функциональных групп ферментов, возникающей под действием избыточного количества АФК и свободных радикалов. Образующиеся при этом конформационные перестройки молекулы фермента, диссоциация белков на субъединицы, а также увеличение скорости их деградации может быть причиной наблюдаемого нами явления. Изучение параметров липидного обмена в крови лабораторных животных, подвергнутых интоксикации СО,, обнаружили наличие у них выраженной гиперхолестеринемии, которая была связана с увеличением содержания ХС в проатерогенной фракции ЛПНП, при одновременном снижении его содержания в антиатерогенной фракции ЛПВП. На основании полученных биохимических данных у крыс была диагностирована вторичная дислипопротеидемия Па типа по В.Б.РгесккЖзоп [1967]. Вследствие того, что основная масса эфиров ХС образуется в крови под действием фермента ЛХАТ, то по соотношению " ,, ь > ЭХС/НЭХС можно было судить об активности данного фермента. Низкая ч > активность ЛХАТ обуславливает накопление НЭХС в ЛП частицах крови, 11 изменяя их физико-химические свойства. Так, НЭХС, накапливаясь в ЛПВП, значительно снижает их холестеринакцепторные свойства, а также нарушает обмен ЭХС между ЛП частицами, вследствие чего в комплексе ЛПНП+ЛПОНП возрастает относительное содержание НЭХС [Л.Н.Лесникова, 2005]. Данные процессы нарушают «обратный» транспорт ХС, тем самым, задерживая его в организме животного. Снижение концентрации ТАГ в сыворотке крови подопытных животных, по-видимому, связан с блокированием синтеза эндогенных ТАГ в печени, возникающий при введении токсина в организм. В связи со сложностью исследования липидного спектра мембран внутренних органов, в качестве диагностического эквивалента использовались эритроциты, так как изменения их липидного спектра коррелируют с изменениями, происходящими в мембранах клеток паренхиматозных органов [В.С.Камышников, 2009]. В эритроцитах крыс с моделью острого токсического поражения печени, вызванном введением ССи наблюдались процессы потери ФЛ, увеличения содержания НЭХС, замене ФХ на СМ, что характеризовало усиление жесткости мембраны, уменьшение ее проницаемости, повышение микровязкости, нарушение процесса микроциркуляции эритроцитов, гипоксии, повреждению эндотелия сосудов. Обнаруженная в ходе проведенного исследования гипогликемия у лабораторных животных, подвергнутых интоксикации тетрахлорметаном, по-видимому, связана с нарушением протекания процессов гликогенолиза и гликонеогеназа в печени, а именно с торможением гликонеогенеза. Снижение концентрации молочной и пировиноградной кислот (продуктов, преимущественно образующихся из глюкозы) в сыворотки крови , животных опытных групп отражали общую тенденцию к гипогликемии у , крыс при интоксикации СС14. Увеличение значения коэффициента , ; лактат/ПВК во II и III группах свидетельствовало о преобладании в тканях анаэробного гликолиза над аэробным и характеризовало степень тканевой гипоксии. Таким образом, при токсическим воздействии тетрахлорметана на печень крыс, у животных возникала абсолютная гипопротеинемия, связанная с непосредственным повреждением гепатоцитов свободными радикалами. Увеличение содержания рассматриваемых метаболитов в крови крыс в динамике, по-видимому, следует рассматривать как положительный прогностический признак, направленный на восстановление белоксинтезирующей функции печени. Обнаруженные биохимические изменения, касающиеся соотношения отдельных белковых фракций сыворотки крови, позволяли диагностировать у подопытных животных диспротеинемию. Снижение фракций а- и у-глобулинов, по-видимому, отражало общую тенденцию к ингибированию синтеза белков печенью под действием CCI4. Относительное возрастание фракции р-глобулинов, по нашему мнению, связано с описанным выше нарушением катаболизма Л11Ш1 ф-липопротеидов), их задержки в кровеносном русле в следствие окисления и снижения аффинности ano Вюо к клеточным рецепторам. Как показали наши исследования, острая интоксикация CCI4 приводила к значительному изменению структуры и функции клеточных мембран гепатоцитов вследствие чего нарушаелась как синтетическая функция печени, так и ее способность к обезвреживанию чужеродных веществ, что требовало проведения метаболической коррекции. Рядом экспериментальных и клинических работ было показано, что количество и состав липидов крови, а также клеточных Мембран определяется количеством и качеством принятых с пищей жирных кислот, входящих в состав продуктов растительного и животного происхождения. Проведенный анализ жирнокислотного состава изучаемых масел показал, что масла кукурузы и подсолнечника из насыщенных жирных кислот содержат пальмитиновую и стеариновую кислоты. Причем пальмитиновой кислоты больше, чем стеариновой. Из ненасыщенных жирных кислот в данных маслах были обнаружены в наибольшем количестве олеиновая и линолевая кислоты. В среднем содержание линолевой кислоты было в 2 раза больше, чем олеиновой Оливковое масло содержало приемущественно олеиновую жирную кислоту (до 83%). Другие жирные кислоты ненасыщенные - линолевая, линоленовая, пальмитолеиновая и насыщенные - пальмитиновая, стеариновая, арахиновая были представлены в незначительных количествах. Особенностью жирнокислотного состава льняного масла явилось наличие большого количества ю-6 жирных кислот. В некоторых из этих масел содержание триеновой а-линоленовой жирной кислоты достигало 57,5%. Масло льна содержало не более 10% насыщенных жирных кислот, из которых в среднем 5,5% приходится на пальмитиновую и 4,5% - на стеариновую кислоты. Вместе с тем уровень олеиновой кислоты изменялся от 21,7 до 28,4%, а линолевой - от 12,2 до 20,7%. Таким образом, высокая степень ненасыщенности льняного масла определена тем, что более 70% жирных кислот, входящие в его состав имеют от одной до трех двойных связей. Особый интерес представлял анализ жирнокислотного состава ранее практически не изученных масел черного и грецкого орехов. К особенностям их жирнокислотного состава следует отнести высокое содержание линолевой кислоты (более 60%) как у подсолнечного масла. Масло черного ореха, по сравнению с маслом грецкого ореха, содержало больше олеиновой жирной кислоты. В отличие от оливкового масла орехи содержали в значительно большем количестве полиненасыщенные линолевую и линоленовую кислоты, и значительно уступали в доле мононенасыщенной олеиновой кислоты. По содержанию линолевой жирной кислоты масла черного и грецкого орехов также превосходили масла подсолнечника и кукурузы. Используемые в данном исследовании фосфолипидные концентраты широко распространены на российском рынке. Основу их составляют фосфолипиды (преимущественно фосфатидилхолин), получаемые из сои. Их жирнокислотный состав представлен полиненасыщенными жирными кислотами, в основном линолевой (около 70%) кислотой Согласно приведенным данным, препараты Эссенциале форте Н и Эссливер форте имели одинаковый химический состав и кроме фосфолипидов содержали комплекс водо- и жирорастворимых витаминов. Содержание фосфолипидов в составе препарата Фосфоглив было значительно ниже, чем в других фосфолипидных концентратах, однако в данное лекарственное средство входила глицирризиновая кислота, обладающая противовоспалительными свойствами, а также за счет детергентного действия обеспечивала эмульгирование фасфатидилхолина в кишечнике, что усиливало его переваривание и всасывание. Изучение особенностей влияния на интенсивность ПОЛ отобранных для исследования растительных масел и лекарственных препаратов показало наличие у них антиоксидантных свойств. Исследуемые продукты достоверно снижали содержание ТБК-РП в липосомах в течение первых 12 часов окисления, но при большей длительности процесса ПОЛ выраженность антиоксидантного действия заметно снижалась, а у ретинола проявлялись прооксидантные свойства. Высокая антиоксидантная активность исследуемых продуктов на начальном этапе ПОЛ согласуется с известными данными о механизме антиоксидантного действия химических соединений, содержащих в своем составе ненасыщенные связи (фосфолипиды, триглицериды, жирорастворимые витамины и др.). Имея в своем составе реакционноспособные двойные связи, они перехватывают свободные радикалы - инициаторы ПОЛ, конкурируя за них с молекулами липидов и тем самым защищая последние от интенсивного окисления. Однако такая ситуация сохраняется лишь до тех пор, пока содержание антиоксиданта описанного типа достаточно для перехвата основного количества образующихся в ходе СРО радикалов. После истощения пула антиоксидантов с ненасыщенными связями скорость СРО существенно возрастает. Кроме того, при определенных условиях продукты окисления самих антиоксидантов этой группы могут вовлекаться в дальнейшее развитие реакций СРО, что определяет наличие у антиоксидантов с ненасыщенными связями прооксидантных свойств. По-видимому, отсутствие у растительных масел и фосфолипидных концентратов прооксидантных свойств было обусловлено наличием в их составе различных компонентов, обладающих антиоксидантными свойствами. В целом, по величине антиоксидантного эффекта исследуемые продукты можно расположить следующим образом: ретинола ацетат < оливковое масло < кукурузное масло < подсолнечное масло < эссливер форте < эссенциале форте < масло грецкого ореха < фосфоглив < масло черного ореха < льняное масло. В связи с этим для дальнейших исследований были отобраны четыре наиболее перспективных продукта (льняное масло, масло черного и грецкого орехов, фосфоглив), обладающие наиболее выраженными антиоксидантными свойствами. Согласно проведенному нами исследованию, на фоне лечебного введения экспериментальным животным изучаемых растительных продуктов, наблюдалась общая тенденция к уменьшению активности патологического процесса в печени. Все исследуемые масла (черного и грецкого орехов, льна), а также препарат фосфоглив проявили выраженные гепатопротективные свойства, регистрируемые на основании снижения активности ряда индикаторных (AJIT, ACT) и экскреторных (у-ГТП, ЩФ) ферментов печени, а также снижения концентрации билирубина в J * сыворотке крови крыс. Использование указанных растительных продуктов,; способствовало уменьшению выраженности цитолитического, холестатического и токсического синдромов у лабораторных животных. По степени выраженности гепатопротективных свойств растительные продукты можно расположить в следующем порядке: фосфоглив > льняное масло > масло черного ореха = масло грецкого ореха. При введении изучаемых продуктов растительного происхождения в организм животных с моделью острого токсического поражения печени, было обнаружено снижение содержания ТБК-РП в плазме крови, а также выраженная тенденция к нормализации работы ферментов первой и второй линий антирадикальной защиты, что отражало процесс инактивации процессов ПОЛ в периферических тканях и органах. Наиболее выражен этот эффект был в группе 1УГ. Липидный спектр крови крыс с моделью токсического поражения печени под воздействием растительных масел и лекарственного препарата фосфоглив также имел тенденцию к восстановлению. Уровень ТАГ повышался, а содержание ОХС снижалось в сыворотке крови крыс всех опытных группах по сравнению с группой сравнения. При анализе распределения ХС между ЛП частицами отмечалось снижение его содержания в проатерогенной фракции Л11Ш1. В эритроцитах крыс 1УА, 1УБ, IVе, 1Уг групп под действием растительных масел и лекарственного препарата фосфоглив происходило насыщение эритроцитов ФЛ, замещение СМ на ФХ, и ФС на ФЭА, уменьшение доли ЛФХ и ЛФЭА. Что характеризует процессы улучшения их реологических свойств, увеличение текучести мембраны, нормализации ее проницаемости. Наиболее выражены описанные изменения были в группе крыс получавших льняное масло (1УГ группа). Под действием изучаемых растительных масел и препарата фосфоглив, наблюдалась тенденция к нормализации параметров углеводного и белкового обменов у лабораторных животных с моделью токсического поражения печени. Это выражалось в увеличении концентрации глюкозы в сыворотке крови, а также преобладании аэробного пути окисления глюкозы над анаэробным, о чем свидетельствовало увеличении доли ПВК и снижение коэффициента лакгат/ПВК, увеличение содержания общего белка в сыворотке крови как за счет фракции альбуминов, так и за счет глобулинов. Изучение содержания отдельных фракций глобулинов в сыворотке крови животных опытных групп на фоне терапии гепатопротекторами показало увеличение фракции а-глобулинов и у-глобулинов, снижения фракция Р-глобулинов на фоне лечения исследуемыми продуктами. Наиболее выражены обнаруженные г» изменения были зарегистрированы в группе IV (льняное масло). Научная библиотека диссертаций и авторефератов disserCat http://www.dissercat.com/content/sravnitelnaya-biokhimicheskaya-kharakteristika-metabolicheskikh-svoistv-razlichnykh-gepatopr#ixzz2yTaMjJWAАвтореферат Начало формы  Конец формы Диссертация Начало формы Конец формы Артикул: 447876 Год: 2011 Автор научной работы: Бачко, Сергей Сергеевич Ученая cтепень: кандидат медицинских наук Место защиты диссертации: Краснодар Код cпециальности ВАК: 03.01.04 Специальность: Биохимия Количество cтраниц: 155 |