БИОХИМИЯ. Кровь. Общие свойства. Кровь. Общие свойства. Биохимия плазмы крови
 Скачать 3.26 Mb.
|
Кровь. Общие свойства. Биохимия плазмы кровиПЛАН ЛЕКЦИИ1. Кровь: клеточный состав, функции, физико-химические константы и свойства. 2. Плазма и сыворотка крови: качественный и количественный состав органических соединений их классификация, функции и клинико-диагностическое значение. Неорганические соединения: перечислить; их общие функции. 3. Белки и ферменты плазмы крови: классификация, методы количественного определения и качественного разделения. Клинико-диагностическое значение электрофореграмм. Гипо- гипер- пара- дис- протеинемии: определение понятий причины, диагностическое значение, последствия. 4. Альбумины: место биосинтеза, особенности структуры, физико-химические свойства, физиологическая роль, диагностическое значение. 5. Глобулины и фракций: характеристика отдельных представителей по структуре, физико–химическим свойствам, физиологическим функциям, диагностическому значению. Белки острой фазы воспаления - 1-антитрипсин, гаптоглобин, С-рективный белок, 2-макроглобулин: причины появления, место биосинтеза, физиологическое и клиническое значение. 6. Иммуноглобулины: классификация, общая структура, место биосинтеза, функции каждого класса. Другие регуляторы иммуногенеза: интерлейкины, интерфероны, система комплемента и др.- понятие, место биосинтеза, функции. Функции крови:Основная функция крови - это транспорт веществ и тепловой энергии; Дыхательная функция. Кровь переносит газы: О2 от легких к органам и тканям, а обратно СО2; Трофическая и выделительная функция. Кровь доставляет органам и тканям питательные вещества, забирая от них продукты метаболизма; Коммуникативная функция. Кровь переносит гомоны от места их синтеза к органам-мишеням; Кровь транспортирует по организму воду и ионы; Терморегуляторная функция. Кровь перераспределяет в организме тепловую энергию; Кровь содержит различные буферные системы, которые участвую в поддержании кислотно-основного равновесия; Кровь, с помощью неспецифического и специфического иммунитета, защищает организм от внешних и внутренних вредных факторов. Общие и специфические свойства крови:Объем 4-6 л. Удельная плотность крови – 1050-1060 г/л; плазмы – 1,025-1,034 г/л; эритроцитов – 1,080-1,097 г/л; Вязкость – 4 – 5 мПа; рН капиллярной крови – 7.37 – 7.45; рН венозной крови 7.32 – 7.42; Осмотическое давление: 7,6 атм. Онкотическое давление – 0,03 атм. СОЭ: мужчины – 1 – 10 мм/ч; женщины – 2-15 мм/ч; Цветовой показатель – 0,86 – 1,05; Гематокрит: мужчины – 40-48%; женщины – 36-42% Кровь является разновидностью соединительной ткани и, как любая ткань, состоит из клеток и межклеточного вещества. 1. КЛЕТОЧНЫЙ СОСТАВ КРОВИ Форменные элементы (клетки) крови составляют 45% от общего объема крови.
В основном форменные элементы крови образуются в красном костном мозге, разрушаются в селезенке Гематологические исследованияЭДТА-К2/3. Цвет крышки – сиреневый (маркировка G2K*, P2K*, G3K*, P3K*) Этилендиаминтетраацетат (ЭДТА, трилон Б) - антикоагулянт для гематологических и ПЦР исследований. ЭДТА создает хелатные соединения с IV фактором свертывания крови (Ca2+) с образованием растворимых высокостабильных комплексов. Цитрат натрия. Цвет крышки – голубой (маркировка G8C*, P8C*, G2C*, P2C*) Цитрат натрия является антикоагулянтом для сбора венозной крови с целью проведения исследований коагуляционных свойств крови. Антикоагуляционные свойства цитрата проявляются в формировании комплекса с ионами Са2+. Биохимические исследования2. МЕЖКЛЕТОЧНОЕ ВЕЩЕСТВО КРОВИ Межклеточное вещество крови называется плазмой крови, она составляет 55% от общего объема крови. Для получения плазмы крови, цельную кровь центрифугируют с антикоагулянтами: ЭДТА Цитрат натрия Гепарин Гепарин Гепарин активирует создание комплексов между антитромбином III и тромбином, факторами XIIa, XIa, Xa, IXa и VIIa. В таком комплексе факторы свертывания инактивируются необратимо. Для проведения исследований: электролитного состава крови, газового состава крови, содержания алкоголя в крови. маркировка (GLH*, PLH*, GSH*, PSH*) Для определения концентрации глюкозы в крови Фторид натрия/ЭДТА калия. Цвет крышки – серый (маркировка GSF*, PSF*) Фторид натрия ингибирует киназы и позволяет предотвратить потребление глюкозы в гликолизе клетками крови Нельзя использовать для определения активности ферментов. Существует также понятие сыворотка крови, в отличие от плазмы сыворотка крови не содержит белок фибриноген. Сыворотку крови получают при центрифугировании цельной крови без антикоагулянта, с фактором свертывания крови (clot activator). кремния диоксид кремния диоксид + олефиновый гель Сыворотка крови применяется для биохимических, ИФА и иммунологических исследований Центрифугирование
ОСТАТОЧНЫЙ АЗОТ (безбелковый азот) –7,06–14,1 ммоль/л (0,2–0,4 г/л)
Источниками органических компонентов крови являются пища, метаболические процессы протекающие в печени, ЖКТ, почках, эндотелии сосудов, других органах и тканях. Минеральные компоненты поступают в кровь из пищи и могут выходить в кровь из органов тканей (костная) Газы поступаю в кровь из воздуха, СО2 и из тканей при катаболизме. Белки кровиВ плазме крови открыто более 100 видов белков, которые составляют 6,5- 8,5% объема плазмы. Белки плазмы крови синтезируются в основном в печени и макрофагах, а также в эндотелии сосудов, в кишечнике, лимфоцитах, почках, эндокринных железах. Разрушаются белки плазмы крови печенью, почками, мышцами и др. органами. Т½ белков плазмы крови составляет от нескольких часов до несколько недель Функции белков крови:Создают онкотическое давление. Оно необходимо для удержания воды в кровяном русле. Участвуют в свертывании крови. Образуют буферную систему (белковый буфер). Транспортируют в крови плохорастворимые в воде вещества (липиды, металлы 2 и более валентности). Участвуют в иммунных процессах. Образуют резерв аминокислот, который используется, например, при белковом голодании. катализируют некоторые реакции (белки-ферменты). Определяют вязкость крови, влияют на гемодинамику. Участвуют в реакциях воспаления. Возрастные нормы содержания общего белка в сыворотке крови:новорожденные - 48-73 г/л, дети до 1 года - 47-72 г/л, дети 1-4 лет - 61-75 г/л, дети 5-7 лет - 52-78 г/л, дети 8-15 лет - 58-76 г/л, взрослые - 64-83 г/л, старше 60 лет - 62-81 г/л. Определение общего белкаПРИНЦИП Белок реагирует в щелочной среде с раствором сульфата меди, содержащим тартрат (биуретовый реагент), формируя фиолетово-голубой комплекс. Оптическая плотность образующегося комплекса пропорциональна концентрации белка в пробе. Гипопротеинемия – снижение белка в кровиАбсолютная: Острое и хроническое воспаление
Термические ожоги. Большинство бактериальных инфекций. Вирусные инфекции. Некроз ткани. Некоторые паразитарные поражения. Понижение синтеза в печени заболевания печени. нарушения питания. злокачественные новообразования. сердечная недостаточность. врожденная анальбуминемия. при беременности. Увеличение потери через поверхность тела
Термические ожоги. Травмы и раздавливание тканей. Транссудация или экссудация из полых органов или эпителиальных поверхностей. После кровотечений и введения кровозамещающих жидкостей. Желудочно-кишечные и лимфатические фистулы. Повышение катаболизма Повышенная температура тела. Семейная идиопатическая гипопротеинемия. Состояния гиперметаболизма гормонального происхождения ( тиреотоксикоз, некоторые злокачественные новообразования). Относительная: Повышение объёма крови (гиперволемия) Гиперпротеинемия – повышение белка в кровиАбсолютная: миеломной болезни и болезни Вальдемстрема - повышенным образованием патологических белков; Относительная: дегидратации организма при: травмах, ожогах, тяжелых инфекциях. Строение белков плазмы кровиПростые Сложные Альбумин Гликопротеины Липопротеины Металлопротеины Значительная часть белков (гаммаглобулины) ЛПВП ЛППП ЛПНП ХМ Трансферрин Церрулоплазмин Фракции белковЭлектрофорез на бумаге выделяют 5 белковых фракций, в агаровом геле — 7—8, в крахмальном геле — 16—18, методом иммуноэлектрофореза — около 30 Высаливание (3 фракции: альбумины, глобулины и фибриноген) Осаждение в спиртовом растворе альбумины глобулины α1 глобулины α2 глобулины β глобулины γ
Показатели белкового обмена плазмы крови у взрослых людейОбщий белок 65-85 г/л (100 %) Белковые фракции : Альбумины 40-50г/л (51 – 61,5%) Глобулины 20-30г/л (33,2 – 43,5%) Альфа 1 – глобулины 3,6 – 5,6% Альфа 2 – глобулины 5,1 – 8,3% Бета – глобулины 9 – 13% Гамма – глобулины 15 – 22% Фибриноген 2-4г/л (3 – 4%) Альбумин/ глобулин 1,2 – 1,9 Комаров Ф.И., 1982 Нарушение соотношения белковых фракций плазмы крови называется диспротеинемия. Парапротеинемия – появление в плазме крови нехарактерных белков. α-Фетоглобулин — один из фетальных антигенов, которые циркулируют в крови примерно у 70% больных с первичной гепатомой. Этот антиген выявляется также у пациентов с раком желудка, предстательной железы и примитивными опухолями яичка. Диспротеинемии определяются диспротеинемическими тестами: Проба Вельтмана (0,4-0,5 мл раствор Са2+) Сулемовая проба (1,6-2,2 мл HgCl2) Тимоловая проба (тимоловый буфер) Белки острой фазы воспаления Понятие "белки острой фазы" объединяет до 30 белков плазмы крови, участвующих в реакции воспалительного ответа организма на повреждение. Белки острой фазы синтезируются в печени, их концентрация существенно изменяется и зависит от стадии, течения заболевания и массивности повреждения. Синтез белков острой фазы воспаления в печени стимулируют вещества, образующиеся в очагах воспаления: 1). ИЛ-6, 2). ИЛ-1 и сходные с ним по действию (ИЛ-1 а, ИЛ-1Р, факторы некроза опухолей ФНО-ОС и ФНО-Р); 3). Глюкокортикоиды; 4). Факторы роста (инсулин, факторы роста гепатоцитов, фибробластов, тромбоцитов). Классификация белков острой фазы (воспаления) по механизму действияингибиторы протеаз (кислый a1-гликопротеид, а-антитрипсин); антиоксиданты (гаптоглобин, церулоплазмин); иммуноглобулины и антителоподобные вещества (антитела, С-реактивный белок). Положительные – при воспалении повышаются (СРБ, кислый a1-гликопротеид, a1- Антитрипсин, Гаптоглобин, Фибриноген, церулоплазмин) Отрицательные – при воспалении снижаются (альбумин, преальбумин, трансферин) Нейтральные – при воспалении не изменяются (гаммаглобулины G,A,M, a2 – Макроглобулин) Классификация белков острой фазы (воспаления) по реакции Основные представители белков плазмы кровиАльбуминыОсновным белком этой фракции является альбумин. Альбумин. Простой белок из 585 АК, имеет много дикарбоновых АК, обладает высокой гидрофобностью. Синтезируется в печени (12 г/сут), утилизируется почками, энтероцитами и др. тканями. Т½=20 дней. 60% - в межклеточном веществе, 40% - в кровяном русле. В плазме 40-50г/л, они составляют 60% всех белков плазмы крови. Функции: поддержание онкотического давления (вклад 80%), транспорт СЖК, билирубина, жёлчных кислот, стероидных и тиреоидных гормонов, ХС, лекарств, неорганических ионов (Cu2+, Ca2+, Zn2+), является источником аминокислот. Диспротеинемия преимущественно за счет гипоальбуминемии. Глобулиныα1-глобулины: α1-антитрипсин Кислый α1-гликопротеин ЛПВП Протромбин Транскортин Тироксинсвязывающий глобулин α2-глобулины: α2-макроглобулин Гаптоглобин Витамин Д-связывающий белок Церулоплазмин Антитромбин III Ретинолсвязывающий белок Парапротеины β-глобулины:β-глобулины: ЛПОНП, ЛППП, ЛПНП Трансферрин Фибриноген С-реактивный белок γ-глобулины (антитела). Классы: G,A,M,E,D. α1-Антитрипсин - гликопротеин, синтезируемый печенью. В плазме 2,5г/л. Белок острой фазы +. Ингибитор протеаз, в том числе эластаз нейтрофилов, которые разрушают эластин альвеол лёгких и печени. Ингибирует коллагеназу кожи, химотрипсин, протеазы грибков и лейкоцитов. При дефиците могут возникнуть эмфизема лёгких и гепатит, приводящий к циррозу печени. α1-глобулины: Кислый α1- гликопротеин, синтезируется печенью. В плазме 1 г/л. Белок острой фазы +. Транспортирует прогестерон и сопутствующие гормоны. Диспротеинемия за счет : 1). снижения синтеза α1-антитрипсина. 2). Потере белков этой фракции с мочой при нефротическом синдроме. 3). повышения белков острой фазы в период воспаления. α2-глобулины α2-Макроглобулин очень крупный белок (725 кДа), синтезируется в печени. Белок острой фазы +. В плазме 2,6 г/л. Главный ингибитор множество классов протеиназ плазмы, регулирует свертывание крови, фибринолиз, кининогенез, иммунные реакции. Уровень в плазме уменьшается в острой фазе панкреатита и карциномы простаты, увеличивается - в результате гормонального эффекта (эстрогены). Гаптоглобин – гликопротеид, синтезируется в печени. В плазме 1 г/л. Белок острой фазы +. Связывает гемоглобин с образованием комплекса, обладающего пероксидазной активностью, препятствует потери железа из организма. Ингибирует катепсины С, В и L, может участвовать в утилизации некоторых патогенных бактерий. Церулоплазмин - главный медьсодержащий белок плазмы (содержит 95% меди в плазмы), синтезируется в печени. Белок острой фазы +. В плазме 0,35 г/л. Т½=6 суток. Диспротеинемия при воспалении, т.к. в этой фракции содержатся белки острой фазы. Обладает оксидазной активностью; обеспечивает транспорт железа в трансферине (Fe3+–Fe2+), активирует окисление аскорбиновой кислоты, норадреналина, серотонина и сульфгидрильных соединений, инактивирует активные формы кислорода, предотвращая ПОЛ. β-глобулиныПри снижении концентрации железа синтез трансферрина возрастает. Белок острой фазы «-». Снижается при печеночной недостаточности. Трансферрин – гликопротеин, синтезируется печенью. В плазме 3 г/л. Т½=8 суток. Главный транспортер железа в плазме С-реактивный белок синтезируется преимущественно в гепатоцитах (может эндотелиоцитами артерий). В плазме <0,01 г/л. Белок острой фазы +++. Синтез стимулируют антигены, иммунные комплексы, бактерии, грибы, травма. Способен связывать микроорганизмы, токсины, частицы поврежденных тканей, препятствуя их распространению Диспротеинемия может возникать при 1). некоторых дислипопротеинемиях; 2). воспалении, т.к. в этой фракции содержатся белки острой фазы; 3). При нарушении свертывающей системы крови Эти комплексы активируют комплемент по классическому пути, стимулируя процессы фагоцитоза и элиминации вредных продуктов. Обладает антигепариновой активностью, ингибирует агрегацию тромбоцитов. СРБ - это маркер скорости атеросклероза, воспалительных заболеваний различных органов. ГаммаглобулиныСинтезируются функционально активными В-лимфоцитами (плазмоцитами). У взрослого человека 107 клонов В-лимфоцитов которые синтезируют 107 видов γ-глобулинов. Все γ-глобулины разделены на 5 классов G,A,M,D,E. В каждом классе выделяют несколько подклассов. Строение гаммаглобулина – антитела1 - легкая цепь; 2 - тяжелая цепь; 3 - гипервариабельные участки; 4 - шарнирная область; 5 - остаток олигосахарида; 6 - N-концы; 7 - С-концы; VL и VH - соотв. вариабельные домены легкой и тяжелой цепей; CH1, CH2 и СH3 - постоянные домены тяжелой цепи; пунктиром обведены Fab- и Fc-фрагменты. Иммуноглобулины G – мономеры, 75% от общего количества Ig. Ведущая роль в обеспечении длительного гуморального иммунитета при инфекционных заболеваниях. Синтезируются в ответ на хроническую, возвратную инфекцию или аутоиммунное заболевание (вторичный иммунитет). Участвуют в нейтрализации бактериальных экзотоксинов, фагоцитозе, фиксации комплемента, в аллергических реакциях. Имеет небольшой молекулярный вес могут (единственные из всех иммуноглобулинов) проникать через плаценту от матери к плоду, обеспечивая пассивный иммунитет новорожденного к некоторым инфекционным заболеваниям, например, к кори. В крови плода и новорожденного содержатся только материнские IgG. Они исчезают в течении 9 месяцев после рождения когда начинается синтез собственных IgG Иммуноглобулины М – пентамеры, 5-10% от общего количества Ig.Называют макроглобулинами из-за высокой (около 900 кДа) молекулярной массы; IgM - наиболее древний класс антител. Обеспечивают первичный иммунный ответ. Синтезируется плазматическими клетками, мало проникают в ткани. IgM эффективно связываются с комплементом, вызывают агглютинацию бактерий, нейтрализацию вирусов. Играют важную роль в активации фагоцитоза и элиминации возбудителя из кровеносного русла. IgM вырабатываются уже у плода. Повышенное содержание IgM в пуповинной крови - диагностический критерий внутриутробной инфекции плода. Иммуноглобулины IgA - моно и димеры, 10-15 % от общего количества Ig. Секреторные IgA -80% находится на поверхности слизистых оболочек, в молоке, молозиве, слюне, в слезном, бронхиальном и желудочно-кишечном секрете, желчи, моче. В основном в виде димеров: 2 мономерные единицы нековалентно связанны секреторным компонентом (полипептид - продуцируется эпителиальными клетками слизистых оболочек и секреторных желез облегчает транспорт IgA через эпителий и защищает молекулы IgA от расщепления пищеварительными ферментами). Сывороточные IgA -20% - в основном в виде мономеров. Обеспечивают местный иммунитет, защиту дыхательных, мочеполовых путей и желудочно-кишечного тракта от инфекций. IgA обладают антиадсорбционным действием: препятствуют прикреплению бактерий, микроорганизмов и вирусов к поверхности эпителиальных клеток, защищая их от повреждения. IgA не проходят через плацентарный барьер: у новорожденных около 1% от уровня взрослых, к концу 1 года около 20 % от уровня взрослых. К 5 годам до 100% от уровня взрослых. Иммуноглобулины Е мономеры, в крови < 0,001% от общего количества Ig. Ввырабатываются в подслизистом слое тканей, контактирующих с внешней средой (кожа, дыхательные пути, желудочно-кишечный тракт, миндалины, аденоиды). IgE фиксируются на поверхности тучных клеток, базофилов и эозинофилов. Аллерген попавший в организм взаимодействует с IgE. Комплексы "IgE - антиген", открывают каналы кальция, который попав в клетки, вызывает выброс гистамина и других биологически активных веществ в межклеточное пространство. Это приводит к развитию местной воспалительной реакции, проявляющейся в виде ринита, бронхита, астмы, сыпи или формирует системную реакцию в виде анафилактического шока. Повышенные уровни общего IgE связаны с гиперчувствительностью немедленного типа. У лиц, страдающих аллергией, IgE повышен, как во время атопических приступов, так и между ними. Синтез IgE начинается уже у плода на 11 неделе, через плаценту он не проникает. Высокий уровень IgE в пуповинной крови является индикатором высокого риска атопических заболеваний. Ферменты плазмы крови1. Секреторные – синтезируются в печени, эндотелии кишечника. Поступают в кровь. Где выполняют свои функции (ферменты свертывающей и противосвертывающей системы крови тромбин, плазмин, ферменты обмена липопротеинов ЛХАТ, ЛПЛ). 2. Тканевые – ферменты клеток органов и тканей. Некоторые имеют диагностическое значение – индикаторные. (ЛДГ с 5 изоформами, креатинкиназа с 3 изоформами, АСТ, АЛТ, кислая и щелочная фосфатаза и т.д.) 3. Экскреторные – синтезируются железами ЖКТ и участвуют в пищеварении. (при панкреатите в крови обнаруживают липазу, амилазу, трипсин, при воспалении слюнных желез – амилазу, при холестазе – щелочную фосфатазу (из печени)) |