лекции частная микробиология. Лекция Возбудители стафилококкозов и стрпетококкозов
 Скачать 211.88 Kb.
|
Биопроба.Фильтрат материала от больных свиней вводят кроликам внутрибрюшинно в дозе 5-7 мл. Через 7-10 дней берут пунктат и микроскопируют. При обнаружении трепонем кроликов убивают и подвергают исследованию (микроскопия, выделение культур). Устойчивость.При температуре 18 oС возбудитель сохраняется несколько недель, в замороженном материале не теряет активности более 60 дней.Для дезинфекции применяют 4 %-ный (70oС) раствор гидроокиси натрия и 2 %-ный раствор формальдегида. Иммунитет.Непродолжительный, слабой напряженности Серологическая диагностика: не применяется. Аллергическая диагностика: не применяется. Биопрепараты для специфической профилактики: не разработаны. Биопрепараты для специфической терапии: не разработаны Лечение: при дизентерии свиней - осарсол и антибиотики Профилактика:Свиноводческие хозяйства объявляют неблагополучным по дизентерии, проводят изоляцию и убой тяжелобольных свиней, заболевших поросят вместе со свиноматками, комплекс лечебно-профилактических обработок. У человека инфузорная дизентерия, возникает в результате проникновения в стенку толстого кишечника балантидиев, которыми человек заражается главным образом от свиньи; однако и человек, выделяющий инфузории, может заражать окружающих. Лептоспироз – инфекционная природно-очаговая болезнь животных и человека, характеризующаяся кратковременной лихорадкой, анемией, желтухой, гемоглобинурией, геморрагическим диатезом, некрозом слизистых оболочек и кожи, атонией органов пищеварения, абортами. Болезнь может протекать бессимптомно. Возбудителя открыли Инад и Идо в 1914-1915 гг. Лептоспиры относят к семейству Leptospiraceae (leptos – тонкий, speira – виток, спираль) и роду Leptospira,который включает два вида: патогенный – L. interrogans и сапрофитный – L. biflexa. Патогенный вид представлен 183 сероварами, которые по составу антигенов объединены в 25 серологических групп. В инфекционной патологии животных наибольшее значение имеют серогруппы Pomona, Tarassovi, Hebdomadis,Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae, Canicola. Морфология. Лептоспиры – спиралевидные бактерии диаметром 0,1-0,25 мкм и длиной от 6-15 до 30 мкм, образующие около 20 мелких, тесно расположенных первичных завитков и 1-2 вторичных, придающих клетке форму букв Г, S, С. Осевая нить состоит из двух фибрилл. В темном поле они имеют вид тонких серебристых нитей с утолщенными и загнутыми в виде крючков концами. У клеток некоторых штаммов концы прямые (бескрючковые лептоспиры). Для лептоспир характерна активная подвижность, наиболее частый тип движения – вращательно-поступательный. Спор не образуют. Грамотрицательные, плохо окрашиваются анилиновыми красителями, по Романовскому-Гимзе – в красный цвет, фиксация мазка существенно изменяет их морфологию; используют также метод импрегнации серебром по Левадити. Культивирование. Лептоспиры – хемоорганотрофные факультативно- анаэробные бактерии. Культивируют их в аэробных условиях при 28-30 0С на специальных средах, содержащих 5-10 % сыворотки крови кролика или овцы, дистиллированную, водопроводную, колодезную воду или фосфатный буфер (рН 7,2-7,6): среды Уленгута, Терских, Ферворта-Вольфа, Любашенко и др. Рост лептоспир обычно проявляется через 7-20 суток, иногда 1-2 месяцев. Среда при этом не изменяется. На плотных средах (Кокса, ВГНКИ) образуют колонии S-, О- и R-форм. S-форма – типичная для патогенных штаммов, ее колонии прозрачные, в виде диска с ровным краем. Биохимические свойства. Изучены недостаточно. Способность ферментировать углеводы отсутствует; образуют каталазу, оксидазу, липазу и другие ферменты. Токсинообразование. Истинный экзотоксин лептоспиры не синтезируют. Они образуют эндотоксин и патогенные ферменты: гемолизин, фибринолизин, плазмокоагулазы, гиалуронидазы, липазы, лецитиназу, которые выделяются в результате лизиса лептоспир. Патогенностью обладают свежевыделенные штаммы лептоспир; при культивировании на питательных средах это свойство относительно быстро теряется. Антигенная структура. Лептоспиры обладают белковым соматическим антигеном, определяющим их видовую специфичность. Поверхностные полисахаридные антигены служат критериями групповой и серовариантной дифференциации. Антигенные свойства лептоспир изучают в реакции микроагглютинации и методом иммуноадсорбционного анализа. Устойчивость. В воде открытых водоемов патогенные лептоспиры сохраняются более 7-30 суток; будучи типичными гидрофилами, в почве, перенасыщенной водой, выживают до 280 суток; в свежем молоке – 8-24 ч; в почках убойных животных при 0-4 0С – до 28 суток; в замороженном мясе погибают через 10 суток. Чувствительны к действию поваренной соли: в засоленном (4,8 % NaCl) мясе крупного рогатого скота погибают через 10 суток; в гипертоническом растворе поваренной соли (2,8 %) – через 15 минут. При кипячении погибают моментально, при 56-58 0С – в течение 25-30 минут. Быстро гибнут при высушивании и под воздействием прямого солнечного света. Растворы (0,1 % соляной кислоты, 0,5 % фенола) инактивируют лептоспиры за 20 минут. Патогенность. К лептоспирозу наиболее восприимчивы крупный рогатый скот (серогруппы L. Pomona и L. Hebdomadis),свиньи (серогруппы L. Pomona и L. Tarassovi), овцы, лисицы, песцы, менее – лошади, козы, буйволы, верблюды, олени, ослы, собаки, кошки, куры. Болеет и человек. Основные носители лептоспир в природных очагах: серые и водяные полевки, ондатры, серые крысы, домовые мыши, землеройки. К экспериментальному заражению наиболее чувствительны золотистые хомяки, крольчата-сосуны и молодые морские свинки. Патогенез. Входными воротами возбудителя являются поврежденные кожа и слизистые оболочки. Патогенные лептоспиры благодаря активной подвижности преодолевают защитные барьеры организма и быстро проникают в кровь. Через 12 ч после заражения их обнаруживают в печени. Затем наступает генерализация инфекции (бактеремия), размножение и накопление лептоспир в печени, почках, надпочечниках, селезенке, легких, появляется лихорадка. К этому времени образуются антитела. Они инактивируют лептоспиры, и происходит их элиминация из крови и паренхиматозных органов. В почечных же клубочках и канальцах лептоспиры недоступны воздействию антител, где они активно размножаются и выделяются с мочой. Лизис лептоспир сопровождается накоплением токсических веществ, под действием которых повышается проницаемость сосудов, лизируются эритроциты, происходят кровоизлияния, развиваются гематурия и желтуха, поражается нервная система. Токсикоз может привести к гибели животного. Эпизоотологические данные. К лептоспирозу восприимчивы все сельскохозяйственные, домашние и многие виды диких животных, особенно в молодом возрасте, а также птица. Различают природные и антропоургические очаги (связанные с деятельностью человека) лептоспироза. Источником инфекции в природных очагах являются грызуны, насекомоядные, парнокопытные, хищные млекопитающие многих видов, реже птицы, выделяющие патогенных лептоспир в окружающую среду с мочой. В антропоургических очагах источником возбудителя являются больные и переболевшие животные-лептоспироносители (свиньи, крупный и мелкий рогатый скот, лошади, собаки, домовые мыши и крысы), а также больные люди, выделяющие возбудитель преимущественно с мочой и инфицирующие внешнюю среду, в том числе водоемы. У животных лептоспироз может протекать бессимптомно, а лептоспиры могут выделяться с мочой в течение многих месяцев. Основные пути заражения – контактный и алиментарный. Лептоспироносителями являются мышевидные грызуны. Крысы и прочие грызуны являются основным резервуаром и источником распространения заболевания. Лептоспироз – природноочаговая болезнь, ему свойственна энзоотичность; возникает в любое время года среди жвачных, в основном в пастбищный сезон. Предубойная диагностика. У крупного рогатого скота появляется угнетенное состояние, связанность в движениях, отказ от корма, атония преджелудков, гемоглобинурия, желтушность слизистых оболочек, повышение температуры тела до 41,5 0С, у некоторых животных отмечались некрозы кожи сосков вымени и стельные коровы абортируют. У свиней заболевание чаще протекает бессимптомно или с проявлениями кратковременной лихорадки, абортов, рождением мертвых или нежизнеспособных поросят, некротическими поражениями на различных участках кожного покрова. При скрытой или атипичной форме болезни применяют бактериоскопию мазков-опечатков, серологические исследования (РНГА), разработанные Б.К. Ильясовым, Т.И. Тугамбаевым. В целях своевременного выявления лептоспироза проводят исследование сыворотки крови животных в реакции микроагглютинации (РМА). Послеубойная диагностика. Видимые слизистые оболочки желтушны, изредка кожа и подкожная клетчатка, сухожилия, фацсии – молочно-желтого цвета. Серозные оболочки также желтушны с точечными и полосчатыми кровоизлияниями. В грудной полости красновато-желтоватая жидкость. Легкие иногда отечны с точечными кровоизлияниями под плеврой. Мышца сердца дряблая. Печень обычно дряблая, кровонаполненная, глинисто- желтая, неравномерно окрашена и на поверхности ее глинисто-желтые пятна различной величины. В корковом слое почек, эпикарде во многих случаях множественные точечные кровоизлияния, граница между корковым и мозговым слоями почек сглажена. У переболевших животных находят интерстициальный нефрит. Моча в мочевом пузыре красного цвета. Устанавливая дифференциальный диагноз, следует исключить пироплазмоз и острый некробактериоз печени. Эти болезни не сопровождаются некрозом кожи и слизистых оболочек. При пироплазмозе, кроме того, селезенка бывает увеличенной, полнокровной, а при гнойном гепатите в печени множественные гнойные очаги. Лабораторная диагностика. Материалом для исследования служат: кровь (лучше брать на 3-5 сутки болезни при повышенной температуре тела), моча, кусочки паренхиматозных органов, почка, транссудат из грудной и брюшной полостей, мочевой пузырь с содержимым, абортированный плод. Патологический материал отбирают не позже 2 ч после гибели животного. Мочу собирают при естественном мочеиспускании; в летнее время исследуется не позднее 3 ч после взятия. Микроскопия. Исследуют мочу, цитратную кровь, тканевую суспензию из коркового слоя почки, печени, у плода – из всех органов. Микроскопию проводят в раздавленной капле с конденсором «темного поля». Типичные лептоспиры активно подвижны и имеют форму прямой или S-образной с загнутыми в виде крючков концами серебристо-белой нити. Лептоспир также можно обнаружить в срезах из органов после импрегнации серебром по методу Левадити. Выделение культур. Материал засевают по 1-3 капли в 3-5 пробирок со специальной питательной средой и инкубируют при 28-30 0С в течение 3 месяцев. Лептоспиры начинают размножаться через 7-20 суток, иногда через 1- 2 и очень редко – 3 месяца. Наличие роста определяют темнопольной микроскопией раздавленных капель на 3, 5, 7, 10 сутки и далее через каждые 5 суток. При обнаружении размножения лептоспир делают пересев в 3-5 пробирок со свежей средой. Выделить культуры лептоспир удается не всегда. Биологическая проба. Метод более чувствительный, чем культуральный; проводится с целью выделения и очистки культур лептоспир, определения их вирулентности и дифференциации от сапрофитов. Заражают 20-30 суточных золотистых хомяков и крольчат-сосунов в возрасте 10-20 суток. Каждую пробу испытывают на двух животных; на 4-5 сутки убивают первого, на 14-16 сутки – второго, если оно не погибло раньше. Из сердца, печени и почек убитых или павших животных проводят посевы. Сыворотку крови убитого через 14-16 суток животного исследуют в реакции микроагглютинации (РМА) с лептоспирами 13 серогрупп. Положительная РМА в разведении 1:10 и выше указывает на наличие лептоспир в исследуемом материале. Серологическое исследование. Для серологической диагностики лептоспироза используют РМА и реакцию агглютинации (РА). Пробы крови берут на 5-7 сутки болезни и при необходимости повторно через 7-10 суток. Следует учитывать, что антитела в крови у выздоровевших животных могут сохраняться до двух лет и более. РМА ставят в лунках полистироловых пластин. В качестве антигенов используют живые 5-15 суточные культуры лептоспир 13-16 серогрупп. Сыворотку исследуют с антигенами каждой серогруппы в разведениях 1:5, 1:10 и т.д. до титра. В лунки вносят по 0,1 мл разведенной сыворотки и 0,1 мл антигена. Контролем служит антиген с физиологическим раствором (по 0,1 мл). Пластины выдерживают при 30 0С в течение 1 ч; результаты учитывают в препаратах раздавленной капли в микроскопе с конденсором темного поля. Агглютинация проявляется в склеивании лептоспир и образовании «паучков», состоящих из нескольких десятков или сотен бактерий. Свободные концы лептоспир сохраняют подвижность. Оценивают реакции в крестах по 4- балльной системе: положительная – не менее чем два креста в разведении сыворотки 1: 50 и выше, при отсутствии агглютинации в контроле. РА ставят на стеклянной пластинке, на которую наносят каплю разведенной 1:100 исследуемой сыворотки и добавляют равное количество антигена. Лептоспирозные антигены для РА выпускают шести серогрупп (для каждой отдельно), представляющие собой концентрированную взвесь лептоспир в альбуминовой питательной среде. При наличии в сыворотке специфических антител наступает агглютинация. Оценка результатов производится в крестах по 4 балльной системе. Положительной считают реакцию два креста и выше, сомнительной – один крест. Для выявления лептоспир в крови, моче, паренхиматозных органах, в тканях абортированного плода, в воде и почве предложен иммунофлюоресцентный метод. Специфическая профилактика. После переболевания у животных формируется длительный и напряженный иммунитет. Он характеризуется серовариантной специфичностью, поэтому возможны реинфекции. Ведущее значение в невосприимчивости к лептоспирозу принадлежит антителам, и особенно IgG. Сыворотки иммунных животных обладают превентивными свойствами. Отмечается также длительное лептоспироносительство и вследствие этого инфекционный иммунитет. Вакцинацию коров проводят за 1,5-4 месяцев, овец и свиноматок – за 1,5- 2 месяцев до родов, колостральный иммунитет продолжается у телят до 2,5 месяцев, у ягнят и поросят до 3 недель. Для активной иммунизации применяют депонированную поливалентную вакцину ВГНКИ против лептоспироза животных. Вакцину выпускают в двух вариантах: первый – из штаммов лептоспир серогрупп помона, тарассови, и ктерогеморрагия и каникола, второй – из серогрупп помона, тарассови, гриппотифоза и четырех сероваров группы гебдомадис. Иммунитет после вакцинации наступает через 14-20 суток и длится у молодняка до 6 месяцев, у взрослых животных – до одного года. Для пассивной иммунизации и лечения больных животных используют гипериммунную сыворотку против лептоспироза сельскохозяйственных и промысловых животных, которую получают из крови волов-продуцентов, иммунизированных культурами лептоспир. Иммунитет у животных, привитых сывороткой, сохраняется 10-14 суток. Кампилобактериоз - острая инфекционная болезнь зоонозной природы, вызываемая патогенными микроорганизмами рода Саmpylobacteг, характеризующаяся различной степенью тяжести и полиморфностью проявлений. Информация о кампилобактериозе начинается сообщением английских микробиологов Мак-Фадиана и Штокмана, обнаруживших в 1913 г. вибрион в плодах, в матке овец. В последующем возбудитель от овец был изолирован в США (1924). Германии (1927), Испании (1956) и в других странах. Возбудитель кампилобактериоза крупного рогатого скота открыт в 1918 г. Смитом. Первые сведения о возбудителе кампилобактериоза у коров в стране принадлежат В.А.Якимову (1926), позже - Е.В. Козловскому (1958). Большой вклад в изучение данной проблемы внесли П.А.Трилевко, П.А. Волосков, Н.Н.Михайлов, М.А. Лучко, А.В.Голиков и др. Микроорганизмы относятся к семейству Спирилл, роду Кампилобактер. В настоящее время род Campylobacter насчитывает более 14 видов и подвидов (табл. 1), выделенных от животных и человека, и это число постоянно растет, уточняются потенциальные возможности этих микроорганизмов в этиологии и патогенезе заболевания у человека. Наибольшее значение на сегодня имеют C.jejuni, C.coli, C.laridis, C.fetus. Последний, однако, чаще поражает ослабленных интеркуррентными заболеваниями людей с развитием гематогенно-диссеминированных форм заболевания. Большинство случаев кампилобактериоза, протекающих как диарейное заболевание, вызывается C.jejuny и C.coli. Носителями кампилобактеров являются различные виды домашних и диких животных, а также птица. Из организма млекопитающих выделение вибрионов в окружающую среду происходит с молоком, истечениями из половых органов, спермой, абортированным плодом, плацентой, фекалиями. Распространение возбудителя осуществляется через корм, подстилку, волу, продукцию животноводства. Отмечено, что обильная контаминация мясных туш наблюдается в случае надреза кишечника, когда содержимое попадает на органы и ткани убитого животного. Табл. 1. Виды кампилобактеров, выделенных от людей и животных.
Наибольшую эпидемическую опасность представляют птицы (ку- ры), домашние и сельскохозяйственные животные, контакт с которыми у человека наиболее велик, причем в наивысшей степени опасны особи, у которых инфекция протекает в форме бактерионосительства без ви- димых клинических проявлений. Активное носительство кампилобактера отмечено у чаек (20-70%), ворон (90%), голубей (20-40%), гусей (10-6О%), грачей (45-83%). Человек при определенных условиях (больной или бактерионоситель) может явиться источником возбудите- лей инфекции. Кампилобактеры - это грамотрицательные микроорганизмы, спор не образуют, полярно снабжены одним или двумя жгутиками, обладают энергичным винтообразным движением. Форма их спиралевидная, изогнутая. При соединении двух клеток образование напоминает - образную форму или вид летящей чайки. Длина клеток - 0,5-8 мкм, ширина - 0,2-0,5 мкм. В старых культурах возможно появление кокковидных клеток микроба. Кампилобактеры относятся к микроаэрофилам. Для их инкубирования необходимо присутствие СО2, температура 37,5°С. С целью получения культур возбудителя используют полужидкие и твердые питательные среды. Термофильные кампилобактеры растут при температуре 37-43°С. Оптимальная температура 42-43°С. Желаемую репродукцию этих микробов получают в газовой смеси, состоящей из 5% кислорода, 10% СО2 и 85%азота. Микроорганизмы, вызывающие кампилобактериоз, биохимически мало активны: выделяют каталазу, редуцируют нитраты, слабо образуют сероводород, не растут в МПБ с содержанием 3,5%.Для получения культуры возбудителя фетус венералис или фетус интестиналис используют полужидкий 0,15-0,2%-ный мясо-печеночный пептонный агар (ПЖА), сафранино-железо-новобиоциновую среду (СЖН), 2- 3%-ный мясо-печеночный пептонный агар (ЖПА), среду Китта-Тароцци, агар Мартена и др. При этом в питательные среды добавляют 5-10% дифибринированной крови крупного рогатого скота, овец, кроликов или сыворотку крови лошади, аминопептид-2 (5-10%), экстракт сухих дрожжей (5 г на 1 л среды), тиогликолят натрия (0,5 на 1 л среды). Рост культуры на ПЖА отмечается над поверхностью среды в виде серовато-голубоватого диска толщиной 1-4 мм. На плотной среде появляются мелкоросинчатые колонии, видимые через лупу. На СЕН рост кампилобактеров не сопровождается изменением цвета среды (розовый). В присутствии развития посторонней микрофлоры среда приобретает ярко-желтую окраску. В этих случаях проводят очистку культуры от посторонней микрофлоры. Процедуру выполняют различными методами: а) заражают беременных свинок, которые абортируют. Из абортированных плодов делают посевы. Если аборт не наступает, то их через 10-12 дн. убивают, из эмбрионов и полости матки делают посевы; б) производят рассев загрязненной культуры в чашки Петри с последующим отсевом характерных колоний в пробирки на ПЖА; в) культуры вносят в пастеровские пипетки под слой ПЖА; г) смешанные культуры пропускают через мембранные фильтры. Более сложным делом является изоляция термофильных кампилобактеров: C.jejuni, C.coli, C.laridis. Для их выделения пригоден ПЖА с добавлением 7% аминопептида-2 и 0,05% тиогликолата натрия. Пробирки, чашки Петри помешают в эксикатор или в микроанаэростат, воздушный микробассейн которых наполняется газовой смесью, состоящей из 5% кислорода, 10% углекислого газа и 85% азота. Культивирование ведется в термостате при температуре 43°С. Кампилобактеры этих видов, в отличие от микробов группы фетус, имеют длину от I до 3 мкм, толщину - 0,5-1 мкм. Микробные клетки имеют вид точильного камня - они более широкие в средине и сужены в концах. На твердых питательных средах патоген образует более мелкие колонии (0,1-0,3 мл), блестящие, без - форм. Отличительной особенностью этих кампилобактеров является и то, что они не растут при температуре 25°С, гидролизуют натриевую соль гипуровой кис лоты. Биохимическая активность различных видов кампилобактеров слабо выражена. Вместе с тем, некоторые показатели этой активности используют для дифференциации возбудителей рода Кампилобактер (табл. 3). Возбудители кампилобактериозов малоустойчивы во внешней среде и в пищевых продуктах. Все используемые в пищевой промышленности и животноводстве дезинфектанты обеспечивают гибель возбудителей кампилобактериоза в течение 5 минут. Патогенность различных видов вибрионов различна. Кампилобактеры, вызывающие патологию у крупного рогатого скота и овец, обладают антигенными особенностями и вирулентностью. В патогенном отношении представляют интерес Термофильные вибрионы группы Jejuni:C.jejuni, C.coli, C.laridis , которые вызывают кишечную патологию. Названные микроорганизмы способны к инвазивности, продуцируют цитолитические токсины. Антигенная структура кампилобактеров изучена недостаточно. Однако результаты исследований многих авторов свидетельствуют о наличии серовариантов микроба в пределах вида. К настоящему времени идентифицировано 34 серотипа термофильных вибрионов. В целях диагностики кампилобактериоза животных применяют клинико- эпизоотологический, серологический и бактериологический методы. Серологический метод диагностики на кампилобактериоз включает в себя реакцию агглютинации с влагалищной слизью (РАВС) и люминесцентную микроскопию мазков. РАВС применяют только при диагностике кампилобактериоза крупного рогатого скота, а люминесцентную микроскопию мазков у крупного рогатого скота и овец. Данный метод является ориентировочным. Готовят мазки, которые после фиксации, окрашивают по Граму или фуксином Циля в течение 1-2 мин. Раствор фуксина предварительно 1:5 разбавляют дистиллированной водой. В окрашенных препаратах в положительных случаях обнаруживают грамотрицательные микробные клетки, имеющие форму удлиненных спирилл, мелких кокков, летящих чаек, запятой. При окраске по методу Романовского-Гамзы в терминальных участках микробной клетки выявляется зернистость. Мазки можно исследовать с помощью метода иммунофлуоресценции (РИФ). Культуры возбудителя, кроме этого, исследуют в висячей или раздавленной капле на подвижность. |