Методы бактериоскопический

• Название: Методы бактериоскопический
• Дата: 09.02.2022
• Размер: 455.9 Kb.
• Имя файла: chastnaya_mikra_1.docx
• Тип: Документы; #356096
• страница: 7 из 7

Схема цикла полимеразной цепной реакции:

— нативная двухцепочечная ДНК;

— денатурация ДНК при температуре 94 °С;

— гибридизация (присоединение праймеров при температуре 55⁰ С);

— синтез комплементарной цепи ДНК при температуре 72 ⁰С, образование двухцепочечной ДНК.

Визуализацию результатов ПЦР осуществляют электрофоретическим разделением продуктов реакции в агарозном геле или методом гибридизации ампликонов с комплементарным к определяемой последовательности олигонуклеотидным зондом, меченным флюоресцентной, ферментной или другой меткой. Принципиально новое направление развития регистрационных систем — использование оптических биосенсоров, позволяющих определять в ходе гибридизации в реальном режиме времени пикограммовые количества фрагментов нуклеиновых кислот, иммобилизованных на поверхности оптической кюветы.

Достоинства ПЦР:

• 
  высокая чувствительность метода, позволяющая определять 10-1000 клеток в пробе;
  
• 
  высокая специфичность — в исследуемом материале выявляют уникальный для данного возбудителя фрагмент ДНК;
  
• 
  универсальность процедуры выявления различных возбудителей, что даёт возможность диагностировать несколько возбудителей в одной биопробе;
  
• 
  высокая скорость анализа — унифицированная обработка биоматериала и детекция продуктов реакции, а также автоматизация процесса амплификации дают возможность провести полный анализ за 4-4,5 ч;
  
• 
  возможность проводить количественный анализ и определять число копий специфических последовательностей нуклеотидов в пробе, контролируя таким образом вирусемию или бактериемию (например, вирусную нагрузку при вирусных гепатитах или ВИЧ-инфекции);
  
• 
  возможность диагностики не только острых, но и латентных инфекций. ПЦР можно эффективно использовать для диагностики труднокультивируемых, некультивируемых и персистирующих форм микроорганизмов, её использование целесообразно для выявления возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов.
  

Метод ПЦР имеет свои ограничения, в частности, для диагностики инфекций, вызванных условно-патогенной микрофлорой. Высокая чувствительность ПЦР создаёт опасность получения ложноположительных результатов за счёт минимальных загрязнений ДНК окружающей среды лабораторий, регулярно выполняющих однотипные исследования. Это формирует строгие требования к режиму проведения анализа.