Методы бактериоскопический
 Скачать 455.9 Kb.
|
БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫБиологические методы направленына определение наличия токсинов возбудителя в исследуемом материале и на обнаружение возбудителя (особенно при незначительном исходном содержании в исследуемом образце или когда возбудитель не может быть обнаружен методом посева, - например, при вирусных и риккетсиозных заболедваниях). Сущность: Животных заражают для выделения чистой культуры возбудителя в тех случаях, когда нельзя получить ее другими способами (например, при загрязнении исследуемых объектов посторонней микрофлорой, подавляющей рост возбудителя; при незначительном содержании микроорганизмов или переходе их в фильтрующиеся формы). Методывключают заражение чувствительных лабораторных животных (чувствительных к предполагаемому возбудителю) исследуемым материалом с последующим выделением чистой культуры патогена либо установлением факта присутствия микробного токсина и его природы, либо воспроизводят характерную клиническую картину. Моделирование экспериментальных инфекций у чувствительных животных — важный инструмент изучения патогенеза заболевания и характера взаимодействий внутри системы микроорганизм—макроорганизм. Для проведения биологических проб используют только здоровых животных определённых массы тела и возраста. Инфекционный материал вводят внутрь, в дыхательные пути, внутрибрюшинно, внутривенно, внутримышечно, внутрикожно и подкожно, в переднюю камеру глаза, через трепанационное отверстие черепа, субокципитально (в большую цистерну головного мозга). У животных прижизненно забирают кровь, экссудат из брюшины, после гибели — кровь, кусочки различных органов, СМЖ, экссудат из различных полостей. Недостатки: а) необходимость содержания вивария; б) длительность проведения исследования. Кроме того, даже при лабораторном заражении далеко не всегда удается выделить возбудителя, что особенно характерно для вирусных инфекций. Недостатки биологических методов: ◦ Трудоемкие и сложные в исполнении; ◦ Требуют значительно больше времени до получения конечного результата, а также особых стерильных условий и оборудования для постановки; ◦ Менее специфичные, чем иммунохимические методы. Преимущества: ◦ Отличаются достаточно высокой чувствительностью; ◦ С биологической точки зрения являются более правильными, поскольку измеряют только биологически активные формы цитокинов 4. Иммунологический метод диагностики, его виды. Основу иммунологического/серологического исследования составляет иммунологическая реакция – специфическое взаимодействие антитела (АТ) с антигеном (АГ). Эту реакцию называют серологической (иммунологической). Серологические (иммунологические) реакции применяются в двух направлениях: иммуноиндикации (собственно иммунный метод) - для идентификации неизвестной антигенной структуры, т.е. для определения неизвестных АГ бактерий, вирусов, токсинов и т.п. с помощью известных АТ, содержащихся в иммунных диагностических сыворотках; для серологической диагностики (серологический метод – от лат. – serum - сыворотка), т.е. для определения неизвестных АТ (в исследуемой сыворотке крови) с помощью известного АГ (диагностикума, приготовленного, как правило, из эталонных штаммов микробов). Таким образом, в серологических реакциях один из двух основных компонентов (АГ или АТ) всегда должен быть известным. Принципы использования системы АГ—AT в диагностике инфекционных заболеваний  Виды: 1.Реакции, основанные на феномене агглютинации. 2.Реакции, основанные на феномене преципитации. 3.Реакции с участием комплемента. (Реакция связывания комплемента (РСК)) 4.Реакция нейтрализации. Основана на способности антител нейтрализовать некоторые специфические функции макромолекулярных или растворимых антигенов, например активность ферментов, токсины бактерий, болезнетворность вирусов. В бактериологии эту реакцию используют для обнаружения антистрептолизинов, антистрептокиназы и антистафилолизинов. Реакцию нейтрализации токсинов можно оценивать по биологическому эффекту, так, например, титруют антистолбнячные и антиботулинические сыворотки. Смесь токсина с антисывороткой, введенная животным, не вызывает их гибели. Различные варианты реакции нейтрализации применяют в вирусологии. При смешивании вирусов с соответствующей антисывороткой и введении этой смеси животным или в клеточные культуры, патогенность вирусов нейтрализуется и при этом животные не заболевают, а клетки культур не подвергаются деструкции. 5.Реакции с использованием химических и физических меток (ИФА) Иммунофлюоресценция заключается в использовании меченых флюорохромом антител, точнее, иммуноглобулиновой фракции антител lgG. Меченое флюорохромом антитело образует с антигеном комплекс антиген-антитело, который становится доступным наблюдению под микроскопом в УФ-лучах, возбуждающих свечение флюорохрома Иммунологические методы - методы поиска антигенов возбудителей инфекционных заболеваний с помощью имеющихся антител (серотипирование, определение серовара, серогруппы, выявление специфических антигенов возбудителя для идентификации возбудителя и оценки его вирулентности. Методы поиска антител – методы выявления активного иммунного ответа – по нарастанию титра АТ и сравнению с диагностическими титрами (используют диагнсстикумы, диагностические антигены. Это методы серодиагностики и аллергодиагностики+ выявлние специфических антител в различных биологических жидкостях и в слизи (отделяемом с поверхности слизистой). Цель метода – индикация и идентификация антигенов возбудителя в исследуемом материале. Используются РП, РИФ, ИФА, РСК. Собственно иммунный метод – это экспресс-диагностика, результат исследования получается в течение нескольких часов или одних суток. Для серодиагностики применяют различные иммунологические реакции: • РА- реакция агглютинации • РН – реакция нейтрализации • РП - реакция преципитаци • РСК – реакция связывания комплемента • ИФА – иммуноферментный анализ • РИФ – реакция иммунофлюоресценции • РНГА – реакция непрямой гемагглютинации • ИЭМ – иммунологическая электронная микроскопия. 5 Суть серологического метода диагностики (определение наличия антител, титров антител и исследование парных сывороток).
Классическая серодиагностика основана на: Определении антител к возбудителю в диагностическом титре; Обнаружение в исследуемой сыворотке крови антител к возбудителю ряда инфекционных болезней недостаточно для постановки диагноза, поскольку оно может отражать наличие постинфекционного или поствакцинального иммунитета. Именно поэтому исследуют парные сыворотки больного, взятые в первые дни болезни и через 7- 10 дней (иногда этот интервал может быть более длительным). В этом случае оценивают нарастание титра антител. Нарастание титра антител в 4 раза и более свидетельствует об инфекционной природе антител. При экзотических инфекционных болезнях, а также при гепатитах, ВИЧ- инфекции и при некоторых других заболеваниях сам фактопределенияантител свидетельствуетобинфицированностипациентаиимеетдиагностическоезначение. Серологический метод диагностики применяют с конца первой-начала второй недели заболевания. Для обнаружения антитела к исследуемой сыворотке прибавляют известный антиген. Эти препараты, называемые диагностикумами, представлят собой взвесь убитых микроорганизмов (их отдельных антигенов) или эритроцитов (частиц латекса), на которых адсорбированы микроорганизмы или их антигены. |