ГЛАВА-1. Методы фармакогностического анализа. Основные понятия, термины и определения
 Скачать 1.03 Mb.
|
|
Фармакопейный стандартный образец (ФСО) – стандартный образец, произведенный в соответствии с фармакопейной статьей (ФС). Фармацевтическая субстанция − лекарственное средство в виде одного или нескольких обладающих фармакологической активностью действующих веществ вне зависимости от природы происхождения, которое предназначено для производства, изготовления лекарственных препаратов и определяет их эффективность. Стандартный материал – материал или вещество, обладающий однородностью по одному или несколькими свойствам, которые аттестованы для определения количественных показателей качества материала, при оценке методики измерения или калибровке прибора. Стандартный материал – материал или вещество, обладающий однородностью по одному или несколькими свойствам, которые аттестованы для определения количественных показателей качества материала, при оценке методики измерения или калибровке прибора. Аттестация стандартных образцов – исследование, направленное на установление значений аттестованных характеристик в соответствии с программой и/или методикой испытаний, с последующим оформлением надлежащих документов (паспорт, инструкция по применению СО, макетов этикетки первичной и вторичной упаковки). Аттестация СО предполагает проведение испытаний по исследованию однородности, стабильности, определению аттестованного значения и границ его погрешности или неопределенности, определению оптимальных условий хранения и транспортировки. Аттестуемая характеристика стандартных образцов – величина или зависимость двух величин, характеризующая состав или свойства действующего вещества, примесей, вспомогательных веществ, аттестованное значение которых с указанием неопределенности устанавливают при аттестации СО, и приводят в паспорте на СО. Большинство СО имеют несколько аттестуемых характеристик. Аттестованное значение стандартных образцов – значение аттестуемой характеристики СО, установленное при его аттестации и приводимое в паспорте и других документах на СО с указанием его погрешности или неопределенности. Аттестованное значение представляют числом, выражающим значение воспроизводимой СО величины в установленных единицах. Однородность стандартных образцов – свойство СО, выражающееся в постоянстве значения аттестуемой характеристики СО, присущего любой части СО, используемой при его применении согласно назначению (т.е. идентичность содержимого каждой упаковки данной серии СО по составу, количеству, активности и стабильности содержимому всех остальных упаковок данной серии СО). Неопределенность аттестованного значения – как правило, оценивают по стандартному отклонению аттестованного значения с определенным коэффициентом охвата или границы интервала аттестованного значения при определенном коэффициенте охвата. Так как оценка систематической ошибки биологических методов затруднена, вследствие невозможности установления истинного значения измеряемой величины, неопределенность методики может быть оценена по результатам межлабораторного эксперимента в рамках ее валидации, проведенной в условиях воспроизводимости. Для международных СО аттестованное значение может быть приведено без указания неопределенности. Погрешность аттестованного значения стандартных образцов – отклонение аттестованного значения от истинного значения аттестуемой характеристики экземпляра СО (при его наличии), а также любой его части (доли, навески), используемой для измерений. Погрешность от неоднородности СО – погрешность аттестованного значения СО, обусловленная отклонением значений аттестуемой характеристики СО в любой наименьшей представительной пробе СО от его аттестованного значения. Дополнительные характеристики стандартных образцов – значения величин, характеризующих состав или свойства СО, приводимые без указания их погрешностей или неопределенности в паспорте и других документах на СО. Дополнительные характеристики СО используются при установлении ограничений по применению СО для конкретных целей. Стабильность стандартных образцов – свойство СО, выражающееся в неизменности значений аттестованной характеристики СО во времени при соблюдении условий хранения, транспортирования и применения. Срок годности стандартных образцов – интервал времени, исчисляемый с даты выпуска серии СО, в течение которого гарантируется соответствие аттестованных характеристик СО характеристикам, указанным в его паспорте. Программа аттестации стандартных образцов – раздел технической документации на СО, устанавливающий объем, виды и последовательность выполнения работ по аттестации СО, место и сроки их проведения, форму представления отчетных данных. Методика аттестации стандартных образцов – раздел технической документации на СО, устанавливающий перечень определяемых характеристик СО, методы, средства и алгоритмы измерений, способы обработки результатов измерений и форму их представления. Программу и методику аттестации СО допускается объединять в 1 документ. Признание (утверждение) стандартных образцов – решение уполномоченного органа о соответствии СО требованиям, распространяющегося на него нормативного документа и допуска его к применению в соответствии с назначением. Межлабораторная аттестация стандартных образцов – аттестация СО, основанная на использовании результатов измерений, выполненных независимо в нескольких лабораториях с применением одного или нескольких методов измерений. В зависимости от процедуры аттестации стандартные образцы могут быть первичными и вторичными. Кроме того, различают стандартные образцы следующих категорий: международные, межгосударственные (региональные), государственные, фармакопейные, отраслевые СО, а также СО предприятий. Первичный стандартный образец – стандартный образец, обладающий необходимыми свойствами для целенаправленного использования, аттестация которого осуществляется без сравнения с существующими стандартными образцами. Вторичный стандартный образец – стандартный образец, аттестованный в результате сравнения с первичным стандартным образцом. Международный стандартный образец – стандартный образец, активность которого выражена в международных единицах. Эквивалентность международных единиц (МЕ) международного стандартного образца утверждена Всемирной Организацией Здравоохранения (ВОЗ). Межгосударственный (региональный) стандартный образец – стандартный образец, признанный в рамках Европейского союза или Евроазиатского экономического союза в соответствии с установленными правилами и применяемый в государствах, присоединившихся к его признанию. Химический стандартный образец – вещество или смесь веществ, химического происхождения, которые предназначены для использования в соответствии с указаниями ФС или НД, а также отдельных общих фармакопейных статей (ОФС). Содержание субстанции в химическом СО выражается в процентах, за некоторым исключением (как правило, антибиотики), когда количественное содержание выражено в МЕ. В последнем случае СО являются вторичными, аттестованными по международным СО. Биологический стандартный образец (препарат) – вещество или смесь веществ биологической природы, которые предназначены для использования в соответствии с указаниями ФС или НД, а также отдельных ОФС. Биологические СО являются либо первичными СО, либо вторичными, аттестованными по Международным СО. Их активность, как правило, выражается в МЕ. Могут быть использованы также другие присвоенные значения, например, титр вирусов, или число бактерий. Растительный стандартный образец – вещество или смесь веществ растительного происхождения. Для лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов в качестве стандартных образцов могут быть использованы биологически активные вещества растений (вещества с известной фармакологической активностью), вещества-маркеры активные и/или неактивные (химические вещества, используемые для идентификации и/или количественного определения основных веществ), а также стандартизованное лекарственное растительное сырье или экстракты. Последние должны быть охарактеризованы с использованием стандартных образцов биологически активных веществ или веществ-маркеров. При оценке фармацевтической субстанции или лекарственного препарата различного происхождения на его соответствие требованиям ФС и/или НД используются как стандартные образцы веществ или препаратов, так и стандартные образцы возможных примесей. Для установления подлинности лекарственных средств наряду со СО могут быть использованы эталонные ИК-спектры, приведенные в Государственной фармакопее РФ. Валидация аналитической методики – это экспериментальное доказательство того, что методика пригодна для решения предполагаемых задач. Фармакопейная статья ОФС.1.1.0012.15 «Валидация аналитических методик» регламентирует характеристики аналитических методик, определяемые с целью их валидации, и соответствующие критерии пригодности валидируемых методик, предназначенных для контроля качества лекарственных средств: фармацевтических субстанций и лекарственных препаратов. Валидации подлежат методики количественного определения, в том числе методики определения примесей и методики определения предела содержания. Методики проверки подлинности подвергаются валидации при необходимости подтвердить их специфичность. При валидации проводится оценка аналитической методики по следующим характеристикам: – специфичности (specificity); – пределу обнаружения (detection limit); – пределу количественного определения (quantitation limit); – аналитической области (range); – линейности (linearity); – правильности (trueness); – прецизионности (precision); – устойчивости (robustness). Специфичность – это способность аналитической методики однозначно оценивать определяемое вещество в присутствии сопутствующих компонентов. Доказательство специфичности валидируемой методики обычно основывается на рассмотрении полученных с ее использованием данных анализа модельных смесей известного состава. Специфичность валидируемой методики может быть доказана также соответствующей статистической обработкой результатов анализов реальных объектов, выполненных с ее использованием и, параллельно, с использованием другой, заведомо специфичной, методики (методики, специфичность которой доказана). Предел обнаружения – это наименьшее количество (концентрация) определяемого вещества в образце, которое может быть обнаружено (или приближенно оценено) с использованием валидируемой методики. Предел обнаружения в случаях, указанных в таблице, обычно выражается как концентрация определяемого вещества (в % относительных или долях на миллион – ppm). Предел количественного определения – это наименьшее количество (концентрация) вещества в образце, которое может быть количественно оценено с использованием валидируемой методики с требуемой правильностью и внутрилабораторной (промежуточной) прецизионностью. Предел количественного определения является необходимой валидационной характеристикой методик, используемых для оценки малых количеств (концентраций) веществ в образце и, в частности, для оценки содержания примесей. Аналитическая область методики – это интервал между верхним и нижним значением аналитических характеристик определяемого компонента в объекте анализа (его количества, концентрации, активности и т. п.). В этом интервале результаты, получаемые с использованием валидируемой методики, должны иметь приемлемый уровень правильности и внутрилабораторной (промежуточной) прецизионности. К величине аналитической области методик предъявляются следующие требования: – методики количественного определения должны быть применимы в интервале от 80 до 120 % от номинального значения определяемой аналитической характеристики; – методики оценки однородности дозирования должны быть применимы в интервале от 70 до 130 % от номинальной дозы; – методики количественного определения, используемые при проведении теста «Растворение», обычно должны быть применимы в пределах от 50 до 120 % от ожидаемой концентрации действующего вещества в среде растворения; – методики испытаний на чистоту должны быть применимы в интервале от «Предела количественного определения» или «Предела обнаружения» до 120 % от допустимого содержания определяемой примеси. Аналитическая область методики может быть установлена по диапазону экспериментальных данных, удовлетворяющих линейной модели. Линейность методики – это наличие линейной зависимости аналитического сигнала от концентрации или количества определяемого вещества в анализируемой пробе в пределах аналитической области методики. При валидации методики ее линейность в аналитической области проверяют экспериментально измерением аналитических сигналов для не менее чем 5 проб с различными количествами или концентрациями определяемого вещества. Экспериментальные данные обрабатывают методом наименьших квадратов с использованием линейной модели: y = b · x + a, где х – количество или концентрация определяемого вещества; y – величина отклика; b – угловой коэффициент; a – свободный член (ОФС «Статистическая обработка результатов химического эксперимента»). Должны быть рассчитаны и представлены величины b, a и коэффициент корреляции r. В большинстве случаев используют линейные зависимости, отвечающие условию r ≥ 0,99, и только при анализе следовых количеств рассматривают линейные зависимости, для которых r ≥ 0,9. В отдельных случаях возможность линейной аппроксимации экспериментальных данных обеспечивается лишь после их математического преобразования (например, логарифмирования). Для некоторых методик анализа, в основу которых в принципе не может быть положена линейная зависимость между экспериментальными данными, определение концентрации или количества вещества проводят с использованием нелинейных калибровочных графиков. При этом график зависимости аналитического сигнала от количества или концентрации определяемого вещества может быть аппроксимирован подходящей нелинейной функцией с использованием метода наименьших квадратов, что выполнимо при наличии соответствующего валидированного программного обеспечения. Правильность методики характеризуется отклонением среднего результата определений, выполненных с ее использованием, от значения, принимаемого за истинное. Валидируемая методика признается правильной, если значения, принимаемые за истинные, лежат внутри доверительных интервалов соответствующих средних результатов анализов, полученных экспериментально по данной методике. Для оценки правильности методик количественного определения применимы следующие подходы: а) анализ с использованием валидируемой методики стандартных образцов или модельных смесей с известным содержанием (концентрацией) определяемого вещества; б) сравнение результатов, полученных с использованием валидируемой методики и образцовой методики, правильность которой ранее установлена; в) рассмотрение результатов изучения линейности валидируемой методики: если свободный член в уравнении линейности, приведенном выше, статистически достоверно не отличается от нуля, то использование такой методики дает результаты, свободные от систематической ошибки. Для подходов «а» и «б» возможно представление полученных данных в виде уравнения линейной зависимости (регрессии) между экспериментально найденными и истинными величинами. Для этого уравнения проверяются гипотезы о равенстве единице тангенса угла наклона b и о равенстве нулю свободного члена a. Как правило, если эти гипотезы признаются верными при степени надежности, равной 0,05, то использование валидируемой методики дает правильные, т.е. свободные от систематической ошибки, результаты. Прецизионность методики характеризуется рассеянием результатов, получаемых с ее использованием, относительно величины среднего результата. Мерой такого рассеяния является величина стандартного отклонения результата отдельного определения, полученная для выборки достаточно большого объема. Прецизионность оценивается для любой методики количественного определения по результатам не менее трех определений для каждого из трех уровней определяемых величин (нижнего, среднего и верхнего), лежащих в пределах аналитической области методики. Повторяемость также может оцениваться для любой методики количественного определения по результатам не менее шести определений для образцов с содержанием определяемого вещества, близким к номинальному. Во многих случаях оценка прецизионности может быть проведена по результатам обработки экспериментальных данных методом наименьших квадратов, как указано в ОФС «Статистическая обработка результатов химического эксперимента». Прецизионность должна исследоваться на однородных образцах и может оцениваться в трех вариантах: – повторяемость (сходимость); – внутрилабораторная (промежуточная) прецизионность; – межлабораторная прецизионность (воспроизводимость). Результаты оценки методики анализа по каждому из вариантов прецизионности обычно характеризуются соответствующим значением величины стандартного отклонения результата отдельного определения. Обычно при разработке оригинальной методики определяется повторяемость (сходимость) результатов, получаемых с ее использованием. При необходимости включения разработанной методики в нормативную документацию дополнительно определяется ее внутрилабораторная (промежуточная) прецизионность. Межлабораторная прецизионность (воспроизводимость) методики оценивается при предполагаемом ее включении в проект общей фармакопейной статьи, фармакопейной статьи или в нормативную документацию на фармакопейные стандартные образцы. Повторяемость аналитической методики оценивают по независимым результатам, полученным в одинаковых регламентированных условиях в одной лаборатории (один и тот же исполнитель, одно и то же оборудование, один и тот же набор реактивов) в пределах короткого промежутка времени. Внутрилабораторная (промежуточная) прецизионность валидируемой методики оценивается в условиях работы одной лаборатории (разные дни, разные исполнители, разное оборудование и т. д.). Межлабораторная прецизионность (воспроизводимость) валидируемой методики оценивается при проведении испытаний в разных лабораториях. Устойчивость валидируемой методики – это способность сохранять найденные для нее в оптимальных (номинальных) условиях характеристики, приведенные в таблице, при вероятных небольших отклонениях от этих условий проведения анализа. Устойчивость методики не следует определять по отношению к легко контролируемым условиям проведения анализа. Это резко сокращает необходимость в специальном изучении устойчивости. Устойчивость должна изучаться только в тех случаях, когда валидируемая методика основана на использовании особо чувствительных к внешним условиям методов анализа, таких как различные виды хроматографии и функционального анализа. При необходимости оценка устойчивости методики проводится на стадии ее разработки. Если вероятна невысокая устойчивость методики, проверка ее пригодности осуществляется в обязательном порядке непосредственно в процессе практического использования. Валидация метода/методики испытания – документированное подтверждение обоснованности (правильности) выбора методики испытаний, гарантирующее получение ожидаемых и воспроизводимых результатов, соответствующих поставленной цели. Верификация (оценка применимости) методики – экспериментальное доказательство того, что методика пригодна для достижения тех целей, для которых она предназначена, и может быть корректно воспроизведена в условиях конкретной лаборатории. Валидационный параметр – характеристика метода (методики), определяемая в ходе валидационного/верификационного исследования и позволяющая охарактеризовать адекватность метода (методики). Критерий приемлемости – заданное значение или ожидаемый результат определения валидационного параметра, которое используют для оценки адекватности метода (методики) путем сравнения с полученными экспериментальными данными. Референсный метод – аттестованный метод, используемый в качестве стандартного для оценки правильности результатов определения, полученных с использованием других методов того же целевого назначения. Альтернативный микробиологический метод – новый или усовершенствованный микробиологический метод, обеспечивающий оценку того же показателя качества, что и соответствующий референсный метод. 1.2. МАКРОСКОПИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ. Макроскопический анализ является основным методом определения подлинности цельного лекарственного растительного сырья. Для освоения макроскопического анализа необходимо знать морфологию растений, так как без этого невозможно провести полное исследование сырья и дать его исчерпывающую морфологическую характеристику. Техника макроскопического анализа сводится к изучению внешнего вида лекарственного растительного сырья невооруженным глазом или с помощью лупы (×10), измерению его отдельных частей, проведению органолептических проб – определению цвета, запаха, вкуса. Вкус определяется только для неядовитых объектов. При этом руководствуются соответствующим нормативно-техническим документом (ГОСТ, ТУ), разделом «Внешние признаки». Порядок проведения анализа можно описать общей схемой: Определить морфологическую группу сырья. Выделить главные диагностические признаки. Проанализировать выделенные признаки. Сравнить полученные данные с описанием, приведенным в разделе «Внешние признаки» нормативного документа на анализируемый вид сырья. 5. Сделать заключение о подлинности испытуемого образца. Для удобства классификации ЛРС его делят на морфологические группы, соответствующие органам растений, взятым для заготовки. Данная классификация удобна тем, что для сырья одной морфологической группы приводятся сходные методики заготовки, стандартизации и т.п. Морфологические группы сырья. Folia – Листья. Herba – Травы. Cormi – Побеги. Flores – Цветки. В период бутонизации Alabastra (бутоны). Fructus – Плоды. Semina – Семена. Cortex – Кора. Radices – Корни, Rhizomata – Корневища, Rhizomata cum radicibus – Корневища с корнями, Bulbi – Луковицы, Tubera – Клубни, Bulbotubera – Клубнелуковицы. FOLIA – ЛИСТЬЯ Folium – Лист Согласно ГФ XIV листьями в фармацевтической практике называют лекарственное сырье, представляющее собой высушенные или свежие листья или отдельные листочки сложного листа. Листья собирают обычно вполне развитые, с черешком или без черешка. При определении внешних признаков мелкие и кожистые листья обычно исследуют сухими; крупные тонкие листья, которые, как правило, бывают смятыми, предварительно размягчают во влажной камере или путем погружения на несколько секунд в горячую воду, после чего раскладывают на стеклянной пластинке, тщательно расправляя. При этом обращают внимание на форму и размеры листовой пластинки и черешка, отмечают опушение листа (обилие и расположение волосков), характер края и жилкование, наличие эфирномасличных железок и других образований на поверхности листа или наличие вместилищ в мезофилле (лупа 10×). Свежие листья исследуют без предварительной обработки. Размеры – длину и ширину пластинки листа, длину и диаметр черешка – определяют с помощью измерительной линейки. Цвет определяют с обеих сторон листа на сухом материале при дневном освещении, запах – при растирании листа, вкус – пробуя кусочек сухого листа или его отвар (только у неядовитых объектов). Основными диагностическими признаками листа являются: форма листовой пластинки простого или листочка сложного листа, характер верхушки, основания и края пластинки, тип жилкования, опушение верхнего и нижнего эпидермиса, цвет в сухом состоянии. Описание листьев: Основное отличие сложного листа от простого – наличие нескольких листовых пластинок (простых листочков) на общем черешке. Следует иметь в виду, что некоторые простые листья очень похожи на сложные (рис. 1).
|
