|
Рис. 1-61 Компоненты Axio Observer для метода DIC в проходящем свете
(2) DIC в проходящем свете с задвижкой анализатора ±30° (de SENARMONT)
Этот метод можно применять только с конденсором 0,35 H/DIC.
При применении задвижки анализатора ±30° сначала необходимо установить DIC-задвижку в центральное положение.
Введите поляризатор и установите анализатор ±30° (1-61/5) в положение 0° (темное положение) (поляризатор и анализатор пересекаются).
На турели конденсора выведите из хода лучей DIC-призму (например, используйте позицию свтлого поля или фазового контраста).
Выньте один окуляр и замените его вспомогательным микроскопом (или включите линзу Бертрана на фототубусе).
При наблюдении поля зрения с помощью вспомогательного микроскопа (или линзы Бертрана) видна диагональная черная полоса DIC-задвижки (проходит из левого верхнего угла в правый нижний).
С помощью винта с накатанной головкой на DIC-задвижке юстировуйте диагональную черную полосу в центр поля зрения.
Удалите вспомогательный микроскоп и снова установите окуляр (или выключите линзу Бертрана).
Введите в ход лучей DIC-положение на конденсоре.
Положите образец.
С помощью установочного колеса поверните анализатор из положения 0° и настройте, таким образом, оптимальный контраст.
Метод DIC работает с поляризованным светом и, следовательно, нарушается, если между поляризатором и анализатором находятся элементы с двойным преломлением, напр. пленки, которые иногда используются в связи с гистологическими срезами. Это же касается камер из плексигласа для культур, если дно камеры сделано из пластмассы. В этих случаях рекомендуется использовать камеры со стеклянным дном, чтобы избежать потерь оптической мощности.
3.6.4 Настройка PlasDIC-контраста в проходящем свете
3.6.4.1 Общий принцип действия
PlasDIC дает рельефное представление и особенно рекомендуется для применения на толстых образцах. Контраст можно применять вариативно. Возможно контрастирование лунок на краю плашек для микротитрирования. Сосуды для культивирования со стеклянным дном не требуются.
3.6.4.2 Оборудование прибора
Для контраста PlasDIC требуется штатив микроскопа со следующими компонентами:
Щелевая диафрагма 3,5 мм для PlasDIC в турели конденсора;
Задвижка PlasDIC в зависимости от объектива;
Модуль анализатора D P&C в рефлекторной турели или задвижка анализатора.
3.6.4.3 Настройка PlasDIC
Полностью откройте апертурную диафрагму конденсора (1-61/2).
Положите образец.
Введите в ход лучей позицию конденсора со щелевой диафрагмой 3,5 мм для PlasDIC. При переключении со светлого поля на PlasDIC следует увеличить яркость.
Введите в ход лучей модуль анализатора D P&C рефлекторной турели или задвижку анализатора (1-61/4 oder 5) под рефлекторной турелью.
Введите объектив для PlasDIC. Подходят объективы A-Plan 10x, LD A-Plan 20x, 32x или 40x,
LD Plan-Neofluar Korr 20x, 40x или 63x.
На револьверном устройстве для установки объективов вдвиньте задвижку PlasDIC в щель DIC
используемого объектива.
С помощью винта с накатанной головкой задвижки PlasDIC отрегулируйте контрастность. При этом структуры могут представляться рельефно или в псевдо-темном поле. Наилучший контраст дает рельефное представление.
3.6.5 Настройка VAREL-контраста в проходящем свете 3.6.5.1 Общий принцип действияVAREL-контраст дает рельефное изображение образцов; его можно использовать как альтернативу фазовому контрасту. VAREL-контраст можно использовать также и на искривленных поверхностях, например, 96ых плашках для микротитрирования, которые не контрастируются с помощью фазового контраста (нет кольцевого наложения!). 3.6.5.2 Оборудование прибора
Конденсор с турелью, на которой находятся VAREL-диафрагмы.
Объективы, пригодные для VAREL-контраста, например: A-Plan Ph 1 Var 1 или LD A-Plan Ph 2 Var 2.
3.6.5.3
 Настройка VAREL
Полностью откройте апертурную диафрагму (1-62/1).
Введите в ход лучей VAREL-диафрагму на турели конденсора (положение Var).
Введите на револьверном устройстве для установки объективов нужный VAREL-объектив.
С помощью установочного винта (1-62/2) передвиньте отверстие диафрагмы Var так, чтобы получить наилучший VAREL- контраст (впечаткление рельефа).
Рис. 1-62 Настройка VAREL-контраста
Плашки для микротитрирования: На краю лунки для освещения необходимо выбрать расположенное напротив VAREL-кольцо диафрагмы, в центре лунки возможно правое или левое VAREL-кольцо. Поле объекта с соответствующим изображением зрачка VAREL-диафрагмы представлено на рис.  1-63. Диафрагма представляется в изображении зрачка с поворотом на 180°. Рис. 1-63 VAREL-контраст на плашках для микротитрирования
Смещение VAREL-освещения за пределы зрачка соответствует одностороннему освещению темного поля.
Смещение VAREL-освещения между кольцами объектива Ph и VAREL соответствует наклонному освещению светлого поля.
Объектив
Var-контраст Наклонное HF-освещение Одностороннее DF-освещение
 Ph-кольцо VAREL-кольцо VAREL-диафрагма
Рис. 1-64 Изображение зрачка к VAREL-контрасту
3.6.6 Настройка флуоресцентного контраста в отраженном свете
3.6.6.1 Общий принцип действия
Флуоресцентный метод в отраженном свете позволяет контрастно представлять флуоресцирующие вещества в типичных цветах флуоресценции. Созданный мощным осветителем свет попадает во флуоресцентном микроскопе для отраженного света через теплозащитный фильтр на фильтр возбуждения. Отфильтрованное коротковолновое излучение возбуждения отражается дихроическим делителем лучей и фокусируется через объектив на препарате. Препарат абсорбирует коротковолновое излучение и затем излучает длинноволновое флуоресцентное излучение (закон Stoke), которое воспринимается объективом через изображение и пропускается дихроическим делителем лучей. Наконец, лучи проходят через заграждающий фильтр, который пропускает только излучение длинной волны, испускаемое образцом.
Возбуждающий и заграждающий фильтры должны быть спектрально очень хорошо согласованы между собой и находятся в рефлекторном модуле FL вместе с соответствующим дихроическим делителем излучения.
3.6.6.2 Оборудование прибора
Рекомендованные объективы: объективы для работы в светлом поле
Рефлекторный модуль FL в рефлекторной турели
На выбор: флуоресцентный осветитель HBO 100, HBO 50
Галогенный осветитель HAL 100 для освещения в проходящем свете
Перед использованием флуоресцентного метода в отраженном свете необходимо обязательно юстировать коротко-дуговую ртутную лампу с помощью юстировочного окошка. В зависимости от срока эксплуатации можно провести дополнительную юстировку. По выбору можно применять также самоюстирующийся HBO 100.
3.6.6.3 Настройка флуоресценции в отраженном свете
Первая регулировка флуоресценции в отраженном свете существенно облегчается, если начать с объектива Plan-Neofluar 20х/0,50 и препарата с высокой флуоресценцией. Сначала можно применять также демонстрационные образцы.
Включите галогенный осветитель HAL 100.
На револьверном устройстве для установки объективов (1-65/4) введите в ход лучей соответствующий объектив, например: Plan-Neofluar 20x/0,50.
Установите турель конденсора сначала в положение H для работы в светлом поле в проходящем свете (или же фазовый контраст) и найдите на образце необходимое место.
Сфокусируйтесь с помощью привода фокусировки.
Нажав на кнопку RL (1-65/6), закройте ход луча в отражающей части с помощью флуоресцентного затвора.
Включите флуоресцентный осветитель HBO 100 (1-65/1) на предвключенном приборе и в течение примерно 15 мин. дайте ему прогреться до рабочей температуры.
Выберите и включите на рефлекторной турели (1-65/5) рефлекторный модуль FL с необходимой комбинацией флуоресцентных фильтров (в зависимости от типа возбуждения).
Флуоресцентный осветитель HBO 100
Задвижка с ирисовой диафрагмой (полевая диафрагма)
Задвижка с ирисовой диафрагмой (апертурная диафрагма)
Револьверное устройство для установки объективов
Рефлекторная турель
Кнопка RL
Рис. 1-65 Компоненты Axio Observer для флуоресценции в отраженном свете
Откройте флуоресцентный затвор нажатием на кнопку RL (1-65/6).
Для флуоресцентного метода в отраженном свете в качестве апертурной диафрагмы и полевой диафрагмы используется задвижка с ирисовой диафрагмой. Однако, так как при флуоресцентном методе в отраженном свете апертурная диафрагма не видна, необходимо сначала центрировать задвижку для апертурной диафрагмы в гнезде для установки полевой диафрагмы и затем вставить ее в гнездо для апертурной диафрагмы.
Центровка задвижки апертурной диафрагмы или полевой диафрагмы проводится следующим образом:
Вставьте до фиксированного положения задвижку ирисовой диафрагмы в гнездо (1-65/2) для полевой диафрагмы (F).
С помощью установочного рычага закройте диафрагму настолько, чтобы она была видна в поле зрения.
Затем, регулируя оба юстировочных винта на задвижке (с помощью отвертки с шаровой головкой, SW 3 мм), центрируйте диафрагму к центру. Далее откройте диафрагму настолько, чтобы все поле было открытым.
Центрированную таким образом задвижку вставьте в гнездо (A) для установки апертурной диафрагмы (1-65/3) до фиксированного положения.
Вставьте в гнездо для полевой диафрагмы (3-65/2) еще одну задвижку с ирисовой диафрагмой.
Закройте полевую диафрагму настолько, чтобы она была видна в поле зрения.
Центрируйте полевую диафрагму относительно краев поля зрения двумя центровочными винтами.
Либо отройте полевую диафрагму настолько, чтобы она исчезла за пределами поля зрения, либо – при опасности диафрагмирования препарата – уменьшите ее до размеров поля зрения.
Далее проведите дополнительную фокусировку препарата и оптимизируйте положение коллектора флуоресцентного осветителя. При этом установите коллектор с помощью регулировки кнопкой с накаткой на флуоресцентном осветителе так, чтобы с помощью рефлекторного модуля коротковолнового возбуждения было по возможности равномерным освещение поля зрения. При наличии модулей с длинноволновым возбуждением коррекция положения коллектора не требуется.
|
Скачать 1.09 Mb.