Микробиологическая диагностика холеры

• Название: Микробиологическая диагностика холеры
• Дата: 09.04.2022
• Размер: 175.05 Kb.
• Имя файла: 208__165__208__190__208__208_N_771__128__208___208__191_N_771__1.docx
• Тип: Протокол; #456342

Микробиологическая диагностика холеры.
биовары Vibriocholerae патогенны для человека

Vibrio eltorVibrio proteusVibrioalbensis
Материалдляисследования:

• 
  фекалии
  
• 
  рвотные массы
  
• 
  вода
  
• 
  трупный материал смывы с рук
  
• 
  сыворотка крови
  
• 
  пищевые продукты
  

Методыисследования:

• 
  бактериоскопический – ориентировочный стайки рыб в мазке
  
• 
  бактериологический
  
• 
  серологический ра рпга
  

Экспрессметоды

• 
  РИФ с использованием специфических меченных О-холерных сывороток
  
• 
  ПЦР
  
• 
  реакция иммобилизации вибриона
  

Протоколисследованияиспражненийприподозрениинахолеру
1часисследования.

1. 
   РИФ с использованием специфических меченных О-холерных сывороток. В люминесцентном микроскопе наблюдается специфическое свечение.
   

Производится посев исследуемого материала на:

• 
  В первую пептонную воду
  
• 
  На чашку Петри со щелочным агаром (рн 85-90)
  
• 
  Термостат 37 град
  

Через 6-8часов

1. 
   На пептонной воде наблюдается равномерное помутнение.
   

2. 
   С пептонной воды готовится мазок и окрашивается по Граму.
   

В мазке обнаружены мелкие слегка изогнутые Гр^- палочки, располагающиеся хаотично.

3. 
   Ставится ориентировочная РА на стекле с сыворотками О₁, О₁₃₉, Инаба (АС), Огава (АВ).
   

+ - + -

Культура агглютинируется сыворотками О₁ и Инаба.


О₁ О₁₃₉ Ин аба Огава контроль

групповые типовые

сыворотки сыворотки

4. 
   Определяется подвижность возбудителя в препарате висячая или раздавленная капля.
   

Возбудитель обладает очень высокой подвижностью.

5. 
   Ставится реакция иммобилизации со специфической О-холерной сывороткой. Положительная реакция заключается в прекращении подвижности вибрионов через 2-3 минуты.
   

• 
  В случае если вышеуказанные реакции положительные, делается предварительное заключение о выделении от больного холерного вибриона.
  
• 
  Производится пересев культуры с первой пептонной воды на вторую пептонную воду и на тцбс на щелочной агар( независимо от получения результатов) термостат 37 град
  

Через10-12часов

Ислеед среда ТЦБС

КОЛОНИИ ЖЕЛТОГО ЦВЕТА Я(САХАРОЗА +) БРИЛЛИАНТ-СИННИЙ ИНДИКАТОР

1. 
   Исследуется щелочной агар, засеянный в первый час.
   

На щелочном агаре наблюдаются мелкие прозрачные колонии с гладкой поверхностью голубоватого оттенка («битое стекло»).

2. 
   Для проверки чистоты культуры из колонии со щелочного агара готовится мазок и окрашивается по Граму.
   

В мазке обнаружены мелкие слегка изогнутые Гр^- палочки, располагающиеся хаотично.

3. 
   Ставится ориентировочная РА на стекле с сыворотками О₁, О₁₃₉, Инаба (АС), Огава (АВ).
   

Культура агглютинируется сыворотками О₁ и Инаба.

4. 
   Определяется подвижность возбудителя в препарате висячая или раздавленная капля. Возбудитель подвижен.
   

Ставится реакция иммобилизации со специфической О-холерной сывороткой.
Возбудитель утрачивает подвижность при обработке специфической О-холерной сывороткой.

5. 
   Ставится РИФ.
   

В люминесцентном микроскопе наблюдается специфическое свечение. Колонии, давшие «+» реакции пересеваются:

• 
  на косой щелочной агар
  
• 
  на среду Ресселя
  
• 
  на сахарозно-лактозную среду
  

Через 20-24часа

1. 
   На среде Ресселя изменение цвета нижней части среды на желтый, верхняя часть среды цвет не меняет. Следовательно, исследуемая культура ферментирует глюкозу до кислоты без образования газа, лактозу не ферментирует.
   

2. 
   На сахарозно-лактозной среде изменение цвета нижней части среды на желтый, верхняя часть среды цвет не меняет. Следовательно, исследуемая культура ферментирует сахарозу до кислоты без образования газа, лактозу не ферментирует.
   

3. 
   На скошенном щелочном агаре обнаружен рост культуры в виде равномерного полупрозрачного налета по штриху.
   

4. 
   Для подтверждения чистоты культуры со щелочного агара готовится мазок и окрашивается по Граму.
   

В мазке обнаружены мелкие слегка изогнутые Гр^- палочки, располагающиеся хаотично.

5. 
   Повторяются:
   

• 
  РА на стекле с сыворотками О₁, О₁₃₉, Инаба (АС), Огава (АВ)
  
• 
  определение подвижности в препарате раздавленной капли
  
• 
  реакция иммобилизации возбудителя со специфической О-холерной сывороткой
  

• 
  Ставится развернутая РА до титра сыворотки
  
• 
  Производится пересев культуры в цветной ряд
  

Для определения биовара

• 
  производится пересев на МПА с полимиксином
  

• 
  ставятся пробы с фагами холерным и эльтор
  
• 
  ставятся пробы с куриными и бараньими эритроцитами
  
• 
  ставится реакция Фогес-Проскауэра (культура выращивается в глюкозо- фосфатном бульоне, добавляется реактив альфа-нафтол в растворе щелочи. При наличии ацетилметилкарбинола наблюдается рубиново-красное окрашивание среды).
  

Через30-36часов

1. 
   Учет развернутой РА
   

+ + + + + + + +
О₁сыв.

1/100 1/200 1/400 1/800 1/1600 1/3200 1/6400 1/12800 КС КА
+ + + + + + + +

Инаба
1/100 1/200 1/400 1/800 1/1600 1/3200 1/6400 1/12800 КС КА
- - - - - - - -

Огава
1/100 1/200 1/400 1/800 1/1600 1/3200 1/6400 1/12800 КС КА
Выделенная культура агглютинируется до титра сыворотками О₁ и Инаба, и не агглютинируется сывороткой Огава.

2. 
   Учет результатов цветного ряда
   

манноза сахароза арабиноза
Выделенная культура ферментирует маннозу и сахарозу до кислоты без образования газа, арабинозу не ферментирует.

3. 
   Дифференциальная диагностика биоваров
   

тест	biovar cholerae	biovar eltor
Рост на среде с полимексином	рост «-»	рост «+»
Лизис фагами: «С» eltor	лизис «+» лизис «-»	лизис «-» лизис «+»
РГА с куриными эритроцитами	реакция «-»	реакция «+»
Гемолиз бараньих эритроцитов (проба Грейга)	гемолиз не наблюдается	гемолиз «+» (лаковая кровь)
Реакция Фогес- Проскауэра (образование ацетилметилкарбинола)	реакция «-»	реакция «+» (среда малинового цвета)

Заключение: На основании проведенных исследований можно сделать вывод о принадлежности возбудителя к VibrioeltorО₁ Инаба.

6.