Микробиология как наука. Медицинская микробиология как научная дисциплина, ее задачи и практическое применение в стомат практике
 Скачать 379.13 Kb.
|
|
55. Механизмы развития аллергии немедленного типа как проявления иммунопатологии. Реагиновый механизм аллергии. ГНТ- аллергические реакции, проявляющиеся уже через 20-30 минут после повторной встрече с аллергеном. Аллергическая реакция I типа связана с биологическими эффектами IgE и G4, названных реагинами,которые обладают цитофильностью – сродством к тучным клеткам и базофилам. Связывание аллергена с рецепторным комплексом вызывет дегрануляцию базофила и тучной клетки – залповый выброс БАВ, содержащийся в гранулах, в межклеточное пространство. Их действие практически мгновенно, но кратковременно. В результате развиваются бронхоспазм, вазодилятация, отек и прочие симпотмы,характерные для анафилаксии. Вырабатываемы цитокины стимулируют клеточное звено иммунитета: образование Т2-хелпера и эозинофилегенез. Проявляется в клинической картине анафилаксии. 56. Клеточный иммунный ответ: спонтанный, индуцированный, ГЗТ. Механизмы развития. Клеточный иммунный ответ подразумевает формирование клона лимфоцитов (К-лимфоциты, цитотоксические лимфоциты), способных разрушать клетки мишени, мембраны которых содержат чужеродные материалы (например, вирусные белки). В отличие от гуморального иммунитета кот осущ-ся при помощи АТ, клеточный иммунитет подразумевает защиту организма при помощи клеток иммунной системы. Клеточный иммунитет обеспечивает сзащиту 3мя основными способами: 1)активируя антиген-специфические Т-лимф., кот распознают и уничтожают чужеродные АГ. 2)активируя макрофаги и Т-киллеры, кот разрушают внутриклеточные патогенны. 3)стим. секрецию цитокинов, кот обеспечивают согласованную реакцию различных клеток иммунной системы. Клеточный иммунный ответ направлен в основном против микроорганизмов невосприимчивых к действию фагоцитов или поражающих другие клетки (вирусов, внутриклеточных грибов), а также против опухолевых клеток. Большое значение имеет в реакциях отторжения тканей. 57. Методы с использованием меченных антител для определения количества Т- и В- лимфоцитов. Оценка иммунологической реактивности человека в настоящее время предполагает дифференцированную характеристику функциональной активности Т- и В-систем иммунитета. Для этого разработан и внедрен в клиническую практику ряд тестов. Мы приведем здесь только те тесты, которые наиболее широко используются в клинике. Для оценки В-системы иммунитета применяют: Определение количества В-лимфоцитов. Это исследование проводится с помощью иммунофлюоресцентного метода и моноклональных антител к поверхностному рецептору В-лимфоцитов (СВ21+моноклональные антитела). До недавнего времени количество В-лимфоцитов определялось с помощью теста розеткообразования, который основан на том, что В-лимфоциты человека образуют розетки с мышиными эритроцитами. С помощью иммунофлюоресцентного метода, применяя антиглобу-линовые сыворотки, можно обнаружить и посчитать все лимфоциты, несущие им-муноглобулиновые детерминанты, т.е. В-лимфоциты. Исследование функциональной активности В-лимфоцитов. Определяют по уровню пролиферативной активности этих лимфоцитов в присутствии митогена лаконоса (pookweed mitogen, PWM) или липополисахарида (LPS), которые могут вызвать поликлональную стимуляцию В-лимфоцитов, а также по способности В-лимфоцитов секретировать иммуноглобулины, которые выявляют в цитоплазме иммунофлюоре-сцентным методом с использованием антииммуноглобулиновых сывороток. Для оценки Т-системы иммунитета применяют: Определение количества Т-лимфоцитов, Т-хелперов, Т-супрессоров и лимфоцитов-киллеров. Проводится с помощью иммунофлюоресцентного метода и моноклональных антител к поверхностным рецепторам этих клеток: CD3+ все Т-лимфоциты, СВ4+-хелперы, СВ8+-супрессоры, СО16+-киллеры. До недавнего времени для количественной характеристики Т-лимфоцитов и их подклассов (хелперов, супрессо-ров, киллеров) использовался тест розеткообразования, т.е. способность лимфоцитов формировать розетки с эритроцитами барана. Однако в настоящее время этот тест утрачивает свое значение, уступая место менее сложному и более специфичному иммунофлюоресцентному методу с использованием моноклональных антител к поверхностным рецепторам лимфоцитов. Упоминание здесь о тестах розеткообразования обусловлено тем, что некоторые результаты, о которых речь пойдет далее, получены с их помощью. Оценка функциональной активности Т-лимфоцитов. Этот тест основан на способности Т-лимфоцитов пролиферировать в ответ на стимуляцию неспецифическим митогеном (субстанциями, названными так из-за способности вызывать митозы в лимфоцитах) и продуцировать интерлейкины (ИЛ-1 и ИЛ-2). Необходимо отметить, что раньше пролиферативную активность лимфоцитов оценивали по количеству бластов (бласттрансформация) и митозов, появляющихся в стимулированной митогеном культуре, в настоящее время — используя радиоактивную метку и ее подсчет на сцинтилляционном счетчике. 58. Современный методы лабораторной диагностики. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) ПЦР – экспериментальный метод, позволяющий добиться значительного увеличения малых концентраций определенных фрагментов нукл кислоты (ДНК) в био материале. При проведении ПЦР выполняется 20-35 циклов, каждый из которых состоит из трех стадий: 1. Денатурация ДНК – расщепление двойной спирали при 93-95 градусов в теч. 30-40 с. 2. Отжиг – присоединение праймеров при темп 50-65 гр в теч 20-60 с. Праймер – это химически синтезированные затравки олигонуклеотидной природы для ПЦР, определяющие границы амплифицируемого участка ДНК-матрицы и комплементарные противоположным ее цепям. 3. Элонгация – достраивание цепей ДНК при тем 70-72 гр в теч 20-40с. Добавляют ДНК-полимеразу – катализатор для создания бол числа копий. Для визуализации результатов амплификации используют метод электрофореза, основанного на разделении ДНК по размеру. 59. Макрофаги: гистогенез, функциональные характеристики, основные медиаторы. Макрофáги (от др.-греч. μακρός — большой, и φάγος — пожиратель (синонимы: гистиоцит-макрофаг, гистофагоцит, макрофагоцит, мегалофаг-пожиратель)), полибласты, клетки мезенхимальной природы в животном организме, способные к активному захвату и перевариванию бактерий, остатков погибших клеток и других чужеродных или токсичных для организма частиц. Термин «макрофаги» введён Мечниковым. К макрофагам относят моноциты крови, гистиоциты соединительной ткани, эндотелиальные клетки капилляров кроветворных органов, купферовские клетки печени, клетки стенки альвеол лёгкого (лёгочные макрофаги) и стенки брюшины (перитонеальные макрофаги). Установлено, что у млекопитающих предшественники макрофагов образуются в костном мозге. Активными фагоцитарными свойствами обладают также клетки ретикулярной ткани кроветворных органов, объединяемые с макрофагами в ретикуло-эндотелиальную (макрофагическую) систему, выполняющую в организме защитную функцию. Морфология Главный тип клеток системы мононуклеарных фагоцитов. Это крупные (10 — 24 мкм) долгоживущие клетки с хорошо развитым лизосомальным и мембранным аппаратом. На их поверхности имеются рецепторы к Fc-фрагменту IgGl и IgG3, C3b-фрагменту С, рецепторам В- и Т-лимфоцитов, комплементу, другим интерлейкинам и гистамину. Тканевые макрофаги Фактически моноцит становится макрофагом, когда покидает сосудистое русло и проникает в ткани. В зависимости от типа ткани выделяют следующие виды макрофагов. Гистиоциты — макрофаги соединительной ткани; компонент ретикуло-эндотелиальной системы. Купферовские клетки — иначе эндотелиальные звездчатые клетки печени. Альвеолярные макрофаги — иначе, пылевые клетки; расположены в альвеолах. Эпителиоидные клетки — составляющие гранулемы. Остеокласты — многоядерные клетки, участвующие в резорбции костной ткани. Микроглия — клетки центральной нервной системы, разрушающие нейроны и поглощающие инфекционные агенты. Макрофаги селезенки Идентификация макрофагов макрофаги содержат многочисленные цитоплазматические ферменты и могут быть идентифицированы в тканях гистохимическими методами, которые обнаруживают эти ферменты. Некоторые ферменты, типа мурамидазы (лизоцима) и химотрипсина, могут обнаруживаться методом меченных антител (иммуногистохимия), при котором используются антитела против белков фермента. Такие моноклональные антитела против различных CD антигенов широко используются для идентифицикации макрофагов. Функции макрофагов функции макрофагов включают в себя фагоцитоз, «обработку» антигенов и взаимодействие с цитокинами. Фагоцитоз Неиммунный фагоцитоз: макрофаги способны фагоцитировать чужеродные частицы, микроорганизмы и остатки поврежденных клеток непосредственно, без вызова иммунного ответа. Однако фагоцитоз микроорганизмов и их уничтожение значительно облегчаются при присутствии специфических иммуноглобулинов, комплемента и лимфокинов, которые производятся иммунологически активированными T-лимфоцитами. Иммунный фагоцитоз: макрофаги имеют поверхностные рецепторы для C3b и Fc-фрагмента иммуноглобулинов. Любые частицы, которые покрыты иммуноглобулином или комплементом (опсонизированы), фагоцитируются значительно легче, чем «голые» частицы. «Обработка» антигенов: макрофаги «обрабатывают» антигены и представляют их B- и T-лимфоцитам в необходимой форме; Это клеточное взаимодействие включает одновременное распознавание лимфоцитами MHC молекул и «обработанных антигенов», находящихся на поверхности макрофагов. Взаимодействие с цитокинами: макрофаги взаимодействуют с цитокинами, производимыми T-лимфоцитами для защиты организма против определенных повреждающих агентов. Типичный результат такого взаимодействия — формирование гранулем. Макрофаги также производят цитокины, включая интерлейкин-l, b-интерферон и факторы роста T- и B-клеток. Различные взаимодействия лимфоцитов и макрофагов в тканях проявляются морфологически при хроническом воспаление. Роль макрофагов не ограничивается секрецией ИЛ-1. В этих клетках синтезируется еще ряд биологически активных веществ, каждое из которых делает свой вклад в воспаление. К ним относятся: эстеразы, протеазы и антипротеазы; лизосомальные гидролазы — коллагеназа, аластаза, лизоцим, α-макроглобулин; монокины — ИЛ-1, колониестимулирующий фактор, фактор, стимулирующий рост фибробластов; антиинфекционные агенты — интерферон, трансферрин, транскобаламин; компоненты комплемента: С1, С2, СЗ, С4, С5, С6; дериваты арахидоновой кислоты: простагландин Е2, тромбоксан А2, лейкотриены. 60. Антигенпрезентирующие клетки: виды, роль в формировании клеточного и гуморального иммунного ответа. Клетки антигенпрезентирующие (АПК) — клетки системы мононуклеарных фагоцитов (моноциты, макрофаги, купферовские клетки, клетки Лангерганса, дендритные клетки) и В-лимфоциты, способные осуществлять протеолиз экзо- и эндогенных белковых антигенов, в результате чего образуются пептиды. Последние связываются в цитоплазме клетки с комплементарными участками молекул I или II класса, транспортируются к мембране клетки и экспонируются на ее поверхности, где распознаются Т-хелперами или Т-киллерами с помощью антигенспецифических рецепторов. Антигенпредставляющие клетки (А-субсистема) присутствуют преимущественно в коже, лимфатических узлах, селезёнке и тимусе. К ним относятся макрофаги, дендритные клетки, фолликулярные отростчатые клетки лимфоузлов и селезёнки, клетки Лангерханса, М-клетки в лимфатических фолликулах пищеварительного тракта, эпителиальные клетки вилочковой железе. Эти клетки захватывают, перерабатывают и представляют Аг (эпитоп) на своей поверхности другим иммунокомпетентным клеткам, вырабатывают ИЛ-11 другие цитокины, секретируют простагландин Е2 (PGE2), угнетающий имп ный ответ. Фагоцитарную и цитолитическую активность макрофагов усиливает γ-ИФН. Дендритные клетки происходят из костного мозга и образуют популяцию долгоживущих клеток, которые запускают и модулируют иммунный ответ. В костном мозге их предшественники образуют субпопуляцию СD34+-клеток, которые способны дифференцироваться в клетки Лангерханса для эпителия и дендритные клетки для внутренней среды. Незрелые и неделяшиеся предшественники дендритных клеток заселяют многие ткани и органы. Лн ференцировку дендритных клеток поддерживают колониестимулируюший фактор гранулоцитов и макрофагов GM-CSF и ИЛ-3. Дендритные клетки имеют звёздчатую форму и в состоянии покоя несут на поверхности относители небольшое количество молекул МНС. В отличие от клеток Лангерханса, интерстициальные дендритные клетки способны стимулировать синтез Ig В-лимфоцитами. Все дендритные клетки могут вначале поступать в тимус-зависимую зону периферических лимфоидных органов, где созревают в так называемые интердигитирующие клетки. 61. Механизмы развития ГНТ как проявления иммунопатологии. Комплемент-зависимый (цитотоксический) механизм аллергии. Измененная клетка+IgG, IgM + комплемент – разрушение клетки. Медиаторы: комплемент, актив форма кислорода. Териоидит Хашимото, гемолитич анемия. 62. Механизм развития ГНТ как проявления иммунопатологии. Иммунокомплексный механизм развития аллергии. Роль в аутоиммунных реакциях. Крупномолек белок вводят в организм + IgM,G = преципитин. Он осаждается на внутр стенках сосудов и повреждает их. Выражена альтерация. Сывороточ болезнь, гломерулонефрит, аутоиммун заболевания. Медиаторы: биоген амины, актив формы кислорода. 63. Механизмы развития аллергии замедленного типа как проявления иммунопатологии. Клетки и медиаторы опосредующие ГЗТ. ГЗТ представляет собой лимфоидно-макрофагальную реакцию, которая развивается в результате иммунной активации макрофагов под влиянем лимфоцитов,сенсибилизированных к аллергену. Основу ГЗТ составляют нормальные механизму иммунного ответа. АГ:1.некоторые микроорганизмы;2. Чужеродные белковые вещества; 3. Гаптены. Медиаторы аллергии –лимфокины, гамма-интерфероны Клеточный иммунный ответ подразумевает формирование клона лимфоцитов (К-лимфоциты, цитотоксические лимфоциты), способных разрушать клетки мишени, мембраны которых содержат чужеродные материалы (например, вирусные белки). В отличие от гуморального иммунитета кот осущ-ся при помощи АТ, клеточный иммунитет подразумевает защиту организма при помощи клеток иммунной системы. Клеточный иммунитет обеспечивает сзащиту 3мя основными способами: 1)активируя антиген-специфические Т-лимф., кот распознают и уничтожают чужеродные АГ. 2)активируя макрофаги и Т-киллеры, кот разрушают внутриклеточные патогенны. 3)стим. секрецию цитокинов, кот обеспечивают согласованную реакцию различных клеток иммунной системы. Клеточный иммунный ответ направлен в основном против микроорганизмов невосприимчивых к действию фагоцитов или поражающих другие клетки (вирусов, внутриклеточных грибов), а также против опухолевых клеток. Большое значение имеет в реакциях отторжения тканей. 76. Иммунотерапия и иммунопрофилактика инфекционных заболеваний. Сущность и определение понятий "вакцина", "серотерапия" и "серопрофилактика". 1. Иммунотерапия— лечение иммунологическими препаратами и препаратами, которые воздействуют прицельно на иммунную систему При лечении острых тяжелых генерализованных форм инфекционных заболеваний, особенно тех, возбудители которых продуцируют экзотоксин, возникает, как правило, необходимостьэкстренногосозданияпассивногоискусственногоприобретенногоиммунитета.Дляэтихцелейиспользуютсяследующиеантительныепрепараты: • антитоксические и антибактериальные (антимикробные) иммунные сыворотки; • иммуноглобулины (гамма-глобулины); • плазма. Иммунные сыворотки, используемые в практике специфической профилактики и терапии инфекционных болезней, получают отиммунизированныхживотных,переболевшихлюдейили специальноиммунизированныхдоноров. 2. Антитоксическиесывороткисодержатантителапротивэкзотоксинов.Их получают путемгипериммунизацииживотных(лошадей)анатоксином. Активностьтаких сывороток измеряется в АЕ (антитоксических единицах) или ME (международных единицах) — это минимальное количество сыворотки, способное нейтрализовать определенное количество (обычно 100 DLM) токсина для животных определенного вида и определенной массы. ВнастоящеевремявРоссииширокоиспользуютсяследующиеантитоксическиесыворотки: • противодифтерийная; • противостолбнячная; • противогангренозная; • противоботулиническая. Применение антитоксических сывороток при лечении соответствующих инфекций обязательно. 3. Антимикробныесывороткисодержат антителапротивклеточныхантигеноввозбудителя.Их получают иммунизацией животных клетками соответствующих возбудителей и дозируют в миллилитрах. Антимикробныесывороткимогутприменятьсяприлечении: • сибирской язвы; • чумы; • стрептококковых инфекций; • стафилококковой инфекции; • синегнойной инфекции. Их назначение определяется тяжестью течения заболевания и, в отличие от антитоксических, не является обязательным. При лечении больных с хроническими, длительно, вяло текущими формами инфекционных заболеваний возникает необходимость стимулировать собственные механизмы специфической зашиты путем введения различных антигенных препаратов и создания активного приобретенного искусственного иммунитета (иммунотерапияантигеннымипрепаратами).Для этих целей используются в основном лечебные вакцины и значительно реже — аутовакцины или стафилококковый анатоксин. Убитыелечебныевакцины — дизентерийная, гонококковая (гоновакцина), бруцеллезная, стафилококковая — используются довольно давно. 4. Особую,отдельнуюгруппулечебныхвакцинпредставляют аутовакцины,приготовленные из убитых прогреванием при 70—80 °С в течение 1 ч штаммов возбудителей, выделенных в результате бактериологического исследования от данного больного. Аутовакциныимеютопределенныепреимущества:они создают антигены конкретного возбудителя, учитывая его штаммовые особенности. |