Санитарная микробиология. Министерство сельского хозяйства и продовольствия российской федерации
 Скачать 248 Kb.
|
|
Материалы и оборудование. Колба с исследуемой водой — 50 мл пробирки с разведенной водой в 10 и 100 раз (приготовленные при определении микробного числа воды), пробирки с щелочно-элективной средой по 5 мл, пипетки на 1—2 мл. Методические указания к выполнению работы. Определение индекса энтерококка, т. е. количество энтерококков в 1 л воды, проводится параллельно с определением микробного числа и индекса БГКП путем посев различных объемов воды (см. табл. 4) на жидкую щелочную элективную среду с полимиксином. Высокая элективность среды достигается установлением рН 10—10,2 и применением полимиксина, подавляющих рост посторонних бактерий. Посевы помещают в термостат при температуре 37°С на 48 ч. МЕТОДЫ ПРЯМОГО ОБНАРУЖЕНИЯ ПАТОГЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ В ВОДЕ Задание 6. Изучить методы исследования воды на наличие сальмонелл. Материалы и оборудование. Колбы с исследуемой водой — 500 мл и 200 мл, колбы с 10% пептонной водой — 10 мл и селенитовой средой — 200 мл. Методические указания к выполнению работы. При исследовании воды на сальмонеллы питьевую воду и воду открытых водоемов засевают по 200 мл в среды обогащения — селенитовую среду (или магниевую среду) двойной концентрации. Посевы культивируют при температуре 37°С в течение 18—20 ч. Заполнить табл.2-4. Занятие 2. Тема: Санитарно-микробиологическое исследование воздуха (окончание), воды (продолжение), почвы. 4 часа Цель занятия: Освоение методов санитарно-бактериологического исследования воздуха, воды, почвы. Содержание занятия: 1) исследование воздуха на общую обсемененность (учет результатов); 2) определение микробного числа воды (окончание); 3) определение коли-титра воды бродильным методом (продолжение); 4) определение индекса энтерококка воды (продолжение); 5) исследование воды на наличие сальмонелл (продолжение); 6) определение микробного числа почвы; 7)определение коли-титра почвы; 8) определение перфрингенс-титра почвы. Вопросы для самоподготовки. Санитарно-показательные микроорганизмы воздуха. Микрофлора почвы, методы микробиологического исследования. Санитарно-показательные микроорганизмы почвы. САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОЗДУХА (ОКОНЧАНИЕ) Задание 1. Учесть результаты исследования воздуха на общую обсемененность микробами, подсчитать число колоний, выросших на чашках с мясопептонным агаром, определить количество микробов в 1 м воздуха. Произвести микроскопическое исследование колоний, выросших на кровяном и молочно-желточно-солевом агарах, определить количество золотистых стафилококков и стрептококков в 1 м3 воздуха. Материалы и оборудование. Посевы, сделанные студентами на занятии 1; аппарат для счета колоний. Методические указания к выполнению работы. Пояснение к работе и таблицу см. в занятии 1 (задание 1). Результаты записать в табл.1. САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОДЫ (ПРОДОЛЖЕНИЕ) Задание 2. Определить микробное число воды (учет результатов): подсчитать количество колоний, выросших на чашках с мясопептонным агаром и определить количество микробов в 1 мл исследуемой воды. Материалы и оборудование. Посевы, сделанные студентами на занятии, счетная камера. Методические указания к выполнению работы. Выросшие в толще и на поверхности мясопептонного агара колонии подсчитывают, пользуясь лупой, дающей пятикратное увеличение, или аппаратом для полуавтоматического подсчета колоний. При большом количестве выросших колоний (более 300) для облегчения подсчета пользуются счетной камерой. Под стекло камеры помещают чашку Петри с колониями и подсчитывают их количество на 20 см2, затем делят на 20 и умножают на площадь чашки Петри (78,5 см2). Для получения микробного числа необходимо количество выросших колоний в каждой чашке Петри умножить на соответствующее разведение воды, полученные результаты сложить и разделить на количество чашек. Результат записать в табл. 2. Для водопроводной воды микробное число не должно превышать 100. Задание 3. Продолжить определение коли-титра воды бродильным методом (II этап): учесть результаты брожения в глюкозопептонной среде (с учетом показателей табл. 11, 12) и записать в табл. 4; из положительных проб произвести высев на сектора среды Эндо. Материалы и оборудование: посевы на глюкозопептонной воде, сделанные на занятии 1; чашки Петри со средой Эндо. Методические указания к выполнению работы. В среде накопления — глюкозопептонной среде — учитывают положительные пробы (по помутнению, кислото- и газообразованию или по помутнению и кислотообразованию) и отмечают результаты в табл.. Из положительных проб производят высевы в чашки Петри на среду Эндо, разделенную на 3—4 сектора в зависимости от количества положительных проб. Посевы необходимо производить штрихами, чтобы получить рост изолированных колоний. Культивируют посевы при температуре 37°С в течение 16—18 ч. Задание 4. Продолжить определение индекса энтерококков воды (II этап): отметить в табл. 39 результаты посева воды на щелочно-элективной среде, произвести высев с нее на сектора молочно-ингибиторной среды. Материалы и оборудование: Посевы на щелочно-элективной среде, сделанные студентами на занятии 1, чашки Петри с молочно-ингибиторной средой. Методические указания к выполнению работы Из всех пробирок с посевом воды на щелочно-элективной среде делают высев секторами в чашку Петри с молочно-ингибиторной средой. Посевы помещают в термостат на сутки. Ход исследования записывают в табл.. Задание 5. Продолжить исследование воды на наличие сальмонелл (II этап): отметить в протоколах исследования характер роста на пептонной воде и селенитовой среде, пересеять из селенитовой среды на среду Эндо и висмут-сульфитный агар. Материалы и оборудование: Посевы, сделанные студентами на занятии 1, чашки Петри со средой Эндо и висмут-сульфитным агаром. Методические указания к выполнению работы. При наличии диффузного роста в колбах с селенитовой средой делают высев на чашки Петри со средой Эндо и на 2—3 чашки с висмут-сульфитным агаром. Посевы помещают в термостат на 18—20 ч при температуре 37°С САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПОЧВЫ Оценка фекального загрязнения почвы и его давности производятся по коли-титру, перфрингенс-титру, иногда по титру энтерококков. Параллельно с этими показателями определяется микробное число почвы. Предварительно производят отбор проб почвы. На обследуемой территории площадью до 1000м2 выбирают два участка по 25 м3 (один — вблизи источника загрязнения, другой — в отдалении от него. На каждом из участков (с соблюдением стерильности) берут из 5 точек (4 — по углам участка, одна — в центре) на глубине 10—20 см стерильным совком (из более глубоких с помощью специального бура. Помещают по 200—300 г почвы в широкогорлые колбы с ватными пробками (можно все взятые пробы одного участка перемешать и направить на исследование. На банки наклеивают этикетки, пишут сопроводительное письмо и отправляют с нарочный. Пробы почвы полагается исследовать сразу же или в течение 6—18 ч, сохраняя их при температуре не выше 1—5 °С. В лаборатории пробу почвы измельчают, освобождают от камней, осколков стекол, корней растений, просеивают через сито, тщательно перемешивают и отвешивают 30 г. в колбу объемом 500 мл, наливают 270 мл стерильной водопроводной воды и вносят в нее отвешенную пробу почвы, все интенсивно встряхивают 10 минут и, не давая отстояться частицам суспензии, готовят серию десятикратных последовательных разведений. Задание 6. Определить микробное число почвы; посеять почвенную болтушку в чашки с мясопептонным агаром (табл.). Материалы и оборудование. Пробирка с 10% суспензией почвы (почвенная болтушка), пробирки со стерильной водой по 9 мл, пипетки на 1—2 мл, пробирки с мясопептонным агаром по 15 мл, стерильные чашки Петри. Методические указания к выполнению работы. При определении микробного числа почвы по 1 мл приготовленных разведении почвенной суспензии вносят в чашки Петри, заливают расплавленным и охлажденным мясопептонным агаром; культивируют 48 ч при 28—30°С. Таблица 5 Определение микробного числа почвы
Задание 7. Определить коли-титр почвы (I этап): посеять почвенную болтушку в среду Кесслера (табл. 41). Материалы и оборудование: Пробирка с 10% суспензией почвы, пробирки с разведениями (1:10, 1:100) почвенной болтушки, пробирки со средой Кесслера по 9 мл, пипетки на 1—2 мл. Методические указания к выполнению работы. Готовят 10% почвенную суспензию, из нее делают разведения. Из суспензии и разведении 1:10, 1:100 засевают по 1 мл в пробирки со средой Кесслера. Таким образом, в среду вносятся 0,1 г, 0,01 и 0,001 г исследуемой почвы. Задание 8. Определить перфрингенс-титр почвы: посеять почвенную болтушку в среду Вильсона — Блера (табл. 42). Материалы и оборудование: Пробирка с 10% суспензией почвы, пробирки с разведениями суспензии (1:10, 1:100), стерильные пробирки, пипетки на 1—2 мл, стерильные чашки Петри, пробирки со средой Вильсона—Блера по 15 мл, водяная баня, термометр. Таблица 6 Определение коли-титра почвы
Методические указания к выполнению работы. Перфрингенс-титр определяют, используя для посева два ряда параллельных разведении почвы. При этом пробирки с одним рядом разведении прогревают при 80° С 15 мин. По 1 мл из обоих рядов разведении переносят в чашку Петри и заливают расплавленной средой Вильсона — Блера. Пробирки помещают в термостат при 37°С на 24 ч. Таблица 7 Определение перфрингенс-титра почвы
Оформление альбома. Записать полученные результаты в табл. 36—39. Подготовить таблицы 40, 41, 42. Занятие 3 Тема: Санитарно-микробиологическое исследование воды (окончание), почвы (продолжение), пищевых продуктов 4 часа Цель занятия. Изучить методы санитарно-бактериологического исследования воды, почвы, пищевых продуктов. Содержание занятия: 1) определение коли-титра воды бродильным методом (окончание); 2) определение индек- энтерококков воды (окончание); 3) исследование воды на наличие сальмонелл (окончание); 4) определение микробного числа почвы (окончание); 5) определение колититра почвы бродильным методом; 6) определение перфрингенс-титра почвы (окончание); 7) определение общей микробной обсемененности молока; 8) определение коли-титра молока; 9) бактериоскопическое исследование сметаны и кефира; 10) исследование пищевых продуктов при пищевых токсикоинфекциях. Вопросы для самоподготовки. Общие принципы санитар-но-микробиологического исследования пищевых продуктов. Бактериальная флора молока и молочнокислых продуктов. Методы санитарно-бактериологического исследования молока и молочных продуктов. Значение условно-патогенных микроорганизмов в этиологии пищевых токсикоинфекций. Микотоксикозы. Мясопродукты как источник и фактор передачи инфекционных заболеваний. Методьэ санитарно-бактериологического исследования мясных продуктов. Методы санитарно-бактериологического исследования консервов. САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОДЫ (ОКОНЧАНИЕ) Задание 1. Закончить определение коли-титра воды бродильным методом (III этап): учесть характер роста на среде Эндо. Записать результаты и заключение в табл.. Материалы и оборудование Посевы на среде Эндо, фильтровальная бумага, смоченная фенилендиамином. При учете результатов на среде Эндо изучают цвет выросших колоний. Если на секторах среды выросли темно-красные колонии, характерные для БГКП, то проводят подтверждающие исследования путем микроскопии окрашенных по Граму мазков и постановки оксидазного теста. Для этого по 2—3 характерные колонии снимают петлей и наносят на фильтровальную бумагу, смоченную реактивом. При отсутствии изменения цвета бумаги пробу на оксидазу считают отрицательной и, наоборот, посинение бумаги в течение 1 мин свидетельствует о наличии активной оксидазы у бактерий. Обнаружение в мазках грамотрицательных палочек с отрицательным оксидазным тестом позволяет дать положительный ответ о наличии БГКП в исследуемой пробе воды. Задание 2. Закончить определение индекса энтерококков воды (III этап): отметить в табл. 39 результаты посева на молочно-ингибиторную среду и записать заключение. Материалы и оборудование:. Посевы на молочно-ингибиторной среде, сделанные студентами на занятии 2. Методические указания к выполнению работы. На молочно-ингибиторной среде отмечают рост крупных черных с металлическим оттенком колоний (Streptococcus faecalis) и мелких сероватых колоний (Streptococcus faecium). При микроскопии мазков из колоний обнаруживают грамположительные, слегка вытянутые диплококки, часто располагающиеся в виде цепочек. Окончательный ответ об индексе энтерококка вычисляется по табл. 11, 12. Записать данные в табл. 39. Задание З. Закончить исследование воды на наличие сальмонелл (III этап). Отметить в протоколах характер роста колоний на средах Эндо и висмут-сульфитных средах. Материалы и оборудование Посевы на средах Эндо и висмут-сульфитном агаре. Сальмонеллы образуют на висмут-сульфитном агаре круглые черные колонии с сероватым металлическим ободком или зеленые колонии (с потемнением среды под колонией). Подозрительные колонии (в количестве 4 и 5) пересевают на среду Ресселя или трехсахарный агар с мочевиной по Олькеницкому, далее исследование проводят по обычной схеме: посев на пестрый ряд, определение подвижности, агглютинация с поливалентной и монорецептор-ными сальмонеллезными сыворотками, фаготипирование. САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПОЧВЫ (ПРОДОЛЖЕНИЕ) Задание 4. Закончить определение микробного числа почвы: подсчитать количество колоний, выросших на чашках с мясопептонным агаром, определить число микробов в 1 г исследуемой почвы, результаты записать в табл. 40. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||