Санитарная микробиология. Министерство сельского хозяйства и продовольствия российской федерации
 Скачать 248 Kb.
|
|
Материалы и оборудование Посевы, сделанные на занятии 2, счетная камера. Методические указания к выполнению работы. Подсчитать выросшие в толще агара и на поверхности колонии, пользуясь лупой (Х 5) или счетной камерой. Высчитать среднее арифметическое. Записать в табл. 40 результат и заключение. Задание 5. Продолжить исследование по определению коли-титра почвы бродильным методом (II этап): учесть результаты в среде Кесслера, записать в табл. 41, сделать пересев со среды Кесслера на сектора среды Эндо. Материалы и оборудование Посевы на среде Кесслера, сделанные на занятии 2, чашки Петри со средой Эндо. Методические указания к выполнению работы. Присутствие в бродильной пробе кишечных палочек подтверждается высевом со среды Кесслера на среду Эндо. Посевы помещают в термостат на сутки. Задание 6. Закончить определение перфрингенс-титра почвы, отметить в табл. 42 результаты посева почвенной суспензии на среде Вильсона — Блера и дать заключение о перфрингенс-титре (по последнему положительному результату) . Материалы и оборудование Посевы на среде Вильсона — Блера, сделанные студентами на занятии 2. Методические указания к выполнению работы. Результат учитывают через 24 ч культивирования при температуре 37°С по образованию колоний черного цвета. Присутствие патогенных клостридий в почве связано с попаданием их в почву с фекалиями человека и животных. Существуют следующие критерии оценки степени загрязнения почвы по титру БГКП и клостридиум-титру: для сильно загрязненных почв коли-титр 0,009 и ниже, клостридиум-титр 0,00009 и ниже; для чистых почв коли-титр 1 и выше, лостридиум-титр 0,01 и выше. САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ Санитарно-микробиологическое исследование пищевых продуктов проводится в плановом порядке или по эпидемическим и эпизоотологическим показаниям. В плановом порядке проводятся исследования на: 1) общее микробное обсеменение; 2) обнаружение санитарно-показательных бактерий, например, БГКП и энтерококков, а также иногда обнаружение патогенных микроорганизмов. По эпидемическим показаниям исследования проводятся на обнаружение патогенных микроорганизмов — возбудителей пищевых отравлений микробной этиологии. Задание 7. Определить общую микробную обсемененность молока или мороженого: сделать посев из разведении продукта на мясопептонный агар (табл. 43). Материалы и оборудование. Пробирка с молоком или мороженым пробирки со стерильной водой по 9 мл, пипетки на 1—2 мл, стерильные чашки Петри, пробирки с мясопептонным агаром по 10 мл, водяная баня, термометр. Методические указания к выполнению работы. Общее микробное обсеменение пищевого продукта определяется путем высева из 10-кратных разведении продукта на мясопептонный агар, последующего подращивания при температуре 37°С и перерасчета по выросшим колониям количества мезофильных микробов — аэробов и факультативных анаэробов на 1 г продукта. Ход определения сводится к приготовлению разведении пробы продукта в соотношении 1:10, 1:100, 1:1000 и высеву по 1 мл из каждого разведения в чашки Петри, которые заливают 10 мл расплавленного и охлажденного (до 45°С) мясопептонного агара. Посевы инкубируют 48 ч при температуре 37° С. Таблица 8 Определение микробного числа пастеризованного молока
Задание 8. Определить коли-титр молока (I этап): посеять исследуемый продукт в пробирки со средой Кесслера (табл. 9). Материалы и оборудование. Пробирка с молоком, пробирка с молоком, разведенным в 10 раз, 6 пробирок со средой Кесслера по 5 мл, пипетки на 1 —2 мл. Методические указания к выполнению работы. Для определения коли-титра молока и молочных продуктов используют посевы различных объемов или развода ний проб продукта в среды Кесслера (в ряде случае используют среду Хейфеца). БГКП при росте на сред Кесслера расщепляют глюкозу, о чем судят по образованию газа в поплавке, при росте на среде Хейфеца происходит исходит изменение цвета из красно-фиолетового на желтый впоследствии - до салатово-зеленого в результате появления кислых продуктов. Таблица 9 Определение коли-титра пастеризованного молока
* Знаком + отмечают помутнение и образование газа в среде Кесслера. Методические указания к выполнению работы. Молоко, сливки, мороженое, пахту, простоквашу, ряженку, йогурт, кефир засевают по 1 мл в 3 пробирки со средой Кесслера и по 1 мл из разведения 1:10 (0,1 мл продукта) также в 3 пробирки со средой Кесслера. Наличие в среде Кесслера генцианового фиолетового препятствует росту молочно-кислых бактерий. Посевы выдерживают сутки при температуре 43°С. Задание 9. Провести бактериоскопическое исследование сметаны и кефира: приготовить мазки, окрасить метиленовым синим, микроскопировать, зарисовать. Материалы и оборудование. Пробирки со сметаной и кефиром, предметные стекла, флакон с метиленовым синим. Методические указания к выполнению работы. Общее микробное обсеменение не определяют в кисломолочных продуктах — твороге, сметане, кефире и других, содержащих специфическую микрофлору (молочно-кислые стрептококки, ацидофильные палочки). В этих продуктах определяют микробный пейзаж молочно-кислой флоры бактериоскопическим исследованием неразведенных продуктов, окрашенных метиленовым синим. Присутствие молочной плесени, дрожжей и отсутствие молочно-кислых стрептококков указывает на неудовлетворительное приготовление, нарушение технологии или неправильное хранение продукта. Исключение составляет кефир и кумыс, где обязательно присутствуют в поле зрения 2—5 дрожжевых клеток, поскольку эти продукты — результат комбинированного брожения — молочно-кислого и спиртового. Оценку качества молока и молочных продуктов следует давать согласно следующим бактериологическим нормативам (табл.10). Таблица 10 Ориентировочные санитарно-бактериологические нормативы для молока и молочных продуктов
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ПИЩЕВЫХ ТОКСИКОИНФЕКЦИЙ Задание 10. Провести лабораторную диагностику пищевых бактериальных отравлений (I этап): посеять мясо или фарш на селенитовый бульон, на среду Эндо, висмут-сульфитную среду, в конденсат скошенного агара (посев по Щукевичу), в среду Китта— Тароцци, (табл 11). Начать оформление протокола исследования. Материалы и оборудование. Чашка Петри с фаршем — 5 г, стерильная фарфоровая ступка, пробирка с 2 г стерильного песка, колба с 50 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия, колба с селенитовой средой—40 мл, пипетки на 1—2 мл и 5— 10 мл, чашка Петри со средой Эндо, чашка с висмут-сульфитной средой, пробирка со свежескошенным мясопептонным агаром, со средой Китта-Тароцци, пробирка с б,5°С солевым бульоном, чашки Петри с кровяным, молочно-солевым и желточно-солевым агарами. Т а б л и ц а 46 Схема исследования пищевых продуктов при бактериальных отравлениях
П р и м е ч а н и е. Последующее выделение и идентификация чистой культы ведутся по обычной схеме. Методические указания к выполнению работы. Обнаружение с а л ь м о н е л л в мясе и колбасных изделиях проводиться из объема 5 г, взятого из нескольких кусочков внутренней и наружной проб (части) полуфабриката или готового кулинарного изделия. Пробу измельчают с помощью гомогенизатора или в стерильной фарфоровой ступке с 2—3 г стерильного песка, приливая 45 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия: в 1 мл исследуемой взвеси содержится 0.1 г продукта. 10 мл исследуемой взвеси вносят в колбу с 40 мл обогатительной среды. Одновременно высевают по 0,1 мл на среду Эндо и висмут-сульфитный агар. Посевы инкубируют при 37°С 18—24 ч. При определении б а к т е р и й р о д а P r o t e u s исследуемую взвесь продукта в количестве 0,5 мл вносят в конденсат свежескошенного мясопептонного агара (разлитого по широким пробиркам), не затрагивая скошеиной поверхности среды. Штатив с пробиркам помещают в термостат на 18—24 ч при 37С. При определении к л о с т р и д и й по 0,1 мл исследуемой взвеси продукта вносят стерильно на дно пробирки с прогретой при 100°С в течение 25 минут и охлажденное до 40°С средой Китта — Тароцци и в пробирку с той же средой, которую после посева нагревают на водяной бане течение 20 мин при 80°С с целъю теплоктавации спор и уничтожения вегетативных клеток неспорообразующих бактерий. Посевы культивируют при 37°С до 5 суток, ежедневно просматривая появление роста клостридий, что сопровождается помутнением среды и выделением газа. Оформление альбома. Записать результаты в табл. 39, 40, 41 и заключение в табл. 38, 39, 40. Закончить протокол исследования на наличие сальмонелл в воде. Записать табл. 43, 44. Составить протокол «Исследование фарша для обнаружения бактерий, вызвавших пищевое отравление» (см. табл. 46). Зарисовать: 1) микрофлору кефира, 2) микрофлору сметаны, 3) энтерококки. Занятие 4. Санитарно-микробиологическое исследование почвы (окончание), пищевых продуктов (продолжение). Лабораторная диагностика пищевых бактериальных отравлений (продолжение), бактериологический контроль качества дезинфекции. Цель занятия. Провести заключительное санитарно-бактериологическое исследование почвы. Освоить методы санитарно-бактериологического исследования пищевых продуктов и лабораторную диагностику пищевых бактериальных отравлений. Отработать методику определения качества проведенной дезинфекции; научиться составлять документацию и брать пробы для бактериологического анализа. Отработать методику бактериологического контроля качества дезинфекции. Содержание занятия: 1) определение коли-титра почвы бродильным методом (окончание); 2) определение общей микробной обсемененности молока (окончание); 3) определение коли-титра молока (продолжение); 4) исследование пищевых продуктов при токсикоинфекциях (продолжение); 5) взятие проб и посев их на среды для определения качества дезинфекции, определения качества дезинфекции. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||