Главная страница
Навигация по странице:

  • 4 часа Цель занятия.

  • Вопросы для самоподготовки.

  • САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОЗДУХА

  • Материалы и оборудование.

  • Таблица 1 Санитарно-бактерио логическое исследование воз­духа

  • САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОДЫ

  • Материалы и оборудование

  • Методические указания к выполнению работы.

  • Таблица 2 Определение микробного числа воды

  • Таблица 3 Определение коли-титра воды

  • Первый день исследования

  • Санитарная микробиология. Министерство сельского хозяйства и продовольствия российской федерации


    Скачать 248 Kb.
    НазваниеМинистерство сельского хозяйства и продовольствия российской федерации
    АнкорСанитарная микробиология.doc
    Дата11.01.2018
    Размер248 Kb.
    Формат файлаdoc
    Имя файлаСанитарная микробиология.doc
    ТипМетодические указания
    #13871
    КатегорияБиология. Ветеринария. Сельское хозяйство
    страница1 из 4
      1   2   3   4

    МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ

    РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ




    УЛЬЯНОВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ


    ФАКУЛЬТЕТ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ

    кафедра микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и

    ветеринарно-санитарной экспертизы


    Золотухин С.Н., Васильев Д.А.


    МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
    к проведению лабораторно-практических занятий

    по САНИТАРНОЙ МИКРОБИОЛОГИИ

    для студентов факультета ветеринарной медицины

    (специальность 310800 – ветеринария)

    специализация – ветеринарный врач-бактериолог

    Ульяновск -2000

    Значение раздела. Усвоение данного раздела обеспечивает приобретение студентами знаний, необходимых при изу­чении последующих дисциплин санитарно-гигиенического профиля, умений пользоваться санитарно-бактериологическими методами и показателями ГОСТ в практике ветеринарных лабораторий и клиник для оценки эпизоотологической и эпидемиологической ситуаций.

    Цель раздела. Усвоить знания о предмете, задачах и значении санитарной микробиологии, об условно-пато­генных и санитарно-показательных микроорганизмах, принципах и методах санитарно-микробиологического ис­следования воздуха, воды, почвы, предметов обихода, пищевых продуктов; знать возбудителей пищевых токсикоинфекций и токсикозов, их биологические свойства, лабораторную диагностику бактериальных от­равлений людей и кормовых отравлений животных микробного происхождения. Изучить методы санитарно-бактериологического иссле­дования воздуха, воды, почвы, пищевых продуктов, кормов, смывов с предметов для оценки микробиологического моноторинга в животноводческих помещениях, оценки качества дезинфекции.

    Занятие 1.

    Тема: Санитарно-микробиологическое исследование

    воздуха и воды.

    4 часа

    Цель занятия. Овладеть методами санитарно-бактерио­логического исследования воздуха, воды.
    Содержание занятия: 1) определение общей микробной загрязненности воздуха; 2) определение микробного числа воды; 3) определение коли-титра воды бродильным мето­дом; 4) определение коли-индекса воды с помощью мем­бранных фильтров; 5) определение индекса энтерококка воды; 6) изучение методов исследования воды на наличие сальмонелл.
    Вопросы для самоподготовки. Роль, значение и задачи санитарной микробиологии. Учение о санитарно-показательных микроорганизмах. Микрофлора воздуха и методы микробиологического исследования (атмосферный воздух и воздух закрытых помещений). Санитарно-показательные микроорганизмы воздуха. Микрофлора воды и методы ее бактериологического исследования. Санитарно-показа­тельные микроорганизмы воды. Методы индикации пато­генных микроорганизмов.

    САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОЗДУХА

    Задание 1. Определить микробное число воздуха: седиментационным методом (по Коху) — посев воздуха на мясопептонный агар и аспирационным методом (с по­мощью аппарата Кротова) — посев воздуха на мясопеп­тонный агар, кровяной и молочно-желточно-солевой агар.
    Материалы и оборудование. Чашки Петри с мясопептонным ага­ром, кровяным и молочно-желточно-солевым агаром, аппа­рат Кротова.
    Методические указания к выполнению работы

    Загрязненность воздуха закрытых помещений микроба­ми определяется по двум показателям: 1) общему коли­честву микробов, содержащихся в 1 м3 воздуха; 2) каче­ственному составу микрофлоры воздуха, определяемому по выявлению санитарно-показательных бактерий (золоти­стых стафилококков и стрептококков) и спорообразующих бактерий. Обнаружение санитарно-показательных бактерий в воздухе свидетельствует о санитарно-эпизоотологическом и эпидемиологическом не­благополучии, так как они выделяются от больных или бактерионосителей. Появление спорообразующих — пока­затель загрязненности воздуха микроорганизмами почвы.

    Седиментационный метод (по Коху) — оседание мик­робов на поверхность твердой питательной среды под дей­ствием силы тяжести. Для исследования воздуха поме­щений чашки Петри со средой открывают на 5—10 мин (для определения общей обсемененности воздуха) и на 40 мин (для учета кокковой флоры). Осевшие из воздуха микробы в термостате при 37С в течение 24 часов и затем при комнатной температуре (сутки). О степени загрязненности воздуха судят по количеству выросших колонии, которые подсчитывают, затем определяют количество микробов в 1 м3 воздуха (микробное число) по формуле Омелянского:

    где Х — количество микробов в 1 м3 (1000 л) воздуха; а — количество выросших колоний в чашках; в — площадь чашки; Т —время, в течение которого чашка была откры­та; 5 — время по правилу Омелянского; 10 — объем воз­духа в литрах (1 м3). Правилом Омелянского подразумеваеся, что на поверхности агара в чашке Петри с площадью 100 см2 за 5 мин из воздуха оседает такое количество микробов, которое находится в его 10 л.

    Аспирационный метод более точный по сравнению с предыдущим и используется для исследования как воздуха помещений, так и атмосферного воздуха.

    Для определения общей бактериальной обсемененности воздуха закрытых помещений используют две чашки Пет­ри с мясопептонным агаром и пропускают через аппарат по 100 л воздуха. После подращивания посевов в течение 48 ч при температуре 37°С подсчитывают количество выросших колоний на обеих чашках, вычисляют среднее арифметическое и делают пересчет на количество микро­бов в 1 м3 воздуха.

    При определении санитарно-показательных бактерий используют две чашки Петри с 3—5% кровяным агаром (определение - и -гемолитических стрептококков), а также две чашки Петри с молочно-желточно-солевой сре­дой (обнаружение золотистых стафилококков). При этом через аппарат пропускают по 250 л воздуха. Через сутки подращивания в термостате и еще одни сутки сохранения при комнатной температуре производят макро- и микро­скопическое исследование колоний, определяют патогенность бактерий по общепринятым тестам.

    Состав микрофлоры воздуха оценивают с учетом спорообразующих анаэробов. С этой целью посев воздуха в объеме 200—300 л производят на чашку с железосульфитной средой (среда Вильсона — Блера) и заливают ее 15 мл расплавленного и охлажденного до 45°С мясопептонного агара для создания анаэробных условий. После суток подращивания в термостате подсчитывают количе­ство черных колоний и делают перерасчет на 1 м3 иссле­дуемого воздуха (табл. 1).

    Таблица 1

    Санитарно-бактерио логическое исследование воз­духа


    Метод исследования

    Число микробов в I м3 воздуха (пигментных, споровых, плесневых грибов)

    Число золотистых стафилококков и стрептококков в1 м3 воздуха

    Посев по методу Коха








    Посев с помощью аппарата Кротова








    САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОДЫ

    Исследование воды проводится по трем показателям: 1) микробное число воды; 2) коли-индекс и коли-титр; 3) обнаружение патогенных бактерий кишечной группы.

    Задание 2.Определить микробное число воды: произ­вести взятие проб воды и сделать посев разведений исследуемой воды на мясопептонный агар (табл. 2).

    Материалы и оборудование. Колба с исследуемой водой — 50 мл, пробирки со стерильной водой по 9 мл, стерильные чашки Петри, стерильные пипетки на 1—2 мл, пробирки с мясо-пептонным агаром по 10 мл, водяная баня, термометр.
    Методические указания к выполнению работы.

    Из открытых водоемов про­бы воды отбирают с глубины 10—15 см от поверхности и на расстоянии 10—15 см от дна. Из водопровода воду берут в стерильные флаконы с при­тертой пробкой емкостью 0,5 л, а с глубины водоема — привязанным к шесту батометром или стеклянным сосудом с притертой пробкой, к ко­торой прикреплен шнур. Водопроводную воду наливают после предварительного обжигания крана и стекания первых порций воды из него в течение 10—15 мин. Воду из колодца следует брать утром до начала пользования им или через 10—12 ч после прекращения пользования. Хлорированную воду перед исследованием нейтрализуют серноватистокислым натрием из расчета 10 мл на 1 л воды. Промежуток времени с момента взятия пробы до бактериологического исследо­вания не должен превышать 2 ч (при температуре 1—5°С можно хранить до 6 ч).

    Микробное число воды — количество микробов в 1 мл используемой воды — определяют путем высева воды на мясопептонный агар.

    Исследуемую воду разводят в 10, 100 и 1000 раз. В пробирку с 9 мл стерильной воды вносят 1 мл исследуемой воды (разведение 1:10), затем после перемешивания другой пипеткой переносят в аналогичную пробирку 1 мл разведенной воды (разведение 1 : 100) и т. д. По 1 мл полученных разведении воды, начиная с большего, переносят в маркированные стерильные чашки Петри и заливают 10 мл расплавленного и охлажденного до 45°С мясопептонного агара. Осторожно кругообраз­ными движениями перемещают по поверхности стола чаш­ку Петри, перемешивая содержимое. Затем чашки Петри с застывшим агаром переворачивают вверх дном и поме­щают на сутки в термостат. При исследовании водопро­водной воды в каждую из двух чашек засевают 1 мл неразведенной воды.
    Таблица 2

    Определение микробного числа воды


    Ингредиенты

    Разведения исследуемой воды

    1:10

    1:100

    1:1000

    Исследуемая вода, мл

    Мясопептонный агар, мл

    Количество выросших колоний

    1,0

    10,0

    1,0

    10,0

    1,0

    10,0

    Результат





    Задание З. Определить коли-титр воды бродильным ме­тодом (I этап): сделать посевы исследуемой воды на глюкозопептонную среду (табл. 3).
    Таблица 3

    Определение коли-титра воды


    Этапы исследования

    Объем засеваемой воды, мл

    100

    10

    1

    0,1 или 1(1:10)

    0,01 или 1(1:100)

    I. Посев в пробирки с

    глюкозопептонной

    средой» мл
    Результат ( + или - )

    10

    (конц.)



    1

    (конц.)


    10

    (норм.

    конц.)



    10

    (норм.

    конц.)

    10

    (норм.

    конц.)


    2. Высев из глюкозо-пептонной среды

    на среду Эндо
    Результат:

    цвет колоний

    микроскопия

    проба на оксидазу











    3. Высев со среды

    Эндо в глюкозо-

    пептонную среду
    Результат (+ или - )











    Заключение:





    Материалы и оборудование. Колба с исследуемой водой — 50 мл; пробирки с разведенной водой в 10, 100 раз (приготовлен­ные при определении микробного числа воды); пробирки с концентрированной глюкозопептонной средой — одна с 10 мл и одна с 1 мл среды; 3 пробирки, содержащие по 10 мл среды нормальной концентрации; пипетки на 10 мл и на 1—2 мл.

    Методические указания к выполнению работы.

    Сущность метода заключается в посеве определенных объемов исследуемой воды в среде накопления (глюкозо-пептонная или лактозопептонная среда с индикатором и поплавком), последующем культивировании посевов и высе­ве из забродивших пробирок на среду Эндо. Выросшие на среде Эндо колонии изучают с целью определения БКГП. Затем определяют по расчетным таблицам коли-титр и коли-индекс.

    Для анализа отбирают различные объемы воды, регла­ментированные ГОСТом 18963-73.

    Первый день исследования. В случае исследования во­ды на этапах очистки и обеззараживания производят посев 100; 10; 1; 0,1; 0,01 мл воды соответственно во флаконы с 10 и 1 мл концентрированной среды накопления и 10, 10 и 10 мл среды накопления нормальной концентра­ции. При исследовании питьевой водопроводной воды производят посев 100, 100, 100 и 10, 10, 10 мл воды соответственно во флаконы с 10 и 1 мл концентрированной среды накопления и по 1, 1, 1 мл в 10 мл среды накопле­ния нормальной концентрации. Культивирование посевов производят при температуре 37° в течение 24 ч.

    Задание 4.Определить коли-индекс воды методом мем­бранных фильтров, используя демонстрацию.

    Материалы и оборудование. Чашки Петри со средой Эндо с вы­росшими на фильтре колониями бактерий группы кишеч­ной палочки.
    Методические указания к выполнению работы.

    Для анализа отбирают различные объемы воды, рег­ламентированные ГОСТ 18963-73 в зависимости от пред­полагаемого количества БГКП в пробе воды. Исследуе­мую воду фильтруют в фильтровальном аппарате, напри­мер в аппарате Зейтца через мембранные фильтры № 2 или № 3, а также планктонные фильтры № 6. Фильтро­вальный аппарат стерилизуют фламбированием после об­работки ватным тампоном, смоченным спиртом. Подго­товленный фильтр помещают на стерильный столик филь­тровального аппарата и закрепляют верхней частью ап­парата (воронкой, цилиндром). Вода фильтруется с по­мощью водоструйного насоса или аппарата Комовского. После фильтрования фильтр стерильным пинцетом пере­носят, не переворачивая, на среду Эндо, в чашку Петри. Фильтр должен плотно прилегать к поверхности питатель­ной среды. На дне чашки Петри ставят номер пробы, объ­ем профильтрованной воды, дату посева и помещают в тер­мостат при температуре 37°С на сутки. За это время из осевших на фильтре бактерий образуются колонии. Учи­тывают колонии, характерные для кишечных палочек (темно-красные с металлическим блеском и без него, ро­зовые прозрачные). Из нескольких колоний различных оттенков готовят мазки и окрашивают их по Граму. В слу­чае присутствия нетипичных кишечных палочек (короткие или длинные, полиморфные) дополнительно проводят оксидазный тест, который позволяет отличить бактерии семейства Enterobacteriacae от других грамотрицательных бактерий. С этой целью мембранный фильтр с колониями бактерий помещают на больший по размеру диск фильтро­вальной бумаги, смоченный реактивом — раствором фе-нилендиамина. Результат реакции учитывают через 2—4 мин. колонии бактерий, не относящиеся к семейству Еntегоbасtеriасеае, дают положительную реакцию на оксидазу в виде посинения колоний или появления синего ободка. Колонии, не изменившие окраску и состоящие из грамотрицательных палочек, относят к колониям БГКП, так как у них отсутствует оксидазная активность.

    Результат анализа выражают в виде коли-индекса, ко­торый высчитывают, умножая количество выросших на фильтре колоний БГКП на 1000 и делят на объем про­фильтрованной воды. Если в 1 л питьевой воды содержит­ся более 3 БГКП, а в 1 л воды бассейнов — более 10, то это свидетельствует о фекальном загрязнении, превы­шающем норму.

    Задание 5. Определить в воде индекс энтерококка (1-й этап): сделать посевы исследуемой воды на щелочную элективную среду (табл. 4).
    Таблица 4

    Определение индекса энтерококка в воде


    Этапы исследования



    Объем засеваемой воды, мл

    1



    0.1

    1(1:10)

    0,01

    1 (1:100)

    I. Щелочная элективная среда, мл
    Результат (+ или -) + помут­нение и изменение цвета среды с синего на желтый

    5

    5

    5

    2. Высев на секторы молочно-ингибиторной среды, микро­скопия

    колоний, окраска по Граму










    Заключение





      1   2   3   4


    написать администратору сайта