Практическая_работа_по_микробиологии_готовая. Практическая работа Знакомство с микробиологической лабораторией
 Скачать 0.83 Mb.
|
|
Практическая работа 1. Знакомство с микробиологической лабораторией Задание 1 Выпишите классификацию микроорганизмов по степени их биологической опасности. 1. Возбудители чумы. 2. Возбудители высоконтагиозных эпидемических заболеваний (холера, бруцеллез, туляремия, сибирская язва, лептоспироз) 3. Возбудители эндемических бактериальных инфекций (брюшной тиф, паратифы А и В, дизентерия, туберкулез, дифтерия, коклюш, менингит, гонорея, трахома, лепра и др.) 4. Сальмонеллы, протей, эшерихии, клебсиеллы, стафилококки, стрептококки, возбудители газовой гангрены и др. Перечислите зоны и помещения бактериологической лаборатории. «Чистая» зона лаборатории включает: 1Комнату для верхней одежды. 2.Помещение для подготовительных работ (препараторская, моечная для приготовления и розлива питательных сред и др.) 3.Стерилизационная. 4.Комната с холодильником для хранения питательных сред и диагностических препаратов. 5.Комната для отдыха и приема пищи. 6.Комната для работы с документацией. 7.Подсобные помещения. 8.Туалет. В «заразной» зоне размещают: 1.Комнату для приема и регистрации материала, поступающего на исследование. 2.Боксы. 3.Комнаты для проведения бактериологических исследований. 4.Комнаты для проведения серологических исследований. 5.Помещение для люминисцентной микроскопии. Запишите и выучите правила, которые необходимо выполнять при проведении микробиологических исследований. 1. Работа в лаборатории ведется исключительно в халатах и сменной обуви или бахилах. 2. Верхняя одежда и сумки не должны находиться в лаборатории. 3.Запрещается выходить за пределы лаборатории в халатах или надевать верхнее плате на халат. 3. Запрещается принимать пищу и пить воду в лаборатории. 4. Работу с биологическим материалом проводить только предварительно обработанным инструментом. 5. При случайном попадании биологического материала на стол, руки или другие поверхности необходимо сразу же оповестить об этом преподавателя и провести обработку загрязненной поверхности дезинфицирующим раствором. 6. После работы необходимо тщательно вымыть руки с использованием дезинфекционных средств. 7. Рабочее место следует поддерживать в чистоте, не загромождать его посудой и лишними вещами. 8. Лабораторную работу необходимо проводить в точном соответствии с описанием в методических указаниях. 9. Для проведения работы пользоваться только чистой, сухой лабораторной посудой; для отбора объемов реактивов нужно иметь мерную посуду (пипетки, бюретки, мензурку, мерный цилиндр или мерный стакан); нельзя выливать избыток налитого в пробирку реактива обратно в емкость. 10.Весь материал, поступающий в лабораторию, должен рассматриваться как инфицированный. Выпишите методы микробиологического исследования. Различают следующие основные методы: микроскопический, микробиологический, экспериментальный, иммунологический. 1.Микроскопический - изучение микробов в окрашенном и неокрашенном (нативном) состоянии с помощью различных типов микроскопов. 2. Микробиологический - (бактериологический, культурный) - посев материала на питательные среды для выделения чистой культуры и определения ее вида (идентификации). 3. Экспериментальный (биологический) - заражение микробами лабораторных животных. 4. Иммунологический (в диагностике инфекций) - изучение ответных специфических реакций микроорганизма на контакт с микробами. Задание 2 Решение ситуационной задач оформить в таблице. 1. Микробиологическая лаборатория при проверке комиссией получила неудовлетворительную оценку. В лаборатории два входа. В ней чисто и уютно, на подоконниках живые цветы, все сотрудники были в халатах и тряпичных тапочках. Аптечка экстренной медицинской помощи была полностью укомплектована. Стены лаборатории оклеены красивыми обоями. За что лаборатория получила «двойку»?
Практическая работа 2. Микроскопические методы исследования Задание 1 Выпишите микроскопические методы исследования микроорганизмов. Опишите способы окраски препаратов. Микроскопические методы исследования основаны на обнаружении и исследовании возбудителя в биологическом материале. Используют светооптическую и электронную микроскопию. Светооптическая микроскопия позволяет изучать объекты размером более 0,2 мкм (бактерии, простейшие, грибы и др.), электронная микроскопия - более мелкие объекты (вирусы, отдельные структуры микроорганизмов). Способ окраски: Клетки микроорганизмов окрашивают главным образом анилиновыми красителями. Различают простые и дифференциальные способы окрашивания микроорганизмов. При простой окраске прокрашивается вся клетка, так что становятся хорошо видны ее форма и размеры. Дифференциальная окраска предполагает окрашивание не всей клетки, а определенных ее структур. С помощью дифференциальной окраски выявляют некоторые клеточные структуры и запасные вещества. Для простого окрашивания клеток микроорганизмов чаще всего пользуются фуксином, генциановым фиолетовым, метиленовым синим. Для получения более чистых препаратов краситель наливают на мазок, покрытый фильтровальной бумагой. Задание 2  Фото 1. Световой микроскоп Инструктаж: впишите части светового микроскопа Механическая часть: 1……штатив…………………………………………………………………. 2……колонка с микро и макровинтамами……………………………....... 3……тринокулярный тубус………………………………………………... 4……револьвер с обьективами……………………………………………………………… 5……предметный столик…………………………………………………… Оптическая часть: 1……окуляры…………………………………… 2…....объективы………………………………………………………………………… Осветительное устройство: 1……конденсор………………………………………………………………………….. 2…....источник света………………..………………………………………………………. 3…....коллектор……………………………………………………………………….. Задание 3 Инструктаж: определите основные и дополнительные структуры бактериальной клетки  Основные структуры бактериальной клетки: 1…клеточная стенка………………………………………………………………………………. 2…цитоплазматическая мембрана………………………………………………………………. 3…нуклеоид………………………………………………………………………………. 4…мезасома………………………………………………………………………………. 5…рибосома………………………………………………………………………………. Дополнительные структуры бактериальной клетки: 1…капсула………………………………………………………………………….. 2…клеточная стенка…………………………………………………………………………. 3…плазмида…………………………………………………………………………. 4…пили………………………………………………………………………….. 5…жгутик…………………………………………………………………………. Задание 4 Инструктаж: зарисуйте и подпишите варианты расположения спор
Инструктаж: зарисуйте варианты расположения жгутиков
Практическая работа 3. Бактериологические методы исследования Задание 1 Инструктаж: Перечислите фазы роста бактерий 1……лаг-фаза………………………………………………………………...... 2……ускоренного роста………………………………………………............. 3……логарифмического роста……………………………………………….. 4……замедления роста ……………………………………………………….. 5……спинарного роста……………………………………………………….. 6……старения ,гибели………………………………………………………… Задание 2 Инструктаж: перечислите и опишите методы выделения чистой культуры бактерий. 1. Метод разбавлений Пастера. 2. Выделение чистой культуры из одной клетки капельным методом 3. Выделение чистой культуры с помощью микроманипулятора. 4. Метод выделения чистой культуры с помощью твердых сред (метод Коха). 5. Посев в трубочки по методу Виньял-Вейона Задание 3 Классификация питательных сред Инструктаж: заполните таблицу   По составу   простые сложные   По консистенции    твердые полужидкие жидкие  Основные         обогащенные По назначению селективные    накопительные консервирующиедиффиринц.диагностич. Практическая работа 4. Правила отбора и доставки биоматериала в лабораторию Задание 1 Инструктаж: установите соответствие между одной цифрой и одной буквой
Задание 2 Инструктаж: Описать правила взятия биологического материала 1. Вид исследуемого материала должен определяться клинической картиной заболевания и соответствовать локализации и характеру инфекционного процесса. В случае неясности клинической картины, а также при отсутствии очаговой симптоматики для исследования берут кровь, а в некоторых случаях мочу. 2. Всегда собирают достаточное количество материала для детального тщательного исследования). 3. Материал для бак исследования должен забираться по возможности в начальном периоде болезни .При хирургической инфекции, следовательно, материал забирают до вскрытия абсцесса, флегмоны, первичной обработки раны, оперативного лечения. 4. Забор материала должен проводиться по возможности до применения антибиотиков и антисептиков. 5. Для того чтобы избежать ошибок в определении этиологии заболевания, необходимо предупредить возможную контаминацию исследуемого материала нормальной микрофлорой больного и микроорганизмами из окружающей среды. Поэтому забор надо осуществлять в строго асептических условиях. 6. Многие микроорганизмы чувствительны к попаданию в материал антимикробных препаратов, поэтому необходимо исключить контакт с металлами и ватой, особенно искусственной, содержащей свободные жирные кислоты. 7. Материал, полученный от пациента, всегда должен расцениваться как потенциально опасный. 8. Материал необходимо доставить в возможно более короткий срок в лабораторию и начать исследование. При отсутствии возможности быстро доставить его в лабораторию, материал помещают в холодильник при t=4°C или добавляют консервант. 9. Материал, доставляемый в лабораторию для исследования, должен иметь направление, в котором указаны название лечебного учреждения, фамилия, имя, отчество, возраст, адрес больного, дата заболевания, вид клинического материала, день и час его взятия, предполагаемый клинический диагноз, цель и метод исследования. 10. Для сохранности материала в процессе доставки следует оберегать его от действия факторов окружающей среды, таких как: свет, тепло, холод, механические повреждения и др 11. После окончания бактериологических и вирусологических исследований остатки материала считаются опасными и подлежат уничтожению . Задание 3 Инструктаж: перечислить посуду, инструменты и химические реагенты для сбора биологического материала. 1.Вакутейнер – одноразовая стерильная пробирка для сбора крови. 2.Тубсер (тупфер) - стерильная одноразовая пробирка с агаризованной или жидкой транспортировочной средой и зондом–тампоном, вмонтированным в пробку и стерильно упакованным вместе с пробиркой. 3.Транспортировочные питательные среды, специальные плотные с активированным углем (Эймса) и без него, позволяют обеспечить сохранение жизнеспособности микроорганизмов в пробе биоматериала в течение 48 – 72 часов. 4.Допускается использование стерильных стеклянных пробирок, укупоренных газопроницаемой пробкой с вмонтированным зондом-тампоном, приготовленных в лаборатории; 5.Стерильные предметные стекла. 6.Чашки Петри с питательной средой для посевов биологического материала или без среды для сбора волос при грибковых поражениях. 6. Одноразовые стерильные емкости с завинчивающейся крышкой (допускаются стеклянные с газопроницаемой пробкой) - для сбора проб мочи, мокроты, фекалий, бронхо-альвеолярного лаважа, биопсийного (кусочки ткани) материала; 7. Специальные стерильные носоглоточные и урогенитальные зонды-тампоны с осью из алюминия (диаметр оси - 0,9 мм) и маленьким тампоном из хлопка или вискозы на кончике (диаметр тампона - 2,5 мм), вмонтированным в пробку, укупоривающую стерильную одноразовую стеклянную пробирку - для проб из носоглотки на В. pertusis и из уретры у мужчин. Задание 4 Инструктаж: описать оформление сопроводительной документации для биологического материала. 1. Характер (вид)материала. 2. ФИО пациента 3.Возраст пациента 4.Название лечебного учреждения 5.Номер мед.карты стационарного больного 6.Предполагаемый диагноз 7.Результаты предыдущих микробиологических исследований 8.Предшествующая антибактериальная терапия 9.Дата и время взятия материала 10.Цель исследования 12.ФИО врача, направляющего материал для исследования. Практическая работа 5. Методы стерилизации и дезинфекции Задание 1 Инструктаж: используя учебную литературу и лекционный материал запишите определения: Дезинфекция - это комплекс мероприятий, направленных на уничтожение микроорганизмов, способных вызвать инфекционные заболевания. Стерилизация - полное уничтожение микроорганизмов (включая бактерии, грибы,вирусы и прионы) и их спор на различных изделиях, поверхностях и препаратах. Внутрибольничная инфекция – это любое клинически распознаваемое инфекционное заболевание, которое поражает больного в результате его поступления в больницу или обращения в неё за лечебной помощью, или сотрудников больницы вследствие их работы в данном лечебном учреждении вне зависимости от появления симптомов заболевания во время или после пребывания в больнице Антисептика - система мероприятий, направленных на уничтожение микроорганизмов в ране, патологическом очаге, органах и тканях, а также в организме больного в целом, использующая механические и физические методы воздействия, активные химические вещества и биологические факторы. Задание 2 Инструктаж: решите задачу Сколько необходимо 10% раствора хлорной извести и воды для приготовления 5 литров 3% раствора хлорной извести. Ответ: 1,5 литра хлорной извести и 3,5 литров воды. Задание 3 Инструктаж: используя лекционный материал и учебную литературу, запишите методы стерилизации и дайте краткую характеристику каждому из них: Термическая: паровая и воздушная (сухожаровая) Химическая: газовая или химическими растворами (стерилянтами) Плазменная (плазмой перекиси водорода) Радиационная стерилизация — применяется в промышленном варианте Метод мембранных фильтров — применяется для получения небольшого количества стерильных растворов, качество которых может резко ухудшиться при действии других методов стерилизации (бактериофаг, селективные питательные среды, антибиотики) Задание 4 Инструктаж: перечислите способы проведения контроля качества предстерилизационной обработки инструментов от моющего раствора и крови. Контроль качества предстерилизационной очистки проводится постановкой следующих проб: 1.амидопириновой – определяет качество обработки инструментов от крови 2.азопирамовой – на остатки крови, на хлорсодержащие окислители, ржавчину, лекарственные средства Задание 5 Инструктаж: перечислите виды антисептиков по химическому составу. 1.Хлорсодержащие 2.Йодсодержащие 3.На основе четвертичных аммониевых солей 4.Кислотосодержащие 5.На основе перекиси водорода 6.Спиртосодержащие Практическая работа 6. Определение чувствительности к антибиотикам Задание 1 Подготовьте ответы на вопросы. 1. Антибиотики- это химические вещества, вырабатываемые грибами, актиномицетами и бактериями, обладающие способностью избирательно подавлять рост и размножение микроорганизмов, простейших, грибов, некоторых вирусов и задерживать рост злокачественных опухолей. История открытия и изучения. В 1963 году специалист по этноботанике Энрике Облитас Поблете дал описание применению плесени индейскими знахарями в XV—XVI веках. В начале 1870-х годов исследованием плесени одновременно занимались медики Алексей Герасимович Полотебнов и Вячеслав Авксентьевич Манассеин, который, изучив грибок Penicillium glaucum, . В 1896 году итальянский врач и микробиолог Бартомелео Гозио выделил из Penicillium микофеноловую кислоту, которая была активна против возбудителя сибирской язвы. Пенициллин был обнаружен в 1897 году французским военным врачом Эрнестом Дюшеном. В 1904 году русский учёный М. Г. Тартаковский сообщил, что вещество, выделяемое зелёной плесенью, подавляет развитие возбудителя куриной холеры. В 1913 году американские учёные Карл Альсберг и Отис Фишер Блек получили из Penicillium puberulum токсичную субстанцию, обладающую противомикробными свойствами (в 1936 году, когда установили её химическую структуру, выяснилось, что это была пеницилловая кислота). В 1928 году Александр Флеминг выделил первый антибиотик. Он проводил рядовой эксперимент в ходе исследования болезнетворных бактерий. Вырастив колонии стафилококков, он обнаружил, что некоторые из них заражены обыкновенной плесенью Penicillium, которая растёт на лежалом хлебе, делая его зелёным. Вокруг каждой колонии плесени была область, в которой бактерии отсутствовали. Флеминг сделал вывод, что плесень вырабатывает вещество, убивающее бактерии, которое он назвал «пенициллином».Дело в том, что обнаруженное вещество оказалось очень нестойким, оно разрушалось даже при кратковременном хранении, особенно в кислой среде. Только в 1938 году двум учёным из Оксфордского университета, Говарду Флори и Эрнсту Чейну, удалось решить проблему устойчивости, получив соль пенициллиновой кислоты. В 1945 году Флемингу, Флори и Чейну за их работу была присуждена Нобелевская премия. В СССР первый советский антибактериальный препарат под названием «Крустозин» был получен советским микробиологом Зинаидой Ермольевой в 1942 году. В 2017 году было объявлено о синтезе модифицированного ариломицина , на основе которого возможно создать принципиально новый класс антибиотиков, эффективно воздействующих на грамотрицательные бактерии Механизм и спектр действия антибиотиков. Нарушение синтеза белка: ингибирование активации и переноса аминокислот, функций рибосом (стрептомицин, тетрациклин, пуромицин). Подавление синтеза нуклеиновых кислот: связывание с ДНК и препятствование продвижению РНК-полимеразы (актидин), сшивание цепей ДНК, что вызывает невозможность её расплетания (рубомицин), ингибирование ферментов. Нарушение синтеза клеточной стенки посредством ингибирования синтеза пептидогликана (пенициллин, цефалоспорин, монобактамы), образования димеров и их переноса к растущим цепям пептидогликана (ванкомицин, флавомицин) или синтеза хитина (никкомицин, туникамицин). Антибиотики, действующие по подобному механизму, обладают бактерицидным действием, не убивают покоящиеся клетки и клетки, лишённые клеточной стенки (L-формы бактерий). Нарушение функционирования мембран: нарушение целостности мембраны, образование ионных каналов, связывание ионов в комплексы, растворимые в липидах, и их транспортировка. Подобным образом действуют нистатин, грамицидины, полимиксины. Нарушение синтеза пуринов и пиримидинов (азасерин, саркомицин). Ингибирование работы дыхательных ферментов (антимицины, олигомицины, ауровертин). 2. Особенности получения антибиотиков. Процесс получения антибиотика включает в себя следующие основные стадии: 1. получение соответствующего штамма -- продуцента антибиотика, пригодного для промышленного производства; 2. биосинтез антибиотика; 3. выделение и очистка антибиотика; 4. концентрирование, стабилизация антибиотика и получение готового продукта. Задание 2 Инструкция: постройте схемы классификации антибиотиков по источнику получения и по механизму антимикробного действия. По источнику получения:
По механизму действия:
Задание 3 Инструкция: перечислите и опишите методы определения чувствительности бактерий к антибактериальным препаратам. 1. Диффузионные методы -диски с антибиотиками -Е-тесты 2. Методы разведения -разведение в жидкой питательной среде -разведение в агаре 3.Ускоренные методы Задание 4 Инструктаж: решите ситуационные задачи Задача 1 В лабораторию поступили испражнения от больного с подозрением на дизентерию. Задания: Перечислите микроорганизмы, которые могут явиться причиной данной инфекции. Возбудитель инфекции – бактерия шигелла. Способны вызвать дизентерию у человека :Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Shigella boydii и Shigella sonnei. Назовите метод лабораторной диагностики, который необходимо применить. Клинический материал: испражнения, ректальный мазок. Методы: 1.Бактериологический(культуральный метод)-основной. 2.Серологический (латексагглютинация, ИФА, РСК, РНГА, развернутая реакция агглютинации- "дизентирийный Видаль). Задача 2 В бактериологическую лабораторию поступил материал (кусочки некротизированной ткани, отделяемое раны) от больного с диагнозом «газовая гангрена». Задания: Назовите микробы, которые вызывают это заболевание. Заболевание вызывается преимущественно бактериями рода клостридий, которые обитают в почве и уличной пыли Основные возбудители: Clostridium perfringens (90 % случаев) Clostridium septicum Clostridium histolyticum Clostridium novyi Clostridium fallax Clostridium bifermentans Clostridium sordellii Назовите особенности культивирования микробов. Бактерии/грибы- культируются на питательных средах. 1. Обычные (простые ) среды -пригодны для культирования многих видов патогенных и не патогенных бактерий. 2.Дифферинциальные среды-позволяют различать бактерии разных видов и родов по их культурным и биохимическим свойствам. 3.Элективные и среды обогащения- благоприятствующие размножению бактерий и подавляющие рост других микробов. 4.Специальные среды- наиболее оптимальные для выращивания бактерий ,не размножающихся на простых средах. Практическая работа 7. Организация профилактических и противоэпидемических мероприятий Задание 1 Инструктаж: дайте определение, используя учебные пособия Инфекционный процесс – это процесс взаимодействия микро- и макроорганизма в определенных условиях среды. Входные ворота инфекции – это место проникновения микробов в макроорганизм. Патогенность – это способность паразитич. микроорганизма вызывать инфекционный (инвазионный) процесс у хозяина, т. е. проникать в его организм, размножаться в нём, оказывать на него повреждающее действие, образовывая экзо - и эндотоксины, обладающие высокой активностью по отношению к организму хозяина. Вирулентность – это степень способности данного инфекционного агента (штамма микроорганизма или вируса) вызывать заболевание или гибель организма. Эпидемиологический процесс – это процесс возникновения и распространения инфекционных болезней среди людей. Задание 2 Инструктаж: схематически зарисуйте и дайте объяснение фазам механизма передачи возбудителя инфекции     1…выведение возбудителя из зараженного объекта ……………………… 2…пребывание возбудителя во внешней среде…………………………… 3....внедрение возбудителя в восприимчивый организм………………… Задание 3 Инструктаж: заполните таблицу: Возбудители бактериальных инфекций
Практическая работа 8. Применение иммунологических реакций в медицине Задание 1 Инструктаж: дайте определение Иммунитет –невосприимчивость организма к различным инфекционным агентам, а так же продуктам их жизнидеятельности, веществам и тканям, которые обладают чужеродными ангетивными свойствами. Вакцины –антигенные препараты, полученные из возбудителей или их структурных аналогов, которые используют для создания искусственного активного приобретенного иммунитета. Иммунологическая память – это способность иммунной системы быстро и целенаправленно распознавать антиген, с которым организм ранее сталкивался, и инициировать соответствующий иммунный ответ. Иммунологическая толерантность –это состояние невосприимчивости иммунной системы к веществам или тканям, которые способны вызывать иммунный ответ в данном организме. Иммунный статус – это комплексный показатель состояния иммунной системы, это количественная и качественная характеристика состояния функциональной активности органов иммунной системы и некоторых неспецифических механизмов противомикробной защиты. Иммунодефицитные состояния - клинико-лабораторный синдром, возникающий вследствие структурных и функциональных дефектов системы иммунитета и проявляющийся признаками нарушения противоинфекционной защиты, аллергическими, аутоиммунными или лимфопролиферативными заболеваниями, а также повышенной частотой нарушения противоопухолевой защиты. Интерферон –это группа биологически активных белков или гликопротеидов, синтезируемых клеткой в процессе защитной реакции на чужеродные агенты (вирусная инфекция, антигенное и митогенное воздействие). Антигены – любые соединения, которые при контакте с системой иммунитета вызывают образование специфических антител и/или Т-клеточных рецепторов. Антитела – белки, которые синтезируются под влиянием антигена и спецефически с ним реагируют. Задание 2 Инструктаж: перечислите Рис.1 Центральные и периферические органы иммунной системы  1.Центральные органы иммунной системы:…красный костный мозг, тимус 2.Периферические органы иммунной системы: селезенка, лимфатические узлы. Задание 3 Инструктаж: перечислите Стадии фагоцитоза 1…хемотаксис…………………………………………………….. 2…адгезия…………………………………………………………. 3…поглощение……………………………………….................... 4…гибель………………………………………………………….. Классы интерферонов: 1…α -интерферон (лейкоцитарный)…………………….......... 2…β -интерферон (фибробластный) ………………………… 3…γ - интерферон (иммунный).……………………………….. Антигены микробов: 1…простые и сложные белки……………………………………… 2…липополисахариды……………………………………………… 3…полисахариды……………………………………………………. Задание 4 Инструктаж: установите соответствие между типом аллергической реакции и её клиническим проявлением
Задание 5 Инструктаж: перечислите Классы иммуноглобулинов организма человека 1…IgG………………………………………………………………………………… 2…IgM………………………………………………………………………………… 3…IgE………………………………………………………………………………… 4…IgA………………………………………………………………………………… 5…IgD………………………………………………………………………………… |
