Реферативный сборник фгунгнцвб вектор
 Скачать 368.84 Kb.
|
|
. На основе этих данных мы полагаем, что потеря регуляторных генов вызывает повышение вирулентности видов риккетсий у клещей и млекопитающих. Мы также полагаем, что вирулентность видов Rickettsia связана, главным образом, с потерей генов . Последовательность генома была депонирована в GenBank под инвентарным номером [GenBank: NZ_AAUY01000001]. 2010.6.0757. Последовательностьгеномаэндосимбионта Rickettsia peacockii и сравнениесвирулентной Rickettsia rickettsii: определениефактороввирулентности. PLoS One. 2009 Dec 21;4(12):e8361 Genome sequence of the endosymbiont Rickettsia peacockii and comparison with virulent Rickettsia rickettsii: identification of virulence factors. Felsheim R.F., Kurtti T.J., Munderloh U.G. Rickettsia peacockii, также известная как агент из Ист-Сайда (East Side Agent), представляет собой непатогенную облигатную внутриклеточную бактерию , обнаруживаемую как эндосимбионт у клещей Dermacentor andersoni на западе США и Канады . Ее наличие у клещей коррелирует со сниженной распространенностью Rickettsia rickettsii, возбудителя пятнистой лихорадки Скалистых гор. Предполагалось, что вирулентная риккетсия SFG подверглась изменениям, прежде чем она стала агентом из Ист -Сайда. Мы определили последовательность генома R. peacockii и провели сравнение с близкородственной вирулентной R. rickettsii. Наличие 42 хромосомных копий транспозона ISRpe1 в геноме R. peacockii связано с отсутствием синтении с геномом R. rickettsii и многочисленными делециями через рекомбинацию между копиями транспозона. Плазмида содержит ряд генов из микроорганизмов с низкой степенью родства, например, часть островка гликозилирования Pseudomonas aeruginosa. Гены, делетированные или мутировавшие в R. Peacockii, которые могут быть связаны с потерей вирулентности, включают гены, кодирующие анкириновый повтор, содержащий белок, DsbA, RickA, протеазу II, OmpA, ScaI и предполагаемую фосфоэтаноламин трансферазу. Ген, кодирующий анкириновый повтор, содержащий белок, вовлечен в большей степени, так как он мутировал в штамме R. rickettsii Айова, характеризующемся ослабленной вирулентностью . Наличие многочисленных копий транспозона ISRpe1, приобретенного, вероятно , при латеральном переносе от вида Cardinium, связано с широкой реорганизацией генома и делециями. При этом сравнении геномов были выявлены делеция и мутация генов, которые могли способствовать потере вирулентности. Это также показывает , что введение транспозона в геном может оказывать различное воздействие – от повышения патогенности, например, у Francisella tularensis до потери патогенности, например , у R. Peacockii, и рекомбинация, активированная многочисленными копиями транспозона , может в некоторых геномах вызвать значительные делеции, тогда как в других она не вызывает делеций. 25 2010.6.0758. Геномный, протеомныйитранскриптомныйанализвирулентнойи авирулентной Rickettsia prowazekii выявляетееспособностькадаптивным мутациям. Genome Res. 2010 May;20(5):655-63. Genomic, proteomic, and transcriptomic analysis of virulent and avirulent Rickettsia prowazekii reveals its adaptive mutation capabilities. Bechah Y., El Karkouri K., Mediannikov O., Leroy Q., Pelletier N., Robert C., Médigue C., Mege J.L., Raoult D. Rickettsia prowazekii, возбудитель эпидемического тифа, является облигатной внутриклеточной бактерией , передаваемой человеку платяной вошью. Различают несколько штаммов со значительно различающейся вирулентностью, но генетическая основа этих вариаций осталась неизвестной со времени первого описания авирулентного вакцинного штамма почти 70 лет назад. Мы используем недавно разработанную мышиную модель эпидемического тифа и транскриптомные , протеомные и генетические методики для идентификации факторов, связанных с вирулентностью. Мы выявили четыре фенотипа R. prowazekii, которые различались по вирулентности , связанной с повышающей регуляцией антиапоптических генов или путем интерферона I в клетках-хозяевах. Транскрипционный и протеомный анализы экспрессии поверхностного белка R. prowazekii и метилирования белка варьировали в зависимости от вирулентности . Путем секвенирования вирулентного штамма и с помощью сравнительной геномики мы выявили горячие точки мутаций в гомополимерных трактах поли(A) и поли(T) в восьми генах авирулентного штамма, который расщеплял и инактивировал эти гены. Они включали recO, предполагаемую метилтрансферазу и экспортируемый белок. Пассаж авирулентного штамма Madrid E в клетках или на экспериментальных животных был связан с каскадом реактиваций генов, начиная с recO, который восстанавливал вирулентный фенотип. По- видимому , область пластичности генома определяет вирулентность R. prowazekii и представляет собой пример адаптивной мутации для этого патогена. 2010.6.0759. Разрушениеаутотранспортера Sca2 Rickettsia rickettsii ингибирует актин-зависимуюподвижность. Infect Immun. 2010 May;78(5):2240-7. Disruption of the Rickettsia rickettsii Sca2 autotransporter inhibits actin-based motility. Kleba B., Clark T.R., Lutter E.I., Ellison D.W., Hackstadt T. Rickettsii rickettsii, этиологический агент пятнистой лихорадки Скалистых гор, реплицируется в цитозоле инфицированных клеток и использует актин -зависимую подвижность для распространения от клетки к клетке и внутри клеток. Хотя ультраструктура актинового хвоста и связанные с ним хозяйские белки отличаются от Listeria или Shigella, сравнительно немного известно о белках риккетсий, участвующих в его организации. Здесь мы использовали случайный транспозоновый мутагенез R. rickettsii для получения мелкобляшечного мутанта с нарушением актин -зависимой подвижности и не распространяющегося непосредственно из клетки в клетку, что характерно для риккетсий группы пятнистой лихорадки. Место вставки транспозона этого мутантного штамма находилось в Sca2, представителе семейства крупных белков- аутотранспортеров . Sca2 проявляет несколько свойств, указывающих на его очевидную роль в актин -зависимой подвижности. Он демонстрирует N-концевой секреторный сигнальный пептид, C-концевой предсказанный домен-аутотранспортер, до четырех предсказанных Wasp- гомологичных доменов 2 (WH2) и два богатых пролином домена, один из которых подобен эукариотическим форминам. В модели инфекции с использованием морских свинок Sca2-мутант не вызывал лихорадку; это позволяет предположить, что Sca2 и актин-зависимая подвижность являются факторами вирулентности риккетсий группы пятнистой лихорадки. 26 2010.6.0760. Белок-аутотранспортер Sca1 Rickettsia conorii способствует прикреплениюкнефагоцитарнымклеткаммлекопитающих. Infect Immun. 2010 May;78(5):1895-904. The Rickettsia conorii autotransporter protein Sca1 promotes adherence to nonphagocytic mammalian cells. Riley S.P., Goh K.C., Hermanas T.M., Cardwell M.M., Chan Y.G., Martinez J.J. Патогенез вида Rickettsia группы пятнистой лихорадки (SFG), включая R. conorii и R. rickettsii, весьма зависит от прикрепления к клеткам-хозяевам и инвазии клеток-хозяев, включая клетки эндотелиальной системы млекопитающих. Биоинформационные анализы нескольких геномов риккетсий выявили наличие когорты генов, обозначенных как гены sca, которые, согласно предсказанию , кодируют белки, гомологичные белкам-аутотранспортерам грамотрицательных бактерий . В предыдущей работе было показано, что три представителя этого семейства – rOmpA (Sca0), Sca2 и rOmpB (Sca5) – участвуют во взаимодействии с клетками млекопитающих; однако очень мало было известно о функции других консервативных белков Sca риккетсий. Здесь мы показываем , что sca1, ген, присутствующий в геномах почти всех риккетсий SFG, активно транскрибируется и экспрессируется в клетках R. conorii. Выравнивание последовательностей Sca1 от видов Rickettsia SFG, происходящих из различных географических областей, выявило высокие степени идентичности последовательностей и консервацию этих последовательностей; это позволило предположить, что Sca1 могут иметь консервативную функцию. Используя гетерологичную систему экспрессии, мы показали, что продукция Sca1 R. conorii во внешней мембране Escherichia coli в достаточной степени опосредует прикрепление к панели культивируемых эпителиальных и эндотелиальных клеток млекопитающих, но не их инвазию. Кроме того, предварительная инкубация рекомбинантного пептида Sca1 с клетками-хозяевами блокировала связь R. conorii с клеткой. В своей совокупности эти результаты показывают, что прикрепление к клеткам млекопитающих может быть выключено из процесса вхождения и что Sca1 участвует в прикреплении R. conorii к клеткам-хозяевам. 2010.6.0761. Обзорисследованийвзаимодействиймеждувнутриклеточными патогенамиихозяевамисиспользованиеммикроматриц. J Microbiol Methods. 2010 May;81(2):81-95. Review of microarray studies for host-intracellular pathogen interactions. Leroy Q., Raoult D. Облигатные внутриклеточные бактерии – привилегированные солдаты на поле боя, которым являются взаимодействия между патогенами и хозяевами. Микроматрицы представляют собой эффективную технологию, способную расширить наши знания о том, как бактерии реагируют на хозяев и взаимодействуют со своими хозяевами. В данном обзоре обобщаются ограничения, свойственные исследованиям взаимодействий между патогенами и хозяевами, и основные стратегии усовершенствования исследований внутриклеточных бактерий с использованием микроматриц . Мы собрали доступную в настоящее время информацию по сравнительным геномным анализам и анализам экспрессии генов облигатных внутриклеточных бактерий, сделанным с помощью микроматриц. В данном обзоре мы исследуем методы, в которых микроматрицы могут использоваться для определения полиморфизмов в различных облигатных внутриклеточных бактериях, например, Coxiella burnetii, Chlamydia trachomatis, Ehrlichia chaffeensis, Rickettsia prowazekii и Tropheryma whipplei. Эти исследования с использованием микроматриц показывают, что, хотя содержимое генома облигатных внутриклеточных бактерий является высококонсервативным, вероятно, могут иметь место генетические полиморфизмы, способствующие патогенезу бактериальной инфекции. Кроме того, обсуждаются изменения в экспрессии генов C. trachomatis на протяжении его цикла жизни, а также изменения в профиле 27 экспрессии генов патогенов R. prowazekii, Rickettsia rickettsii, Rickettsia typhi, T. whipplei и C. trachomatis в ответ на изменения окружающей среды. Наконец, обсуждается модель для Rickettsia conorii в коже in vivo. Анализы экспрессии генов подчеркивают способность облигатных внутриклеточных бактерий адаптироваться к изменениям окружающей среды и, возможно, нарушать ответ хозяина. 2010.6.0762. Анализбиблиотек cДНКизсреднейкишкикошачьейблохи (Ctenocephalides felis), зараженнойинезараженной Rickettsia typhi: расшифровка молекулярныхмеханизмов, участвующихвответехозяинанаинфицирование R. typhi. Insect Mol Biol. 2010 Apr;19(2):229-41. Analysis of Rickettsia typhi-infected and uninfected cat flea (Ctenocephalides felis) midgut cDNA libraries: deciphering molecular pathways involved in host response to R. typhi infection. Dreher-Lesnick S.M., Ceraul S.M., Lesnick S.C., Gillespie J.J., Anderson J.M., Jochim R.C., Valenzuela J.G., Azad A.F. Эндемический сыпной тиф – распространяемое блохами лихорадочное заболевание, вызываемое облигатной внутриклеточной бактерией, Rickettsia typhi. Кошачья блоха, Ctenocephalides felis, заражается R. Typhi, всасывая кровь позвоночного-носителя риккетсии. Чтобы определить, какие транскрипты экспрессируются в средней кишке в ответ на экспериментальное заражение R. typhi, были сконструированы библиотеки cДНК из средней кишки C. Felis, зараженных и незараженных R. typhi. В данном исследовании мы изучили уровни транскриптов в средней кишке для избранных протеаз серина C. felis, GTPаз и генов защитного ответа, которые, как считается, участвуют в ответе блох на всасываемую кровь или инфицирование. Наблюдалось усиление экспрессии генов для ингибиторов протеазы серина и белков везикулярного транспорта в ответ на всасывание . Кроме того, инфицирование R. typhi приводило к усилению экспрессии генов для химотрипсина и rab5, которые мы изучали. Интересно, что инфицирование R. typhi оказывало незначительный эффект на экспрессию любого из генов защитного ответа, которые мы изучали. Мы не уверены в отношении физиологического значения профилей экспрессии этих генов и в настоящее время изучаем их потенциальные роли в отношении инфицирования R. typhi. Насколько нам известно, это первое сообщение о дифференциальной экспрессии транскриптов блох в ответ на инфицирование R. typhi. 2010.6.0763. Функциональнаяхарактеристикагомологафосфолипазы A2 из Rickettsia typhi. J Bacteriol. 2010 Apr 30. [ Электроннаяпубликация, предшествующаяпечатной] Functional characterization of phospholipase A2 homolog from Rickettsia typhi. Rahman M.S., Ammerman N.C., Sears K.T., Ceraul S.M., Azad A.F. Давно было высказано предположение, что фосфолипаза A2 (PLA2) участвовала во вхождении в клетки -хозяева, выходе из фагосомы для ускользания от разрушения лизосомальными ферментами и лизисе клеток-хозяев. Однако соответствующий ген (гены) риккетсий, кодирующий белок с активностью PLA2, не был определен или функционально охарактеризован. Здесь мы сообщаем, что геном R. typhi имеет два гена, кодирующих пататин-подобные белки PLA2: RT0590 и RT0522. Анализ последовательностей RT0522 и RT0590 выявляет наличие консервативных мотивов, важных для активности PLA2. Транскрипционный анализ показывает, что RT0522, а не RT0590 транскрибируется на всех стадиях внутриклеточного роста R. typhi в клетках Vero. Характер дифференциальной экспрессии генов RT0522 на различных стадиях роста позволяет сделать предположение относительно его возможной роли во время инфицирования R. typhi клеток- хозяев . In silico предсказано, что RT0522 не является цитоплазматическим и не кодирует 28 распознаваемый сигнал последовательности пептидов. Однако наши данные показывают, что RT0522 секретируется в цитоплазму клетки-хозяина. Кроме того, мы наблюдаем, что экспрессия белка RT0522 оказывает цитотоксический эффект как на дрожжи, так и на клетки Vero. Важно, что , как мы показали, рекомбинантный RT0522 обладает активностью фосфолипазы A, которая требует эукариотического кофактора хозяина для активации. Как цитотоксичность, так и активность фосфолипазы A, связанная с RT0522, снижается ингибиторами PLA2. Сайт- направленный мутагенез предсказанных каталитических остатков Ser/Asp RT0522 также устраняет цитотоксичность и активность фосфолипазы A. Насколько нам известно, RT0522 является первым белком с функциональной активностью фосфолипазы A, идентифицированным в Rickettsia typhi. 2010.6.0764. Относительнаяэкспрессияхемокиновимолекуладгезиипри средиземноморскойпятнистойлихорадкеиафриканскойклещевойлихорадке J Infect. 2009 Jan;58(1):68-75 Relative chemokine and adhesion molecule expression in Mediterranean spotted fever and African tick bite fever Damås J.K., Davì G., Jensenius M., Santilli F., Otterdal K., Ueland T., Flo T.H., Lien E., Espevik T., Frøland S.S., Vitale G., Raoult D., Aukrust P. Цели. Средиземноморская пятнистая лихорадка (СПЛ), вызываемая Rickettsia conorii (R. conorii), является потенциально летальным заболеванием, в то время как африканская клещевая лихорадка (АКЛ), вызываемая Rickettsia africae, представляет собой проходящее без лечения гриппоподобное заболевание. Мы предположили, что различный воспалительный потенциал в эндотелиальных клетках мог бы обусловливать различия в клинических признаках этих риккетсиозов. Методы. Мы проанализировали воздействие инактивированной теплом R. africae и R. Conorii на уровни mРНК и моноцитарного хемоаттрактантного белка (МХБ)-1, интерлейкина (IL)-8 и молекул адгезии в эндотелиальных клетках. Пробы сывороток от пациентов с СПЛ (n=16) и АКЛ (n=15) брали до и после лечения. Результаты. R. conorii вызывала заметное увеличение количества МХБ-1, IL-8 и молекул адгезии в эндотелиальных клетках, включая активацию toll-подобного рецептора 4. Напротив, R. africae вызывала экспрессию МХБ-1, в то время как со стороны IL-8 и молекул адгезии наблюдались лишь скромная реакция, или же она не наблюдалась вовсе. По сравнению с реакцией in vitro у больных АКЛ не наблюдалось увеличения уровней IL-8 и молекул адгезии или отмечалось лишь скромное увеличение, в то время как при СПЛ уровни этих маркеров воспаления заметно повышались. Выводы. Наши данные позволяют предположить наличие более высокого воспалительного потенциала у R. conorii по сравнению с R. africae в эндотелиальных клетках, вероятно, в связи с более тяжелым воспалением при СПЛ по сравнению с ATBF. 2010.6.0765. Ограниченныетранскрипционныеответы Rickettsia rickettsii в ответнараздражителиокружающейсреды. PLoS One. 2009;4(5):e5612 Limited transcriptional responses of Rickettsia rickettsii exposed to environmental stimuli Ellison D.W., Clark T.R., Sturdevant D.E., Virtaneva K., Hackstadt T. Риккетсии являются строго облигатными внутриклеточными патогенами, которые циркулируют между хозяевами-членистоногими и млекопитающими в зоонозном цикле. Обычно патогенные бактерии, циркулирующие между источниками в окружающей среде и хозяевами-млекопитающими, адаптируются к соответствующим средам, должным образом регулируя экспрессию генов таким образом, что гены, важные для выживания и вирулентности , экспрессируются только после инфицирования млекопитающих. 29 Температура является наиболее частым раздражителем окружающей среды для повышающей регуляции экспрессии генов вирулентности, хотя другие факторы также могут играть определенную роль. Мы изучили транскрипционные ответы Rickettsia rickettsii, возбудителя пятнистой лихорадки Скалистых гор, на ряд раздражителей окружающей среды, с которыми она может встретиться на протяжении своего цикла жизни . R. Rickettsii, подверженные воздействию разности температур в период развития (25°C против 37°C), недостатка железа и смены видов клеток-хозяев, проявляли номинальные изменения в экспрессии генов при любом из этих условий только для 0, 5 или 7 генов соответственно, с изменением уровней экспрессии больше чем в 3 раза. R. rickettsii не полностью лишена способности реагировать на такие изменения температуры, как холодовой шок (37°C против 4°C), вызывавший более чем 3-кратные изменения в приблизительно 56 генах. Риккетсии неизменно относительно постоянно населяют одну и ту же среду – цитозоль эукариотических клеток. Из-за облигатного внутриклеточного характера риккетсий считается, что они претерпевают редуктивную эволюцию до минимального генома. Мы полагаем, что относительное постоянство экологической ниши снизило потребность R. rickettsii в реагировании на изменения окружающей среды с последующей делецией несущественных регуляторов транскрипционного ответа. Минимальное число предсказанных регуляторов транскрипции в геноме R. rickettsii согласуется с этой гипотезой. |