Руководство к практическим занятиям по микробиологии. Руководство к практическим занятиям по микробиологии ( малый практикум) Ульяновск 2003 удк 619 616. 9
 Скачать 4.08 Mb.
|
|
Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия Кафедра микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Д.А. Васильев С.Н. Золотухин Е.А. Корнеев РУКОВОДСТВО К ПРАКТИЧЕСКИМ ЗАНЯТИЯМ ПО МИКРОБИОЛОГИИ ( малый практикум)  Ульяновск 2003УДК 619:616.9 Руководство к практическим занятиям по микробиологии. Второе издание расширенное и дополненное. Предназначено студентам факультетов: ветеринарной медицины и биотехнологии Составители: Дмитрий Аркадьевич Васильев – доктор биологических наук, профессор, Сергей Николаевич Золотухин – кандидат ветеринарных наук, доцент, Евгений Анатольевич Корнеев – ассистент кафедры. Издается по решению методической комиссии факультета ветеринарной медицины УГСХА, протокол № 11 от 16.04.1997 г. Рецензент: кандидат ветеринарных наук, доцент курса эпизоотологии Козин А.И. © Д.А. Васильев С.Н. Золотухин Е. А. Корнеев 2003 г. ПРЕДИСЛОВИЕ КО ВТОРОМУ ИЗДАНИЮ.Необходимость создания руководства к практическим занятиям по микробиологии возникла примерно 6 лет назад и была обусловлена проявлением специализаций на факультетах ветеринарной медицины и биотехнологии. Поэтому в 1998 году нашими силами (Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин) был создан и издан практикум справочник по общей и частной микробиологии для студентов по специализации врач – бактериолог общим объёмом в 22 печатных листа. Однако студенты учащиеся по специализация – технолог-переработчик и на специальности – биотехнология изучали курс общей микробиологии по старым практикумам, не всегда совпадающим с учебными программами. Это вызывало некоторые неудобства в проведении практических занятий, создавало дополнительные методические трудности. Преподавание микробиологии в нашем вузе на двух факультетах - ветеринарном и зооинженерном, опирается на опыт московской школы микробиологов. В середине пятидесятых годов, аспирант профессора Колякова Я.Е (являвшийся несколько десятилетий заведующим кафедрой микробиологии МВА, и автором учебников микробиологии, по которым четверть века учились студенты ветеринарных факультетов) – доцент и руководитель курса микробиологи А.П. Васильев приехал в Ульяновск и создал солидную теоретическую и практическую базу курса микробиологии в УГСХА. Он подготовил преемника в лице своего аспиранта, а в последующем профессора, доктора ветеринарных наук В.Я. Ганюшкина, аспирант которого, а ныне доцент, С.Н. Золотухин, является в настоящее время руководителем курса микробиологии. Учитывая полувековой опыт преподавания микробиологии коллективом кафедры, представляющим одну научно-педагогическую школу, было решено создать так называемый малый практикум по микробиологии. Это практически базовый практикум, первый этап знакомства с миром микроорганизмов. В дальнейшем студенты, изучающие микробиологию по специальности ветеринарный врач, продолжают изучать микробиологию по существующему лабораторному практикуму…., студенты по специализации врач – бактериолог изучают микробиологию по выше упомянутому большому лабораторному практикуму, студенты по специализации технолог–переработчик, изучают микробиологию по созданному на нашей кафедре лабораторному практикуму по микробиологии мяса и молока. Этим же практикумом пользуются студенты, изучающие специализацию врач– ветсанэксперт. При составления руководства авторы исходили из принятого на кафедре метода проведения практических занятий. В основе которого лежит принцип самостоятельной работы студентов. Это позволяет преподавателю не излагать весь рассматриваемый материал, а лишь проверить подготовленность группы к занятиям и осветить наиболее сложные вопросы предстоящей работы. Все замечания и предложения, которые могут возникнуть при чтении руководства и работы с ним авторы примут с благодарностью. Дополнительную информацию можно получить на нашем сайте в Интернете – www.Miсrobiology.by.ru Д.А. Васильев ЗАНЯТИЕ 1. Бактериологическая лаборатория, ее задачи. Техника безопасности в лаборатории. Устройство микроскопа. Особенности микроскопии в микробиологической практике (иммерсионная система). Формы микроорганизмов. Цель занятия. Усвоить правила работы в бактериологической лаборатории. Ознакомиться с техникой безопасности и личной профилактикой. Освоить работу с микроскопом и особенности иммерсионной системы. Изучить формы бактерий. Материалы и оборудование. Микроскопы, окрашенные микроскопические препараты с различными формами микроорганизмов, плакаты. Методические указания. После краткого объяснения преподавателя о порядке проведения работы в лаборатории, необходимости соблюдения техники безопасности студенты знакомятся с устройством светового микроскопа, осваивают технику микроскопии готовых препаратов, изучают морфологию микроорганизмов на препаратах и зарисовывают их в тетради. Бактериологическая лаборатория - это учреждение ветеринарной службы, деятельность которой направлена на ликвидацию заразных болезней животных, а также охрану населения от болезней общих для животных и человека. По масштабу работы ветеринарные лаборатории бывают: районные, межрайонные (зональные), областные (краевые) и республиканские. Основная задача бактериологических лабораторий - диагностика болезней сельскохозяйственных животных (включая птиц), пушных зверей, рыб, пчел, а также проведение экспертизы пищевых продуктов и кормов, санитарной оценки воды, воздуха и почвы. Лабораторию размещают в отдельном здании, вдали от проезжих дорог. В ней предусматривают приемное отделение, бактериологический, вирусологический, биохимический, серологический и патологоанатомический отделы; выделяют специальные помещения для стерилизации посуды и питательных сред, для мытья посуды. Для выполнения работы в асептических условиях оборудуют специальные изолированные помещения - боксы. Лабораторных животных размещают в виварии. Кроме того, имеются комнаты для специалистов, обслуживающего персонала, кабинет заведующего, помещения для библиотеки, склада, весовой, раздевалки и др. Учебная микробиологическая лаборатория предназначена для овладения студентами методами выделения и изучения различных микроорганизмов. В ней проводятся лабораторные занятия, предусмотренные программой, а также научно-исследовательская работа. Правила работы, техника безопасности и личная профилактика в лаборатории.
Уборка лабораторного помещения. Помещение лаборатории ежедневно до работы убирают влажным способом. Пыль с поверхностей протирают увлажнённой тряпкой смоченной дезинфицирующим раствором. После окончания работы стены, покрытые метлахскими плитками или окрашенные масляной краской, моют горячей водой с мылом или стиральным порошком. Полы моют 3-5% раствором дезинфектанта. Потолки, карнизы, верхняя часть стен, окрашенные клеевой краской, не реже одного раза в неделю очищают от пыли пылесосом. Подготовка бокса к работе. Ежедневно перед началом работы полы протирают дезинфицирующим веществом (2%- 5% раствором хлорамина); воздух обеззараживают бактерицидными лампами, установленными на высоте 2-2.5 м от поверхности пола, из расчета одна лампа БУВ-ЗО (1,5—2,5 Вт) на 1м3 помещения. При указанных условиях бокс облучают 2ч. Перед началом работы лампы выключают. Для того чтобы предотвратить заражение бокса, образцы материалов, подлежащие исследованию, вносят в бокс после предварительного тщательного протирания их 3% раствором формалина. Работа в боксе проводится стерильных халатах, защитных масках и тапочках, специально предназначенных для бокса. Воздух в боксе следует регулярно, не менее 2 раз в неделю, проверять на бактериальную контаминацию. Чашки с мясопептонным агаром и средой Сабуро оставляют открытыми на 15 мин. Посев на мясопептонном агаре выдерживают в термостате 48 ч при 37°С, чашки со средой Сабуро — 96 ч при 22°С. Допустимым ростом считается 5 колоний на чашках. Количество колоний больше 5 при 15-минутной экспозиции является показателем высокой контаминации воздуха бокса. В этих случаях помещение бокса нуждается в дополнительной, более тщательной обработке. Не менее одного раза в неделю помещение бокса моют горячей водой с мылом, дезинфицирующими средствами и протирают досуха. Уборка рабочего места. По окончании работы берут пинцетом кусок ваты, смачивают его в 5% растворе хлорамина или формалина и протирают им поверхность стола на рабочем месте. Устройство светового микроскопа и работа с ним. Микроскоп - сложный оптический прибор, используемый для изучения морфологии и тинкториальных свойств микроорганизмов. Принципиально все микроскопы устроены одинаково и состоят из механической части и оптической системы. Механическую часть составляют: основание микроскопа, тубусодержатель, тубус, система винтов для передвижения, предметный столик и револьвер. Оптическую часть составляют - окуляр, объективы и осветительный аппарат (рис. 1). Работа с иммерсионной системой. Объективы малого увеличения (3,5, 8, 9) применяют главным образом для предварительного осмотра препарата, объективы среднего увеличения (20, 40) - для изучения крупных клеток микроорганизмов (например, грибов); эти объективы называются сухими, поскольку при микроскопии между фронтальной линзой и препаратом находиться воздух. При этом благодаря различию показателей преломления воздуха (n=1) и стекла (n=1,52) часть лучей, освещающих препарат, рассеивается и не попадает в объектив.  Рис.1.Микроскоп МБР-1. 1 основание; 2 предметный столик; 3 винты для перемещения предметного столика; 4 клеммы; 5 конденсор; 6 кронштейн конденсора; 7 винт, укрепляющий конденсор; 8 рукоятка перемещения конденсора; 9 рукоятка ирисовой диафрагмы конденсора; 10 зеркало; 11 тубусодержатель; 12 рукоятка макрометрического винта; 13 рукоятка микрометрического винта; 14 револьвер; 15 объектив; 16 наклонный тубус; 17 винт для крепления тубуса; 18 окуляр. Объективы больших увеличений (85, 90) носят название иммерсионных. При работе с ними необходима максимальная освещенность препарата; устранение рассеивания, неизбежного при работе с сухими объективами, в данном случае достигается путем использования иммерсионных жидкостей, у которых показатель преломления близок к показателю преломления стекла (рис.2).  Рис. 2. Схема лучей в иммерсионной системе. 1 объектив микроскопа; 2 предметное стекло; 3 объект исследования; 4 иммерсионное масло; 5 лучи света; 6 фронтальная линза объектива. Вначале под малым увеличением микроскопа наводят свет и определяют на препарате участок микроскопирования. Затем на выбранное место наносят каплю иммерсии и осторожно (под контролем глаз с боку) погружают в нее фронтальную линзу иммерсионного объектива (90). Иммерсионные объективы имеют короткое фокусное расстояние (до 2,3 мм) поэтому наводить на резкость следует путем поднимания объектива, а не опускания его, так как при небольшом рабочем расстоянии можно раздавить препарат и повредить фронтальную линзу. После грубой наводки, которую проводят с помощью макрометрического винта, руки переводят на микрометрический винт и осуществляют точную фокусировку. По окончании работы объектив поднимают, убирают препарат, а с фронтальной линзы кусочком фильтровальной бумаги убирают иммерсию. Морфология бактерий. По форме бактерий подразделяют на три основные группы: шаровидные (кокки), цилиндрические (палочки) и извитые (рис. 3). Для различных видов кокков характерно своеобразное расположение клеток, обусловленное способом деления. Микрококки - беспорядочно расположенные кокки, в диаметре не превышают 0,5 мкм. Диплококки - кокки, располагающиеся попарно, делятся в одной плоскости. Стрептококки - деление их происходит в одной плоскости и образующиеся клетки не разъединяются, располагаясь цепочками, различной длины. Тетракокки - сочетание шаровидных микробов по четыре, деление у которых происходит в двух взаимно перпендикулярных плоскостях. Стафилококки - делятся в различных плоскостях без особой закономерности, образуя беспорядочное скопление клеток, иногда напоминающее грозди винограда. Сарцины по форме напоминают пакеты или тюки. Образуются в результате деления в трёх взаимно перпендикулярных плоскостях. Палочковидные микроорганизмы подразделяются на бактерии, бациллы и клостридии. Бактерии -цилиндрической формы, не образуют спор. Бациллы - спорообразующие палочки по типу дыхания аэробы, т.е. для своего развития нуждаются в свободном молекулярном кислороде воздуха. Клостридии - спорообразующие палочки, по типу дыхания анаэробы (не использующие кислород воздуха), диаметр их споры превышает ширину микробной клетки. Извитые бактерии разделяются на вибрионы, спириллы и спирохеты.  Рис. 3. Основные формы бактерий: а – микрококки; б, в – диплококки; г – стрептококки; д стафилококки; е – тетракокки; ж – сарцины; з, и, к палочки; л – вибрионы; м – спириллы Вибрионы имеют форму запятой, летящей чайки, поворот вокруг оси не превышает четверти оборота. Спириллы - характеризуются небольшим числом крупных завитков (не более пяти). Передвигаются с помощью жгутиков. Спирохеты - имеют штопорообразную форму с большим количеством завитков. На конце тела пучком расположены жгутики. |