Практическое руководство по биологической безопасности в бак.лаборатор. Практическое руководство по биологической безопасности в бак. Руководство по биологической безопасности при работе в бактериологической лаборатории подготовлено к печати
 Скачать 0.54 Mb.
|
Применение шприцев и иглПричиной наибольшего количества из всех известных случаев бактериальных заражений в лабораторных условиях является использование игл и шприцев. Для того чтобы уменьшить вероятность неблагополучной инъекции, образования аэрозоля или проливания суспензий бактерий, лучше избегать их применения. Для введения суспензий бактерий животным через рот или нос рекомендуется пользоваться тупой иглой или канюлей на шприце и не рекомендуется применять шприц и иглу как заменитель пипетки. Существуют следующие правила использования игл и шприцев для парентеральных инъекций. Пользуются биологически безопасным боксом и избегают быстрых лишних движений рукой, держащей шприц. Проверяют стеклянные шприцы на присутствие сколов и трещин, а иглы-на наличие зазубрин и проходимость. Это делают перед стерилизацией и перед употреблением. Пользуются только шприцами с иглами и удостоверяются, что игла закреплена надежно. Используют хирургические или другие резиновые перчатки. Шприцы заполняют осторожно, чтобы в набираемом растворе было как можно меньше пузырьков воздуха и пены. Излишки воздуха, жидкости и пузырьки удаляют, держа шприц в вертикальном положении, в ватный тампон, смоченный дезинфицирующим веществом, или в маленькую бутылочку, наполненную стерильной ватой. Шприц не применяют для внесения инфекционной жидкости в открытый пузырек или пробирку с целью смешивания. Смешивание с помощью шприца разрешается только в том случае, если конец иглы находится ниже поверхности жидкости в пробирке. Если раствор набирают шприцем из пробирки, то стараются не загрязнить втулку иглы, так как это может привести к попаданию инфекционного материала на пальцы. Когда вынимают шприц и иглу из бутыли с резиновой пробкой, иглу и пробку заворачивают в ватный тампон, смоченный соответствующим дезинфектантом. Если есть опасность загрязнения дезинфектантом чувствительного к нему материала, используемого в эксперименте, применяют стерильный сухой тампон, который сразу же помещают в дезинфицирующий раствор. Во время прививки животному руку держат сзади иглы во избежание укалывания. Перед прививкой убеждаются в том, что животное хорошо фиксировано, и принимают меры предосторожности в случае неожиданных движений. Место прививки перед инъекцией и особенно после нее протирают дезинфицирующим веществом. После использования грязные стеклянные шприцы многоразового пользования с надетыми на них иглами погружают в емкость с дезинфицирующим раствором и затем автоклавируют. Чтобы уменьшить возможность заражения, иглы должны оставаться на шприцах до конца автоклавирования. Шприцы с надетыми на них иглами помещают в отдельный лоток, в котором нет других использованных материалов, Иглы и шприцы одноразового пользования помещают в лоток с дезинфицирующим раствором и затем автоклавируют. Емкости с надписью «Шприцы и иглы» после соответствующей упаковки и разрушения содержимого можно выбрасывать в обычный контейнер для отходов. После стерилизации иглы и шприцы специально портят и разбивают, чтобы их не использовали наркоманы. В тех случаях, когда после использования иглу нужно поместить в защитный футляр, ее берут пинцетом, чтобы уменьшить вероятность случайного укола пальца. Шприцы и иглы многоразового и одноразового пользования складывают в отдельные лотки с дезинфектантом, чтобы не возникало проблемы их сортировки. Шприцы и иглы никогда не кладут в лотки, содержащие пипетки и другую стеклянную посуду. Вскрытие емкостейС пробирками, содержащими бактериальные суспензии, необходимо обращаться осторожно. Такие простые операции, как удаление пробки из пробирки или перенесение культуры из одной емкости в другую, могут вызывать образование аэрозолей. Следует четко метить пробирки и штативы с пробирками, содержащими биологически опасный материал. Чтобы уменьшить проливание из разбитых пробирок, рекомендуется пользоваться безопасными подставками для пробирок вместо обычных штативов. В такой безопасной подставке каждая выемка для пробирки имеет достаточно высокие стенки, так что если пробирка разобьется, все ее содержимое останется в выемке. Аэрозоль с большим содержанием жидкости образуется при энергичном встряхивании жидких культур, тогда как при вращательном движении сосудов образование аэрозоля минимально, а получаемая суспензия достаточно гомогенна. По окончании ресуспендирования жидкой культуры следует несколько минут выждать и только затем открывать емкость; это способствует снижению образования аэрозоля. Брызги аэрозоля могут появляться при погружении стерильной горячей петли или иглы в жидкую культуру или в косяк. Чтобы уменьшить образование аэрозолей, петле дают остыть либо на воздухе, либо при соприкосновении с внутренней стенкой емкости или поверхностью агара, где до этого заведомо не росла культура. После использования петли и иглы ее стерилизуют нагреванием на открытом пламени. В продаже имеются петли для внесения инокулята одноразового пользования, которые проще обеззараживать погружением в дезинфицирующий раствор, чем нагреванием. При посеве штрихом на неровную поверхность агара происходит вибрация петли или иглы, что приводит к образованию аэрозоля. Как правило, этой проблемы не существует, если посев делают на гладкую поверхность агара, поэтому рекомендуется не высевать культуру в чашки с неровной поверхностью агара. Вода, появляющаяся в чашках Петри в результате синерезиса, образует в перевернутой чашке пленку между ребром чашки и крышкой в которой могут содержаться жизнеспособные бактерии. При открывании чашки эта пленка разрывается, в результате чего возникают аэрозоли. Чашки следует открывать в боксе. Менее вероятно высвобождение аэрозолей при открывании бутылей с завинчивающимися пробками или закрытых тампонами пробирок. Но все же это может произойти, когда во время открывания разрывается пленка между краем и прокладкой. Аэрозоли образуются при удалении ватных пробок или крышек с колб, бутылей и центрифужных стаканов сразу же после взбалтывания или центрифугирования. Опасно вынимать пробки, намокшие в результате невертикального положения колбы или центрифужного стакана. Пробки могут слегка увлажняться при центрифугировании, если в ходе его происходит незначительное вспенивание. В связи с этим все жидкие культуры с инфекционным материалом необходимо открывать в безопасном боксе, надев перчатки и лабораторную одежду с длинными рукавами. Аэрозоль может образовываться при вскрытии запечатанной ампулы с лиофилизованной или жидкой культурой, поэтому ампулы следует вскрывать только в боксе. Собирая осколки ампулы, необходимо позаботиться о том, чтобы не порезать перчатки или руки, чтобы разбитое стекло не попало в глаза, на лицо или не осталось неубранным. После вскрытия ампулы суспензия бактерий не должна загрязняться посторонними микроорганизмами или дезинфицирующими веществами. Этого добиваются, работая в безопасном боксе в перчатках. Для того чтобы вскрыть ампулу, прежде всего делают насечку пилкой около шейки ампулы. Саму ампулу оборачивают ватой, пропитанной дезинфицирующим веществом, и вскрывают надломом в месте насечки, предварительно убедившись, что держат ее вертикально. Другим способом в месте насечки делают трещину, прикладывая к нему накаленную проволоку или стеклянную палочку, затем оборачивают ампулу пропитанной в дезинфицирующем веществе ватой и открывают ее надломом. Вату и верхушку ампулы немедленно бросают в дезинфицирующий раствор. Содержимое ампулы растворяют путем медленного добавления жидкости, стараясь не допускать образования аэрозоля. Раствор перемешивают, следя за тем, чтобы не было пузырьков, и переносят в приготовленную емкость. Для удобства открывания выпускаются ампулы с предварительно нанесенной насечкой, однако такие ампулы менее надежны: они могут разбиваться во время работы с ними или при хранении. Ампулы с жидкими культурами вскрывают аналогичным образом. Сбор культур, выращиваемых на куриных эмбрионах, весьма опасен. При его проведении сильно загрязняются скорлупа и подносы с яйцами, окружающая среда и руки экспериментатора. Работу подобного рода следует выполнять в безопасных боксах, часто пользуясь подходящим дезинфицирующим веществом. |