|
|
послед. выполнения модуля А. Стоп раствор
К +
|
К -
|
КОНЪЮГАТ
|
СУБСТРАТ
|
СТОП - РАСТВОР
|
|
концентрат буферного р-ра для разведения проб, конъюгата, 32,5мл
|
концентрат р-ра для межэтапной промывки,
130мл
|
|
Р-Р СУБСТРАТА АБТС,
25мл
|
Вымыть руки, надеть маску, перчатки
|
2. Подготовить рабочее место: лабораторная посуда: пробирка -2шт., мерный цилиндр 100мл, колбы 250мл, 500мл, штатив для пробирок, микропробирки, дистил. вода, фильт. бумага, плёнка для планшета, стрипы, ванночка, наконечники для дозаторов, маркер
|
Проверка и подготовка дозаторов
|
Приготовление рабочих растворов:
|
4.1. Содержимое флакона с концентратом буфера для разведения (32,5 мл — 1 флакон ) доводят дистиллированной водой до 250 мл. , промаркировать (Р1)
|
4. 2. Содержимое флакона с конъюгатом (3,0 мл — 1 флакон) растворяют в 0,5 мл буфера для разведения проб
|
4.2.1 Для приготовления рабочего разведения конъюгата 0,25 мл концентрата конъюгата доводят буфером для разведения до 10 мл, промаркировать (Р3)
|
5. Содержимое флакона с концентратом буфера для отмывки 65мл доводят дистиллированной водой до 500 мл и тщательно перемешивают, промаркировать (Р2)
|
6. Все испытуемые и контрольные проб разводят: к 0,0025 мл сыворотки крови добавляют 1 мл буфера для разведения и трижды пипетируют, используя для каждой пробы новый наконечник.
|
7. подготовить термошейкер к работе – проверить заземление, включить, выставить температуру, время
|
8. берут планшет, убирают из планшета в пакет лишние стрипы.
|
9. В лунки А1 — А2 вносят по 100 мкл (0,1мл) подготовленного отрицательного контроля.
10. В лунки А3 — А4 вносят по 100 мкл ( 0,1 мл) подготовленного положительного контроля.
11. В остальные лунки планшета вносят по 100 мкл испытуемых проб сыворотки крови.
|
12. Планшет накрывают плёнкой, ставят в готовый термошейкер и выдерживают 30 минут при температуре 37 °С
13. открывают термошейкер, лунки освобождают от содержимого резким встряхиванием на фильтровал. бумагу
14. трижды промывают промывочным буфером (по 300 мкл на лунку).
15. жидкость окончательно удаляют и планшет подсушивают постукиванием по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге.
|
16. Во все используемые лунки планшета вносят по 100 мкл рабочего раствора конъюгата
17. накрывают плёнкой и выдерживают 30 минут при температуре 37 °С.
18.Трижды повторяют процедуру промывания.
|
19. .Во все используемые лунки планшета вносят по 100 мкл раствора субстрата
20. накрывают пленкой и выдерживают от 2 до 10 минут при температуре 22 — 28 °С. (в тёмном месте)
21. Берём «стоп-раствора» - 2,5 мл добавляем 10 мл дистил. воды
22. Реакцию останавливают добавлением в каждую используемую лунку по 100 мкл подготовленного <стоп-раствора>.
23. не используемые компоненты убираем в холодильник с температурой 2-80
24. уборка рабочего места
|
ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР (ИБК) ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ ПРИ ТЕСТИРОВАНИИ СЫВОРОТОК В ОДНОМ РАЗВЕДЕНИИ
Определение антител к вирусу ньюкаслской болезни иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении
1. Вымыть руки, надеть маску, перчатки
|
2. Подготовить рабочее место: лабораторная посуда: банка на 300мл,пробирка -2шт., мерный цилиндр 100мл, колба 500мл, набор, штатив для пробирок, дистил. вода, фильт. бумага, лакмус. бумага, плёнка для планшета, маркер
|
3. Проверка и подготовка дозаторов
|
4. Приготовление рабочих растворов:
|
5.Содержимое флакона с концентратом буфера для разведения (32,5 мл — 1 флакон ) доводят дистиллированной водой до 250 мл.,
Измерить рН – должно быть 7.4-7.6 (лакмус. бумага)
промаркировать (Р1)
|
6. Содержимое флакона с концентратом буфера для отмывки 65мл доводят дистиллированной водой до 500 мл и тщательно перемешивают, Измерить рН – должно быть 7.4-7.6 (лакмус. бумага)
промаркировать (Р2)
|
7. Берём «стоп-раствора» - 2,5 мл добавляем 10 мл дистил. воды, промаркировать (Р3)
|
8. Все испытуемые и контрольные проб разводят: к 0,0025 мл сыворотки крови добавляют 1 мл буфера для разведения и трижды пипетируют, используя для каждой пробы новый наконечник.
|
9. подготовить термошейкер к работе – проверить заземление, включить, выставить температуру, время
|
10. берут планшет, убирают в пакет лишние стрипы.
|
11. В лунки А1 — А2 вносят по 100 мкл (0,1мл) подготовленного отрицательного контроля.
12. В лунки А3 — А4 вносят по 100 мкл ( 0,1 мл) подготовленного положительного контроля.
13. В остальные лунки планшета вносят по 100 мкл испытуемых проб сыворотки крови.
|
14. Планшет накрывают плёнкой, ставят в готовый термошейкер и выдерживают 30 минут при температуре 37 °С
15. открывают термошейкер, лунки освобождают от содержимого резким встряхиванием на фильтровал. бумагу
16. трижды промывают промывочным буфером (по 300 мкл на лунку). (Р2)
17. жидкость окончательно удаляют и планшет подсушивают постукиванием по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге.
|
18 Рабочий раствор конъюгата готовят непосредственно перед внесением в лунки планшета.
Для приготовления рабочего разведения конъюгата 0,1 мл концентрата конъюгата доводят буфером для разведения до 10 мл
1:100
|
19. Во все используемые лунки планшета вносят по 100 мкл рабочего раствора конъюгата
20. накрывают плёнкой и выдерживают 30 минут при температуре 37 °С.
21.Трижды повторяют процедуру промывания. (Р2) по 0,3мл в каждую лунку
22. жидкость окончательно удаляют и планшет подсушивают постукиванием по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге.
|
23. .Во все используемые лунки планшета вносят по 100 мкл раствора субстрата
24. накрывают пленкой и выдерживают о 10 - 15 минут при температуре 20 — 25 °С. (в тёмном месте)
25. Реакцию останавливают добавлением в каждую используемую лунку по 100 мкл подготовленного <стоп-раствора>.
26. не используемые компоненты убираем в холодильник с температурой 2-80
27. уборка рабочего места
|
Для приготовления рабочего разведения конъюгата 0,025 мл концентрата конъюгата доводят буфером для разведения до 10 мл, промаркировать (Р3)
|
При правильной постановке ИФА и использовании качественных компонентов набора среднее значение ОП отрицательных контролей должно быть не выше 0,200.
|
| |
|
|
Скачать 20.99 Kb.