Выпускная квалификационная работа артефакты при изготовлении гистологических препаратов
 Скачать 3.7 Mb.
|
2.4 Артефакты при приготовлении срезовВ результате дефектов при приготовлении срезов могут наблюдаться морфологические картины, которые ведут к ошибочным заключениям. Прежде всего, следует подчеркнуть необходимость исследования клеток на срезах не толще 4-7 мк. При наличии более толстых срезов часто получается ложное представление об увеличении количества клеток (глии в ЦНС и т.д.). Толстые срезы также мешают правильной оценке внутренней структуры клеток. Значительная и неравномерная толщина среза обычно зависит от плохой заточки микротомной бритвы, при наличии на ней мелких зазубрин получаются рваные срезы (рис. 5),  Рисунок 5 – Рваный срез которые в дальнейшем очень трудно окрашивать и оценивать. Также имеет большое значение направление срезов, так на срезах проведенных тангенциально, создается ложное представление о многослойном расположении клеток, об их пролиферации или об образовании ложных структур, так в мозговой ткани может получиться ложное представление в виде участков выпадения нервных клеток. Полностью избежать повреждений и артефактов, пожалуй, нельзя. Остается, следовательно, помнить об их возможности, критически оценивая результаты данных изменений и учитывать их при диагностике патологических процессов в органах и тканях. 2.5 Артефакты при окраске гистологического препарата Наиболее распространенной окраской в гистологии является окраска двумя красителями – гематоксилином и эозином. Это универсальная окраска, которая применяется уже более века. Этот метод открыли в 1882 году. После чего он не изменялся, а только модернизировался. После депарафинизации препарат окрашивают. Чтобы препарат не засыхал его помещают в дистиллированную воду. После чего готовят красители. Раньше гематоксилин и эозин производились в парашках и лаборантам, приходилось разводить краситель спиртом или водой. После они настаивались несколько недель «зрели». Потом технология окраски подбиралась методом проб и ошибок. Сейчас многие фирмы поставляют готовый концентрированный жидкий раствор. Его нужно развести необходимым количеством воды или спирта. Затем, когда красители разведены в чашку Петри помещают препарат. И наливают на него гематоксилин, накрывают часовым стеклом. После экспозиции, препарат помещают в воду из под крана в которую добавили аммиак. После того как гематоксилин посинел на срезе препарат микроскопируют. После этого этапа дифференцировки приступают к окраске эозином. В чистую чашку Петри кладут препарат. На него наносят эозин. И поскольку эозин активный краситель, то у него маленькое время экспозиции. После чего начинается заключительный этап приготовления. Ошибки, которые могут встретиться на этапе окраске. Неравномерное окрашивание Неравномерное окрашивание представляет собой препарат, часть которого окрашена нормально, а другая часть бледная. Это обуславливается тем, что во время процедуры окрашивания гистологического препарата на ткань краситель попал неравномерно. (рис. 6)  Рисунок 6 – Неравномерное окрашивание |