Выпускная квалификационная работа артефакты при изготовлении гистологических препаратов
 Скачать 3.7 Mb.
|
ГЛАВА 1. ГИСТОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ И ТЕХНИКА ИССЛЕДОВАНИЯ1.1 Морфологические исследованияМорфологическое исследование может быть проведено двумя методами — цитологическим и гистологическим. Цитологический метод диагностики предусматривает определение тонкой морфологической структуры клеток и их групп. Материал для цитологического исследования может быть взят путем отпечатка, соскоба с эрозивной, язвенной поверхности или из свищевого хода, а также при помощи пункции из более глубоко расположенных опухолей, лимфатических узлов, кистозных и других полостей и из внутрикостных новообразований. При взятии препаратов-отпечатков прежде всего удаляют гнойный налет и некротические ткани, добиваясь, чтобы эрозивная или изъязвленная поверхность была свободна от них. Затем стерильное, сухое и обезжиренное предметное стекло прикладывают к поверхности эрозии или язвы. В тех случаях, когда эрозии или язвы расположены в труднодоступных местах и взять с них отпечаток затруднительно, производят соскоб. Соскоб с язвенной поверхности лучше всего делать металлическим стоматологическим шпателем или гладилкой, а из свищевых ходов — малой хирургической ложкой. Для пункций опухолей, кист и других образований применяют иглы длиной 6-8 см и достаточной толщины. Если предполагается трепанация кости, пользуются иглами Куликовского или Вира. Аспирацию пунктата осуществляют 5- или 10-граммовыми шприцами. Иглы и шприц должны быть сухими и обезжиренными. Перед пункцией поверхностно расположенные подвижные новообразования или увеличенные лимфатические узлы следует фиксировать большим и указательным пальцами левой руки. При пункции иглу вводят так, чтобы ее конец находился в глубине исследуемого образования. Вращательными и колебательными движениями иглы стараются отделить от массы наибольшие участки ткани, которые можно было бы аспирировать. Аспирацию осуществляют всасывающими движениями поршня, но в полость цилиндра пунктат не засасывают, чтобы не было затруднений в переносе пунктата на предметное стекло, а лишь заполняют им просвет иглы. Делают поршнем несколько всасывающих движений, отсоединяя шприц и приводя в исходное положение поршень после каждого всасывающего движения. Заполнив просвет иглы пунктатом, шприц отсоединяют, а иглу извлекают из тканей. Небольшое количество пунктата наносят на сухое обезжиренное предметное стекло и при помощи другого стекла делают мазок, распределяя пунктат тонким слоем. Затем выбирают одно из двух действий: или препарат немедленно направляют в цитологическую лабораторию, или, если это невозможно, производят его окраску методом Романовского—Гимзы или Паппенгейма, предварительно высушив мазок на воздухе. Основными преимуществами цитологического метода являются его простота и быстрое получение результатов. Недостаток метода состоит в том, что: в ряде случаев трудно трактовать результаты исследования; иногда существует ограниченность участка для взятия материала при пункции. Материал для цитологического исследования берут несколькими способами: Мазок-отпечаток. Сухое обезжиренное предметное стекло прикладывают к поверхности эрозии или язвы. Мазок-перепечаток. Со слизистой оболочки тканей или органов берут материал при помощи кусочка резины кубической формы размером до 1 см3, а затем переносят на предметное стекло. Мазок-соскоб. Содержимое поверхности патологического очага берут ватными тампонами, закрепленными зажимом, шпателем для замешивания цемента или кюретажной ложечкой, а затем равномерным слоем распределяют на предметном стекле. Исследуют промывные воды после серийных полосканий. Срок хранения взятого материала — не более 2 суток, так как нефиксированный материал быстро разлагается. Пункция. Во время пункции возможно получить небольшое количестве клеток для цитологического исследования. Во время выполнения этого вмешательства врач вводит в опухоль тонкую иглу и при помощи шприца забирает небольшое количество материала. После этого полученная ткань (жидкость и содержащиеся в ней клетки) помещается на специальное предметное стекло. Данный метод исследования называется цитологическое исследование (цитология), он дает возможность получить информацию об отдельных клетках, из которых состоит исследованная ткань. Пункция является наименее травматичным методом получения материала для исследования, однако его информативности в некоторых случаях может быть недостаточно. К примеру, отрицательные результаты пункции не всегда означают отсутствие опухолевого роста. Для цитологического исследования также может быть использована слюна, мокрота, моча, жидкость, скопившаяся в брюшной или плевральной полости (асцит или плеврит), а также мазки или смывы из половых путей, дыхательных путей и т.д. Также используют отпечатки с патологических образований (язв, эрозий). В последнем случае предметное стекло прикладывается к интересующей зоне, после чего изготавливается материал, аналогичным образом может быть взят мазок-отпечаток при котором с патологического образования соскребается материал при помощи шпателя, скальпеля или других инструментов. Биопсия — это прижизненное иссечение тканей или органов для микробиологического исследования с диагностической целью. Различают несколько способов забора материала: открытый (иссечение опухоли), закрытый (инцизионный, пункционный, аспирационный). Инцизионный предусматривает удаление всего патологического очага или иссечение небольшого участка. Пункционный способ проводят при помощи специальных или обычных игл и троакаров. Одноразовые системы для автоматической биопсии. Цель аспирационной биопсии — забор материала из полых органов или полостей путем аспирации через инъекционную иглу шприца или с помощью специальных инструментов. Одноразовые системы для автоматической биопсии Биопсия должна проводиться под местным обезболиванием с соблюдением правил асептики. Ткань, взятая для биопсии, должна содержать патологический субстрат и прилегающую к нему неизмененную морфологическую структуру. Материал необходимо зафиксировать в свежеприготовленном растворе нейтрального формалина (1 часть формалина на 4-5 частей воды) или этиловом спирте. Материал транспортируют в лабораторию с сопровождающим документом, в котором указывают ФИО пациента, дату взятия материала, возраст и пол, участок или орган исследования, предполагаемый диагноз, название учреждения, анамнез заболевания, способ забора материала, фамилию врача. В отличие от пункции при проведении биопсии удается получить значительно большее количество опухолевой ткани, данный вид забора материала применяется для получения материала для гистологического исследования материала. В ходе его выполнения можно получить точную информацию о строении опухолевой ткани. В отличие от вышеописанного цитологического исследования результаты данного вида исследования отличаются большей точностью, кроме того, больший объем материала позволяет точнее установить диагноз (например, выявить точный подвид опухолевых клеток), и, в случае наличия необходимости, провести дополнительные иммуногистохимические методы обследования. Несмотря на указанные преимущества, выполнение биопсии является более травматичной процедурой для организма, чем выполнение пункции. В некоторых случаях проведение данного исследования может быть невозможно вследствие наличия высокого риска травматического повреждения близко расположенных к опухоли сосудов, например, при опухолях расположенных в области поджелудочной железы, в связи с чем пункция может быть единственным доступным методом получения материала для исследования. Виды биопсии Биопсия может осуществляться как под контролем зрения врача («на ощупь») так и под контролем специального оборудования, например ультразвукового аппарата или компьютерной томографии. В наиболее сложных случаях, например, при биопсии новообразований, расположенных в головном мозге, используются специальные методы фиксации пациента, препятствующие смещению опухоли при заборе материала (стереотаксическая биопсия). Существуют следующие основные виды биопсии: Трепан-биопсия – забор столбика ткани при помощи полой трубки с заостренным краем. Наиболее часто применяется для биопсии костей и близких к ним по плотности опухолей; Core-биопсия – забор столбика опухолевой ткани из мягких тканей при помощи специальной полой трубки с заостренным краем (толстой иглы). Для этого часто используются системы, напоминающие по своему устройству гарпун. Этот метод нашел очень широкое применение при исследовании новообразований молочной железы и других органов; Щипковая биопсия – получение материала для исследования при помощи специальных щипцов; Инцизионная биопсия – забор для исследования части новообразования. К инцизионной биопсии относится удаление части опухоли; Эксцизионная (тотальная) биопсия – удаление и забор для исследования всего патологического образования. В некоторых случаях при небольших размерах опухоли целесообразным является её полное удаление с последующим проведением гистологического исследования. Если в ходе проведения этого исследования была удалена вся опухоль, этого может быть достаточно для того, чтобы считать пациента излеченным от онкологического заболевания. К эксцизионной биопсии может относиться и удаление опухоли в ходе хирургической операции. Петлевая биопсия – забор материала при помощи специальной петли. Применяется при новообразованиях ЛОР-органов, гинекологии, а также при эндоскопических исследованиях. В качестве примера можно привести петлевую биопсию полипа в толстой кишке. В зависимости от расположения опухоли биопсия может быть выполнена как снаружи через кожу, так и изнутри организма. С этой целью в организм могут вводиться эндоскоп, который представляет собой тонкую гибкую трубку, оснащенную видеокамерой и различными манипуляторами. При помощи эндоскопических методов может быть осуществлена биопсия новообразований, расположенных в просвете желудочно-кишечного тракта (гастроскопия и колоноскопия), например, полипов толстой кишки, бронхов (бронхоскопия), мочевыводящих путей (цистоскопия), грудной клетки (торакоскопия) и брюшной полости (лапароскопия). |