микра. Возбудители кишечных инфекций в двух группах детских яслей трое детей почти одновременно (2024 сентября) заболели
 Скачать 1.3 Mb.
|
|
В инфекционное отделение больницы поступил больной в тяжелом состоянии: сознание спутано, температура 40 С, сильная головная боль. На коже туловища – единичные мелкие розовые пятна (розеолы). Врач поставил клинический диагноз: «брюшной тиф». Обоснуйте с микробиологических позиций выбор материала для исследования и назовите методы микробиологической диагностики брюшного тифа. Перечислите необходимые питательные среды (для студентов МПФ). Ответ: Выбор материала и метод исследования определяются стадией течения болезни. На первой неделе болезни материалом будет кровь пациента, посеянная в желчный бульон с последующим пересевом на деферинциально-диагностические среды (Плоскирева, Левина, висмут-сульфитный агар). На второй неделе болезни материалом для исследования и подтверждения клинического анализа будут являться моча, испражнения и желчь. Методы микробиологической диагностики на 1ой неделе заболевания и на протяжении всего лихорадочного периода: бактериологический метод – посев крови пациента в желчный бульон с последующим пересевом на деферинциально-диагностические среды (Плоскирева, Левина, висмут-сульфитный агар). Методы микробиологической диагностики на 2ой неделе заболевания: • Урокультура и копрокультура – выделение возбудителя из мочи и кала, которые засевают на среды с содержанием желчи; • Серологическое исследование для определения наличия и типа антител в РНГА, которую ставят с O-, H-, Vi-диагностикумами (Положительный – диагностический титр не менее 1:200); • Постановка ИФА – выявление антигенов или антител с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом меткой. Среды: посев культуры на желчный бульон с последующим пересевом на дифференциально- диагностические среды (Эндо, Плоскирева, висмут-сульфитный агар). Больному, поступившему в терапевтическое отделение по поводу обострения хронического колита, на 14-тый день болезни был поставлен клинический диагноз: «дизентерия». Назовите возбудителей бактериальной дизентерии и перечислите методы микробиологической диагностики. Ответ обоснуйте. Ответ: Возбудитель бактериальной дизентерии – Shigella dysenteria. Возбудители: S.dysenteriae; инвазируют слизистую оболочку кишки с последующим межклеточным распространением. Кроме того все шигеллы продуцируют белковые шига и шигаподобные цитоксины, которые поражают эндотелий, следствием чего является появление в кале крови. Методы микробиологической диагностики: Бактериологический метод: для посева отбираются гнойно-слизистые-кровяные образования из средней порции кала. Эти образования высеваются на лактозосодержащие дифференциальные питательные плотные среды. Среди выросших колоний отбираются лактозонегативные, которые идентифицируют до вида и серовара. Серологический метод - постановка РНГА. 70 рабочих одной из строительных фирм были госпитализированы с признаками острой кишечной инфекции. От всех больных были выделены возбудители одного вида – Salmonella enteritidis. Установлено, что все рабочие обедали в одной столовой. Назовите инфекционное заболевание, вызванное обнаруженным видом бактерий. Обоснуйте выбор материала для исследования и назовите метод микробиологической диагностики. Перечислите возможные источники инфекции и предложите способы их выявления. Ответ обоснуй. Ответ: Заболевание – сальмонеллез. Материал и диагностика: Бактериологическому исследованию подвергают рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, желчь, мочу и кровь. Для серологического метода применяют ИФА и РНГА. Источники инфекции и способы их выявления: Так как сальмонеллез - зоонозное заболевание, то источником инфекции могла быть пища животного происхождения (куриные яйца, мясо, молоко). Зараженный продукт устанавливают путем опроса пациентов (чем они питались последние 2 дня). Лабораторному исследованию подвергают смывы с посуды, подозреваемый зараженный продукт. Кишечный иерсиниоз называют «болезнью холодильника». Назовите возбудителя кишечного иерсиниоза и перечислите его факторы патогенности. Расскажите об особенностях этих бактерий. Ответ: Возбудитель кишечного иерсиниоза – Y.enterocolitica. Факторы патогенности: Термостабильный энтеротоксин. Аденилатциклаза и супероксиддимутаза – антифагоцитарная активность; Эффекторные белки секреторной системы 3 типа – неполный фагоцитоз и размножение в фагоцитах. Цитотоксин – повреждение клеток кишечника; Белки инвазины и адгезины. О- и Н- антигены. Особенности: иерсинии – психрофилы, то есть оптимальная температура для размножения этих бактерия 22-25С Inv-ген , обеспечивающий трансцитоз через М-клетки, может быть активен только при температуре ниже 37С (вырабатывается белок, необходимый для взаимодействия с М- клетками). А само распространение микробов в организме возможно только при 37С. Это связано с тем, что именно при этой температуре функцианируют такие гены плазмиды, как PYV (детерминируют синтез цитотоксина, разрушающего клетки стенки кишечника и синтез ТТСС, обеспечивающего незавершенный фагоцитоз и размножение бактерий в фагоцитах). При посеве на среду Эндо испражнений пациента, переболевшего брюшным тифом, был получен рост крупных красных и мелких бесцветных колоний. Расскажите о принципе работы лактозо-содержащих дифференциальнодиагностических питательных сред типа среды Эндо. Охарактеризуйте колонии, которые,вероятно, принадлежат возбудителю брюшного тифа. Назовите исследования, которые необходимо провести для идентификации возбудителя. Ответ обоснуйте. Ответ: Принцип работы лактозо-содержащих дифференциально-диагностических сред типа Эндо (на примере данной среды): такие среды применяются для выделения и первичной идентификации энтеробактерий. В состав их входят, кроме питательной основы, лактоза и основной фуксин, обесцвеченный сульфитом и фосфатом натрия. Правильно приготовленная среда бесцветна или имеет слегка розовый оттенок. Колонии бактерий (кишечная палочка), ферментирующие лактозу, окрашиваются на ней в красный цвет; бактерии, не ферментирующие лактозу (сальмонеллы), остаются бесцветными. Так как Salmonella typhi не ферментирует лактозу, то бесцветные колонии будут принадлежать именно ей. Окрашенные колонии, скорее всего, принадлежат кишечной палочке. Для идентификации необходимы бактериологический и серологический методы. Этапы бактериологического исследования: 1. Посев исследуемого материала на желчный бульон (кровь) или селентиновый бульон для накопления 2. Пересев на плотные питательные среды: Эндо, Плоскирева, Левина, висмут-сульфитный агар: - Бесцветные лактозонегативные колонии на средах Плоскирева, Эндо, Левина - Черные колонии на ВСА 3. Пересев на среды Клингера, цитратный агар Симмонса и другие диф. среды для определения спектра биохимической активности: - На среде Клингера наблюдается: столбик желтый – цвет изменился (глюкоза+), скошенная часть розового цвета – цвет не изменился (лактоза -), почернение нижней части среды (образование H2S+). 4. Постановка РА на стекле с адсорбированными сальмонеллезными сыворотками (поливалентными и моновалентными к О- и H-АГ; поливалентные – для определения серогруппы, моно – для определения серовара) 5. Определение чувствительности к антибиотикам Серологический метод начиная со второй недели: 1. РПГА для определения титра антител в парных сыворотках с О- и Vi-эритроцитарными диагностикумами – положительный результат, 4х кратное нарастание титра АТ (АТ к О- АГ – острый период болезни, АТ к Vi – бактерионосительство). При посеве на среду Эндо испражнений пациента, переболевшего брюшным тифом, был получен рост только крупных красных колоний. Скажите, можно ли на основании полученных результатов утверждать, что данный пациент не является бактерионосителем после перенесенного заболевания. Расскажите о бактерионосительстве при брюшном тифе и причинах его формирования. Назовите микробиологические методы выявления брюшнотифозного носительства. Обоснуйте выбор материала для исследования. Ответ: На основании полученных результатов нельзя утверждать, что пациент не может быть бактерионосителем. Это связано с функциональной недостаточностью макрофагов (сальмонеллы способны размножаться внутри фагоцитов, препятствуя созданию фаголизосомы). Микробиологические методы выявления бактерионосительства: серологический метод – РНГА с Vi-эритроцитарным дигностикумом. Материал: сыворотка крови для РНГА с эритроцитарными сальмонеллезными диагностикумами Из испражнений больного с острой кишечной инфекцией неясной этиологии выделена чистая культура грамотрицательных лактозонегативных палочек. Обоснуйте с микробиологических позиций выбор материала для исследования и азовите методы диагностики острых бактериальных кишечных инфекций. Перечислите этапы бактериологического исследования, которые были проведены в данном случае. Предложите схему дальнейшего исследования. Ответ обоснуйте Ответ: Лактозонегативные грамотрицательные палочки – Шигеллы. Материал, который стоит взять у обследуемых – испражнения, так как шигеллы поражают толстый кишечник, вызывая эрозию его эпителия. Этапы исследования: Для посева отбираются гнойно-слизистые-кровяные образования из средней порции кала. Эти образования высеваются на лактозосодержащие дифференциальные питательные плотные среды. Среди выросших колоний отбираются лактозонегативные. Схема дальнейшего исследования: Среди выросших колоний отбираются лактозонегативные, которые идентифицируют до вида (S.sonnei, S. flexerny, S.dysenteriae, S.boydii) и серовара. В качестве вспомогательного метода используют серологический метод - постановку РНГА. Из крови больного выделена чистая культура грамотрицательных палочек с закругленными концами, образующая на среде Левина гладкие, блестящие бесцветные колонии. При дальнейшем исследовании выделенных бактерий установлено, что они расщепляют глюкозу, образуют сероводород, имеют фермент лизиндекарбоксилазу. Назовите род предполагаемого возбудителя. Перечислите этапы бактериологического исследования, которые были проведены для определения перечисленных выше свойств бактерий. Предложите схему дальнейшей их идентификации. Ответ обоснуйте. Ответ: Данные бактерии имеют бесцветные колонии на среде Левина, что говорит о том, что они не ферментируют лактозу. Также данные бактерии имеют фермент лизиндекарбоксилазу. Значит, это сальмонеллы. Выбор материала и метод исследования определяются стадией течения болезни. На первой неделе болезни материалом будет кровь пациента, посеянная в желчный бульон с последующим пересевом на деферинциально-диагностические среды (Плоскирева, Левина, висмут-сульфитный агар). На второй неделе болезни материалом для исследования и подтверждения клинического анализа будут являться моча, испражнения и желчь. Методы микробиологической диагностики на 1ой неделе заболевания и на протяжении всего лихорадочного периода: бактериологический метод – посев крови пациента в желчный бульон с последующим пересевом на деферинциально-диагностические среды (Плоскирева, Левина, висмут-сульфитный агар). Методы микробиологической диагностики на 2ой неделе заболевания (дальнейшая идентификация): • Урокультура и копрокультура – выделение возбудителя из мочи и кала, которые засевают на среды с содержанием желчи; • Серологическое исследование для определения наличия и типа антител в РНГА, которую ставят с O-, H-, Vi-диагностикумами (Положительный – диагностический титр не менее 1:200); • Постановка ИФА – выявление антигенов или антител с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом меткой. Больному, поступившему в терапевтическое отделение по поводу обострения хронического колита, на 14-тый день болезни был поставлен клинический диагноз: «дизентерия». Назовите возбудителей бактериальной дизентерии и перечислите методы микробиологической диагностики. Ответ обоснуйте. Ответ: Возбудитель бактериальной дизентерии – Shigella dyseteriae. Методы микробиологической диагностики: • Бактериологический метод: для посева отбираются гнойно-слизистые-кровяные образования из средней порции кала. Эти образования высеваются на лактозосодержащие дифференциальные питательные плотные среды. Среди выросших колоний отбираются лактозонегативные, которые идентифицируют до вида и серовара. • Серологический метод - постановка РНГА. У детей младшей группы детского сада через несколько часов после завтрака появились боли в животе, тошнота, рвота, диарея. Установлено, что на завтрак дети ели творог. Врачи поставили клинический диагноз: «пищевая токсикоинфекция». Назовите бактерии, которые могут вызвать «творожную вспышку». Обоснуйте выбор материала для исследования, назовите метод микробиологической диагностики и перечислите основные этапы идентификации выделенной культуры бактерий. Предложите способ выявления источника инфекции. Ответ обоснуйте. Ответ: Предполагаемые бактерии – Salmonella enteriditis, так как её инкубационный период составляет от 2 часов до 3 дней. Микробиологический метод: Бактериологическому исследованию подвергают рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, желчь, мочу и кровь. Посев бактерий на питательные среды с желчью (устойчивы). Далее бактерии помещают на диференциально-диагностические среды: висмут-сульфитный агар (образуют черные-зеленые колонии), Эндо и Левина (бесцветные колонии так как не ферментируют лактозу). Для серологического метода применяют ИФА и РНГА. Источник инфекции можно выявить подвергнув лабораторному исследованию смывы с посуды, подозреваемый зараженный продукт. В инфекционное отделение детской больницы поступил ребенок 6-ти месяцев с температурой 39 С, рвотой, диареей, признаками токсикоза. Установлено, что ребенок находится на искусственном вскармливании. Педиатр поставил клинический диагноз: «острый гастроэнтерит». Испражнения и рвотные массы больного были отправлены на бактериологическое исследование. На дифференциально-диагностических средах, содержащих лактозу, выросли только окрашенные колонии. Назовите предполагаемого возбудителя и расскажите о принципах его классификации. Обоснуйте выбор метода микробиологической диагностики и перечислите основные этапы идентификации выделенной культуры бактерий. Ответ: На дифференциально-диагностической среде выросли окрашенный колонии, что указывает на способность исследуемого микроба ферментировать лактозу. Из возбудителей острых кишечных инфекций на это способны представители рода E.coli категории ЭПКП (энтеропатогенные), так как именно эта категория вызывает у детей (до года) на искусственном вскармливании диарею. Принципы классификации E.coli. Условно-патогенные (микрофлора) Патогенные Парентеральные (инфекции мочевыделительной системы, менингиты, сепсисы). Метод микробиологической диагностики: Материал для исследования – испражнения. Исследуемый материал засевается на дифференциальные лактозо-содержащие среды (Плоскирева, Эндо, Левина). После инкубации при 37С в течение 18 часов отбираются колонии, которые агглютинируют поливалентной ОВ-агглютинирующей сывороткой, которые идентифицируются до вида по биохимическим тестам, с последующим определением их серологического варианта. Серологический метод: РСК или РНГА с сывороткой крови больного. ПЦР. В инфекционное отделение поступил ребенок с клиническим диагнозом «острый гастроэнтерит». В бактериологической лаборатории из испражнений и рвотных масс больного ребенка был выделен возбудитель Escherichia coli (O111: K55). Перечислите группы диареегенных эшерихий и определите, к какой из них относится выделенный возбудитель. Составьте схему микробиологического исследования, которое позволило определить указанный серовар кишечных палочек. Ответ обоснуйте. Ответ: Энтеропатогенные; Энтеротоксигенные; Энтероинвазивные; Энтерогеморрагические Энетроагрегативные. Серогруппы О111 и О55 связаны с ЭПКП. Метод микробиологической диагностики: Материал для исследования – испражнения, рвотные массы. Исследуемый материал засевается на дифференциальные лактозо-содержащие среды (Плоскирева, Эндо, Левина). После инкубации при 37С в течение 18 часов отбираются колонии, которые агглютинируют поливалентной ОВ-агглютинирующей сывороткой, которые идентифицируются до вида по биохимическим тестам, с последующим определением их серологического варианта. Для определения серовара: проводят РСК или РНГА с сывороткой крови больного. ПЦР. В мужчина с клиническим диагнозом: «брюшной тиф». Установлено, что пациент болен в течение 5 дней. При посеве крови больного на плотные питательные среды S.typhi выделить не удалось, а из фекалий пациента на средах Эндо и Левина выделены только лактозоположительные колонии. Укажите на возможные ошибки, допущенные при исследовании крови пациента. Обоснуйте с позиций патогенеза брюшного тифа выбор материала для исследования на разных этапах заболевания. Предложите методы микробиологической диагностики для уточнения |