микра. Возбудители кишечных инфекций в двух группах детских яслей трое детей почти одновременно (2024 сентября) заболели
 Скачать 1.3 Mb.
|
|
Возбудители кишечных инфекций В двух группах детских яслей трое детей почти одновременно (20-24 сентября) заболели шигеллезом. Больные госпитализированы, от всех выделены штаммы вида Shigella sonnei. Важно выяснить, произошло ли заражение детей от одного источника, или одновременное возникновение заболевания является случайным совпадением и источник заражения следует искать вне яслей. Предложите метод выявления источника инфекции. Ответ обоснуйте. Ответ: провести фаготипирование с помощью бактериофагов. Бактерии одного вида, идентично лизирующиеся при взаимодействии с фагами, принадлежат к одному и тому же фаговару. В сельскую больницу из дальнего поселка соседи привезли лесника в очень тяжелом состоянии: сознание спутано, временами бредит, температура 40 С, но при этом отмечается брадикардия, кожные покровы бледные, на коже живота и груди – розеолезная сыпь, печень и селезенка увеличены. При расспросе соседей удалось выяснить, что, вероятно, лесник болен около двух недель. В районной СЭС сообщили, что данная местность считается неблагополучной по брюшному тифу. Врач предположил у больного брюшной тиф. Обоснуйте выбор материала для исследования, чтобы подтвердить клинический диагноз. Перечислите методы микробиологической диагностики. Перечислите необходимые питательные среды (для студентов МПФ). Ответ: Выбор материала и метод исследования определяются стадией течения болезни. В данном случае пациент болен уже 2 недели (по словам соседей). Тогда материалом для исследования и подтверждения клинического анализа будут являться моча, испражнения и желчь. Методы микробиологической диагностики на 2ой неделе заболевания: Урокультура и копрокультура – выделение возбудителя из мочи и кала, которые засевают на среды с содержанием желчи; Серологическое исследование для определения наличия и типа антител в РНГА, которую ставят с O-, H-, Vi-диагностикумами (Положительный – диагностический титр не менее 1:200); Постановка ИФА – выявление антигенов или антител с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом меткой. Среды: посев культуры на желчный бульон с последующим пересевом на дифференциально- диагностические среды (Эндо, Плоскирева, висмут-сульфитный агар). В хирургическое отделение доставлен больной с диагнозом «острый аппендицит». Для дифференциальной диагностики аппендицита от пищевой токсикоинфекции в бактериологическую лабораторию больницы были направлены фекалии больного. При бактериологическом исследовании фекалий обнаружили грамотрицательные средних размеров палочки с закругленными концами, беспорядочно расположенные в мазке, которые не ферментируют лактозу, но сбраживают глюкозу. Назовите бактерии, вызывающие пищевые токсикоинфекции, которые могут иметь перечисленные признаки. Предложите методы идентификации выделенной культуры бактерий. Ответ: Данные бактерии – Сальмонеллы либо шигеллы (ферментируют глюкозу до кислоты и газа, но не ферментируют лактозу). Для Сальмонелл: В первые дни заболевания появляются боли внизу живота схваткообразного характера (гастроэнтероколитический вариант сальмонеллеза), что похоже на симптомы аппендицита. Методы идентификации: Бактериологический – выделение возбудителя из крови, фекалий, рвотных масс, мочи и желчи. При изучении ферментативных свойств, бактерии, ферментирующие глюкозу, но не лактозу, не расщепляющие мочевину, подвижные и выделяющие газ, подозрительны на сальмонеллы. РА (О-сыворотка для О-антигена) и РНГА; Радиоиммунологический метод; Дифференциация внутри рода проводится по антигенной структуре по Кауфману-Уайту (на серогруппы по О-антигену, а на серовары по Н-антигену). Для Шигелл: Материал, который стоит взять у обследуемых – испражнения. Для посева отбираются гнойно-слизистые-кровяные образования из средней порции кала. Эти образования высеваются на лактозосодержащие дифференциальные питательные плотные среды. Среди выросших колоний отбираются лактозонегативные, которые идентифицируют до вида и серовара.. В инфекционную больницу доставлен пациент в тяжелом состоянии с клиническим диагнозом: «холера, алгидный период (обезвоживание 5 степени)». При сборе анамнеза установлено, что накануне больной прилетел из Дагестана. В эпидемиологических целях важно определить биовар возбудителя. Перечислите исследования, которые следует провести для идентификации возбудителя холеры и определения биовара возбудителя. Ответ обоснуйте. Ответ: для идентификации возбудителя следует провести бактериологический метод. Материалом для исследования служат испражнения, рвотные массы, смывы с объектов окружающей среды. Материал засевается на элективную питательную среду, TCBS-агар с последующим субкультивированием на неселективных средах и идентификацией по антигенной структуре и биохимическим свойствам. Для экспресс-диагностики используют РИФ и ПЦР. Дифференциация биоваров холеры проводится по биохимическим свойствам (холерный вибрион ферментирует глюкозу, сахарозу, маннозу, крахмал, лактозу(медленно), не сбраживает рамнозу, арабинозу, дульцит, инозит, инулин) а также способности гемолизировать эритроциты барана, агглютинировать куриные эритроциты, чувствительности к полимиксину и бактерофагам. В одной из московских гостиниц заболел турист, накануне прилетевший из Индии. У больного повысилась температура, появились рвота, боли в животе, частый жидкий стул. Больной госпитализирован с подозрением на холеру. Для проведения противоэпидемических мероприятий необходимо срочно подтвердить диагноз микробиологически. Назовите методы экспресс-диагностики холеры. Перечислите другие методы микробиологической диагностики, которые помогут подтвердить клинический диагноз. Ответ: Для экспресс-диагностики используют РИФ и ПЦР. Для идентификации возбудителя следует провести бактериологический метод – материалом служат испражнения, рвотные массы, смывы с объектов окружающей среды. Материал засевается на элективную питательную среду, TCBS-агар (тиосульфат-цитратный агар с индикатором бромтимоловым синим) с последующим субкультивированием на неселективных средах и идентификацией по антигенной структуре и биохимическим свойствам (ферментирует глюкозу, сахарозу, маннозу, крахмал, лактозу(медленно)). Персонал детского летнего санатория обследуют на носительство шигелл. Расскажите о возбудителях шигеллеза. Назовите материал, который следует взять от обследуемых. Расскажите о правилах взятия, транспортировки и исследования материала для выявления бактерионосительства шигелл. Перечислите методы микробиологической диагностики шигеллеза. Ответ: Немного о шигеллах: Род шигелл (Shigella) включает четыре вида: S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii, S. sonnei. Далее описываются его характеристики, отличные от типичных для энтеробак- терий (см. 96.2) или дополнения к ним. Морфология: • размер 0,5-3 мкм; • капсулу не образуют; • неподвижны. ▪ Культуральные и биохимические свойства: • жидкая среда обогащения – селенитовый бульон; Культуральные свойства: Культивируются на простых питательных средах. На плотных средах образуют мелкие, блестящие, полупрозрачные колонии; на жидких – диффузное помутнение. Биохимические свойства: Отсутствие газообразования при ферментации глюкозы; Отсутствие продукции сероводорода; Ферментация лактозы не ранее 72ч. Антигенная структура: • соматический О-антиген (определяет серовар); • капсульный К-антиген – только у S. sonnei; • жгутиковый H-антиген отсутствует. ▪ Факторы патогенности: • факторы адгезии и колонизации (белки наружной мембраны, пили IV типа); • факторы инвазии (белки-инвазины, белки внутриклеточного распространения): - кодируются крупной плазмидой инвазии; - обеспечивают проникновение внутрь клеток и их повреждение; - вызывают апоптоз макрофагов; • экзотоксины (цитотоксины – токсины Шига у 1-го серовара S. dysenteriae и шига- подобные токсины у остальных шигелл): - соединяясь с рибосомой, блокируют синтез белка в клетке, вызывая ее гибель; - шигаподобные токсины поражают только стенку кишечника; - токсины Шига выходят в кровь; • эндотоксин (липополисахарид) – вызывает общую интоксикацию. Патогенез: Шигеллы вызывают шигеллезы (бактериальные дизентерии). – антропонозные заболевания с фекально-оральным путем передачи. При шигеллезе поражается толстый кишечник с развитием колита и интоксикацией. По этапам: 1. Шигеллы взаимодействуют с эпителием толстой кишки ( по 3 типу); 2. Проникнув через М-клетки с помощью белков-инвазинов в подслизистую, шигеллы взаимодействуют с макрофагами, вызывая у тех апоптоз; Выделяется IL-8 и IL-1 (при гибели макрофагов), которые вызывают восполительный процесс подслизистой; 3. После апоптоза макрофагов бактерии получают доступ к базальной стороне эпителиальной клетки, что влечет за собой межклеточное распространение шигелл; 4. При гибели шигелл выделяются шига и шига-подобные токсины, блокирующие синтез белка в клетках организма. Их действие вызывает появление крови в испражнениях. Иммунитет: IgA, предотвращающий адгезию и интраэпителиальные лимфоциты, уничтожающие шигеллы. Материал и исследование: Материал, который стоит взять у обследуемых – испражнения. Для посева отбираются гнойно-слизистые-кровяные образования из средней порции кала. Эти образования высеваются на лактозосодержащие дифференциальные питательные плотные среды. Среди выросших колоний отбираются лактозонегативные, которые идентифицируют до вида и серовара. Методы бактериологической диагностики: Бактериологический метод (материал – испражнения) и серологический метод - постановка РНГА. Правила взятия и транспортировки материала: Забор материала для бактериологических исследований должен осуществляться до начала лечения этиотропными средствами, 3-х кратно с интервалом 6-8 ч. Для исследования предпочтительнее брать материал c комочками слизи или гноя, без примеси крови, в связи с ее бактерицидными свойствами. Забор испражнений (2-3 г) производится деревянным шпателем или стеклянной палочкой из судна, горшка, специального лотка, а также из прямой кишки металлической петлей или через трубку ректороманоскопа. В судне или горшке не должно оставаться следов дезинфицирующего средства, для чего их необходимо тщательно промыть горячей водой. Испражнения для посева забирают сразу после дефекации (лучше последние порции, т.к. они поступают из верхних отделов кишечника и содержат больше возбудителей). Для забора материала петлей больного просят лечь на бок с приведенными к животу бедрами. Ладонями разводятся ягодицы. Петля осторожным движением вводится в задний проход на глубину 5-6 см и также осторожно вынимается. Материал для бактериологического исследования помещается в стерильные пробирку или баночку и направляется в лабораторию в первые 2 ч после получения. При невозможности своевременной доставки он помещается в холодильник (2-6 оС) и направляется на исследование не позднее 12 ч после забора. Лучше всего сразу же сделать посев материала на питательную среду (бактоагар Плоскирева, Эндо, Левина). При невозможности посева в первые часы можно использовать консерванты или среды обогащения (селенитовый бульон). В гостинице «Космос» поселился турист, прилетевший из Индонезии. На следующий день после приезда он обратился к врачу с жалобами на слабость, рвоту, боли в животе, частый жидкий стул типа «рисового отвара». При микроскопии в рвотных массах больного были обнаружены грамотрицательные слегка изогнутые палочки. Врач заподозрил холеру. Расскажите об особенностях возбудителя холеры. Перечислите методы микробиологической диагностики холеры и обоснуйте выбор каждого из них для подтверждения клинического диагноза у описанного больного. Ответ: Особенности холерного вибриона: Морфология: • грамотрицательные палочки, слегка изогнутые или прямые, размером 2-4 мкм; • в мазках располагаются параллельно, напоминают «стаи рыб»; • спор не образуют; • очень подвижны (монотрихи); • капсулу не образуют. Культуральные свойства: • факультативные аэробы с предпочтением аэробных сред; • хорошо растут на простых питательных средах с щелочной реакцией; • для оптимального роста требуют наличия в среде 0,5% NaCl (галофиты); • элективная среда – TCBS-агар, среда накопления – пептонная вода с 1% NaCl; • на твердых средах образуют небольшие прозрачные S-колонии и неровные мутные R-колонии; • в жидких средах образуют голубоватую пленку на поверхности. ▪ Биохимические свойства: • ферментируют углеводы с образованием кислоты; • не образуют H2S, но образуют индол; • имеют оксидазу, восстанавливают нитраты; • обладают протеолитическими свойствами, разжижают желатин воронкой; • холерный вибрион ферментирует глюкозу, сахарозу, маннозу, крахмал, лактозу(медленно), не сбраживает рамнозу, арабинозу, дульцит, инозит, инулин. Антигенная структура: • соматический О-антиген – более 200 серогрупп, две из них – возбудители холеры: - О1 – имеет три компонента (А, В, С), которые комбинируются в 3 серовара; - О139 – не чувствительны к фагам группы V, хотя относятся к биовару Эль-Тор; • жгутиковый Н-антиген – общий для рода; • капсульный К-антиген отсутствует; Факторы патогенности: • пили IV типа (адгезия) и жгутики (колонизация); • ферменты инвазии (фибринолизин, гиалуронидаза); • эндотоксин (липополисахарид КС); • растворимая гемагглютининпротеаза (открепляет возбудителя от поверхности кишечника деструктивным действием на рецепторы, что позволяет бактериям инфицировать новые участки кишечника). • экзотоксин (холероген) – цитотоксический эффект, активация аденилатциклазы (повышение уровня цАМФ и нарушение водно-солевого обмена): - субъединица А состоит из цепи А1 (собственно токсин) и А2 (связывает А и В); - субъединица В облегчает проникновение в эпителий субъединицы А. Методы бактериологической диагностики холеры: Для идентификации возбудителя следует провести бактериологический метод. Материалом для исследования служат испражнения, рвотные массы, смывы с объектов окружающей среды. Материал засевается на элективную питательную среду, TCBS-агар с последующим субкультивированием на неселективных средах и идентификацией по антигенной структуре и биохимическим свойствам. Постановка РА с сыворотками О1 и О139 – положительная реакция с одной из сывороток докажет, что это холерный вибрион. Для экспресс-диагностики используют РИФ (положительная реакция с сывороткой докажет, что это холерный вибрион) и ПЦР. От девяти больных, проживающих в соседних поселках области, неблагополучной по брюшному тифу, была выделена гемокультура Salmonella typhi. Этот же вид возбудителя был обнаружен в колодезной воде одного из поселков. Предложите способ определения возможной идентичности культур S.typhi, выделенных от больных и из воды колодца. Ответ обоснуйте. Ответ: фаготипирование с помощью бактериофагов. Бактерии одного вида, идентично лизирующиеся при взаимодействии с фагами, принадлежат к одному и тому же фаговару. Либо серологический метод. Проживающие в поселках могут быть просто носителями брюшного тифа с развитой резистентностью, а другие могли выпить воду из зараженного колодца. Серологический метод покажет идентичность данных культур S.typhy. Больной Н., 20 лет, поступил в инфекционное отделение больницы с жалобами на головную боль, повышенную температуру тела, частый стул с прожилками крови, тенезмы. Врач поставил диагноз: «дизентерия». Назовите возбудителей бактериальной дизентерии. Перечислите методы микробиологической диагностики шигеллеза и расскажите о правилах взятия материала и особенностях постановки диагноза при бактериологическом исследовании. Перечислите необходимые питательные среды (для студентов МПФ). Ответ: Возбудителем бактериальной дизентерии являются шигеллы. Возбудители: S.dysenteriae; S.sonnei; S.flexneri инвазируют слизистую оболочку кишки с последующим межклеточным распространением. Кроме того все шигеллы продуцируют белковые шига и шигаподобные цитоксины, которые поражают эндотелий, следствием чего является появление в кале крови. Для посева отбираются гнойно-слизистые-кровяные образования из средней порции кала. Эти образования высеваются на лактозосодержащие дифференциальные питательные плотные среды. Среди выросших колоний отбираются лактозонегативные, которые идентифицируют до вида и серовара. Забор материала для бактериологических исследований должен осуществляться до начала лечения этиотропными средствами, 3-х кратно с интервалом 6-8 ч. Для исследования предпочтительнее брать материал c комочками слизи или гноя, без примеси крови, в связи с ее бактерицидными свойствами. Забор испражнений (2-3 г) производится деревянным шпателем или стеклянной палочкой из судна, горшка, специального лотка, а также из прямой кишки металлической петлей или через трубку ректороманоскопа. В судне или горшке не должно оставаться следов дезинфицирующего средства, для чего их необходимо тщательно промыть горячей водой. Испражнения для посева забирают сразу после дефекации (лучше последние порции, т.к. они поступают из верхних отделов кишечника и содержат больше возбудителей). Для забора материала петлей больного просят лечь на бок с приведенными к животу бедрами. Ладонями разводятся ягодицы. Петля осторожным движением вводится в задний проход на глубину 5-6 см и также осторожно вынимается. Материал для бактериологического исследования помещается в стерильные пробирку или баночку и направляется в лабораторию в первые 2 ч после получения. При невозможности своевременной доставки он помещается в холодильник (2-6 оС) и направляется на исследование не позднее 12 ч после забора. Лучше всего сразу же сделать посев материала на питательную среду (бактоагар Плоскирева, Эндо, Левина). При невозможности посева в первые часы можно использовать консерванты или среды обогащения (селенитовый бульон). Необходимые питательные среды: плотные среды Плоскирева, Эндо, Левина, Клиглера. |