|
Методические указания к лабораторно-практическим занятиям по ветеринарной токсикологии
Учебно-методическое пособие составлено в соответствии с программой по токсикологии. Содержит развернутые планы лабораторно-практических занятий по основным темам ветеринарной токсикологии, информационный материал по отравлению животных ядовитыми веществами в соответствии с темой, препаратам для лечения отравления с примерами рецептов, описание лабораторных работ по теме и задания для программированного контроля.
Предназначено для самостоятельной и аудиторной работы студентов факультета ветеринарной медицины.
Содержание:
Методы ХТА
Общие вопросы токсикологии.
Отравление животных поваренной солью.
Отравление животных соединениями азота (нитратами и нитритами, мочевиной).
Отравления животных солями тяжелых металлов.
Отравления животных ФОП.
Отравления животных производными карбаминовой кислоты.
Отравления животных пиретроидами.
Список тем по токсикологии для самостоятельного изучения.
Ситуационные задачи .
Список препаратов для лечения отравлений животных.
Список рекомендуемой литературы.
Целью курса "Ветеринарная токсикология" является изучение влияния токсических веществ на организм животных, рыб и пчел, на их продуктивность, воспроизводительную функцию и санитарные качества продуктов животноводства.
Изучение ветеринарной токсикологии базируется на теоретических, общебиологических и клинических дисциплинах: физике, химии, ботанике, зоологии, анатомии, физиологии, микробиологии, зоогигиене, фармакологии, клинической диагностике, терапии, ветеринарно-санитарной экспертизе и др.
Курс "Ветеринарная токсикология" включает два раздела: общая и частная токсикология.
В ходе изучения токсикологии студенты изучают историю и перспективы развития ветеринарной токсикологии, классификацию и свойства ядов, причины и условия, способствующие отравлениям, принципы диагностики, лечения и профилактики отравлений.
Студенты, изучившие токсикологию, должны знать:
1.Закономерности возникновения и проявления отравлений в зависимости от природно-географических и социально-экономических условий.
2.Классификацию основных групп токсических веществ, методы диагностики отравлений и принципы лечения.
1.Диагностировать различные виды токсикозов по клиническим симптомам и патологоанатомическим изменениям.
2.Составлять протокол вскрытия отравленных животных.
3.Правильно отбирать пробы кормов, органов и тканей для химико-токсикологического анализа.
4.Составлять сопроводительную документацию для ХТА.
5.Определять основные токсические вещества в корме и патматериале с помощью экспресс-методов.
6.Составлять заключение о причине отравления животных.
7.Рекомендовать хозяйствам схему лечения отравленных животных.
8.Проводить ветеринарно-санитарную экспертизу продуктов животного происхождения.
Тема №1 Методы ХТА
Вопросы для самостоятельной подготовки к
1.План диагностических мероприятий при отравлениях животных.
2.Цели и задачи ХТА.
Правила отбора проб корма и патологического материала для ХТА.
Сопроводительная информация для ХТА.
Первичная обработка патологического материала в токсикологической лаборатории.
Порядок ведения документации ХТА и оформление заключения.
Методы извлечения ядовитых веществ из пробы патматериала.
8.Методы обнаружения и количественного определения ядовитых веществ.
Порядок ведения документации ХТА и оформление заключения.
Химикотоксикологический анализ (ХТА) – это комплексное исследование патологического материала на присутствие в нем ядовитых веществ. В качестве патологического материала рассматриваются объекты среды обитания животного (корм, вода, воздух, почва и др.), а также ткани животного, пострадавшего от отравления.
Целью ХТА является качественное и количественное обнаружение ядовитого вещества в патологическом материале, выявление причины отравления.
Задачи ХТА
Постановка диагноза при отравлениях.
Рекомендации о пригодности кормов и продуктов питания животного происхождения (мясо, яйца, молоко ).
ХТА проводится врачом - токсикологом в условиях токсикологической лаборатории. Иногда первичный ХТА проводится непосредственно в хозяйстве.
Этапы диагностики отравления
Диагноз на отравление ставиться комиссионно с учетом:
анамнеза отравления;
2.анализа симптомов отравления;
результатов ХТА
результатов вскрытия.
Правила отбора патологического материала для ХТА.
При отравлениях животных в лабораторию отсылаются пробы корма, воды, растений, собранных на пастбище, содержимое ЖКТ, кусочки тканей животного ( печени, почек, мышц, сердца и др.).
Метод квадратирования – составление среднего образца из исходного материала для анализа.
Материал(зерно, мука, сено, измельченные корнеплоды и др.) рассыпать на ровной поверхности в виде квадрата.
Разделить квадрат диагоналями на 4 треугольника.
С помощью двух дощечек или руками отделить и убрать 2 противоположных треугольника.
Из оставшихся двух треугольников вновь разровнять квадрат и повторить выделение двух треугольников до тех пор, пока не образуется требуемое для анализа количество исследуемого материала ( средний образец) 0,5-1 кг.
Пробы сухих кормов надо отбирать из нескольких точек склада в количестве 3-4 кг. Пробы перемешать в виде квадрата на ровной поверхности. Квадрат разделить двумя диагоналями на четыре треугольника. Из полученных треугольников отобрать среднюю пробу 0,5-1 кг.(метод квадратирования).
Пробы мяса, колбасы и др. пищевых продуктов завернуть каждую отдельно в пергаментную бумагу и в новый полиэтиленовый пакет.
Пробы растений на пастбище срезать серпом или ножом, или выкопать с корнем ( землю с корней отряхнуть). Выбор растений по 3-5 штук в 1 точке проводить по определённой схеме:
1.По диагонали поля в 10 точках;
По двум смежным сторонам поля в 2-3 точках на каждой стороне поля на расстоянии 5, 10 и 15 метров от края поля.
Средняя проба зеленой массы должна быть приблизительно 3 кг. Среднюю пробу измельчить, перемешать и выбрать средний образец 0,5-1кг методом квадратирования.
Пробы корнеплодов ( картофель, свекла, морковь и др.) выбирают горстью или пробоотборником из верхнего, среднего и нижнего слоев хранилища (бурта) в количестве 5-7 кг. Пробу разделить на четыре части, взять одну часть, перемешать, измельчить и выбрать средний образец 0,5-1 кг.Для некоторых анализов (например для обнаружения дитиокарбаматов) овощи и фруты нельзя разрезать, и потому их посылают целиком.
Пробы соломоподобного материала брать горстью или пробоотборником из трех разных мест стога в количестве приблизительно 2кг. Измельчить, перемешать и выделить средний образец 0,1-0,2кг.
Пробы тканей от вынужденно убитых и павших животных:
1.пораженная часть желудка с содержимым 0,5кг,
2. кишечника 0,5кг,
3.часть печени с желчным пузырем,
почку,
5.скелетную мускулатуру 0,5кг,
внутренние органы 0,5кг.
От мелких животных и птиц посылают целые органы или трупы.
Пробы патологического материала от заболевших животных:
кровь :20мл
моча :0,5л
кал, рвотные массы :0,3-0,5кг.
молоко: 0,5 л
яйца : 20 штук
Упаковка проб
Подготовленные пробы надо поместить в стеклянную банку с притертой пробкой или новый полиэтиленовый мешочек, плотно закупорить, опечатать сургучной печатью или опломбировать.
На банку (или пакет) наклеить этикетку, содержащую следующую информацию :
наименование материала и его количество,
указание фамилии специалиста, отбиравшего пробу.
Пробу патологического материала и корма отослать в лабораторию с сопроводительным документом.
3.Образец сопроводительного документа.
Сопроводительная информация для ХТА
В областную ветеринарную лабо-
раторию, химико-токсикологический отдел : г. Люберцы, пер . Яндовищенский, 20
Для ХТА направляются пробы патологического материала в 5 (пяти) опечатанных стеклянных банках с притертыми пробками.
В качестве патологического материала представлены ткани трупа свиньи и пробы оставшегося корма.
Свинья №35 принадлежала учхозу №1, г. Люберцы, ул Гагарина 6 .
Заболела 12.02.05г. Клинические признаки отравления: беспокойство, жажда, судороги, шаткая походка, круговые движения, понос, цианоз слизистых и кожи, частое мочеиспускание, атаксия.
Пала 13.02.05г.
Опись содержимого банок :
Банка №1 – части желудка и кишечника с содержимым.
Банка №2 - части печени, желчного пузыря, почек, легких, сердца.
Банка №3 -части головного и спинного мозга.
Банка № 4-части скелетных мышц.
Банка №5 – проба оставшегося корма.
Заключение по ХТА просьба выслать по адресу: г. Люберцы, ул Гагарина 6 ,
гл.ветврачу УЧХОЗА №1, Кортеву Н.Н.
Приложение:
Пять банок с патологическим материалом.
Копия истории болезни животного (свиньи №35).
Копия протокола патолого-анатомического вскрытия.
Описание условий, в которых произошла гибель животного.
Подозреваемое вещество – как причина отравления- поваренная соль?
Всего____________6 листов.
Дата отправки патологи- Подпись ответственно-
ческого материала. го лица:
13.02.2005г. Гл.ветврач Учхоза №1
4.Первичная обработка патологического материала в токсикологической лаборатории
В лаборатории поступивший патологический материал вскрывают, регистрируют в журнале в соответствии с сопроводительным документом .
Отмечают :
1.Дату поступления;
Кем направлен образец;
Место и дату отбора образца;
4.Наименование пробы и её характеристику ( вид, масса, возможное загрязнение при транспортировке);
Подпись лица, принявшего образец.
После гегистрации образец разделяют на три части.
Первая часть используется для основного анализа;
Вторая часть- для дополнительного исследования;
Третья часть опечатывается и оставляется на хранение. Эта часть служит для контроля.
В лаборатории к исследованию приступают в тот же день. При необходимости пробы сохраняют в холодильнике , но не более 3 суток от даты взятия материала. Пробы патматериала косервируют спиртом.
Навески зерна и крупы измельчают на кофемолке, внутренних органов-на мясорубке, или гомогенизаторе, овощей и трав-ножницами.
ХТА начинают с определения того токсического вещества, которое подозревается в качестве причины отравления (что указано в сопроводительной информации)
При отравлении веществами неизвестного происхождения пробы патологического материала исследуют качественными реакциями для определения присутствия отдельных групп ядовитых веществ. Если реакция будет положительной, то проводят количественный анализ.
При острых отравлениях в первую очередь исследуют содержимое желудочно-кишечного тракта, при хронических отравлениях - паренхиматозные органы.
1.Методы извлечения ядовитых веществ из патологического материала и корма
Существуют три основных метода извлечения ядов:
Извлечение легколетучих химических соединений ( цианидов, формальдегида, фенола, ФОС, ХОС и др.)
Навеску измельченного патологического материала поместить в стеклянную колбу, залить водой. Через полученную смесь в перегонном аппарате пропускается водяной пар от парообразователя с последующим его охлаждением. В дистилляте определяют ядовитые вещества.
Экстракция жидкостями (водой, ацетоном, хлороформом и др.). Проба патматериала измельчается, заливается в соотношении 1:2 одним или несколькими растворителями. Экстракция проводится различными вариантами.
А) пассивная экстракция в течение 20-24 часов;
Б) перемешивание в шюттель-аппарате ( регулярное покачивание) в течение 1-2 часов;
В) перемешивание в течение нескольких минут в устройствах с большой скоростью вращения (аппарат Соксклета, ультраторакс, омнимиксар и др.).
При любом способе экстрагирования в экстракт кроме ядов переходят примеси, мешающие обнаружению яда: белки, жиры, пигменты, соли и др. Их удаляют различными способами: осаждение, вымораживание, омылениеи др. После этого экстракт концентрируется путем удаления экстрагента: выпаривание в токе воздуха в вытяжном шкафу при комнатной температуре, выпаривание с использованием вакуумных испарителей. Конечный объем экстракта составляет 0,5-5 мл.
Извлечение соли, пиретроидов, нитратов, алкалоидов.
а) термическая: сжигание в муфельной печи и исследование зольного остатка;
б) химическая : обработка серной, соляной кислотами , пергидроля и др.
Извлечение металлов и металлоидов.
2. Методы обнаружения и идентификации ядов
1) Колориметрия При взаимодействии молекул ядовитого вещества и вещества индикатора образуется цветной комплекс. По интенсивности цвета определяют количество яда с помощью ФЭК или СФ.
2) Титрометрия (применяется для определения хлорида натрия).
Проводится титрование иона хлора раствором нитрата серебра в присутствии хромата калия в качестве индикатора.
2.2 Физико-химические методы
Тонкослойная хроматография.
На хроматографической пластинке определяется размер и скорость продвижения пятна от нанесенного образца патологического материала, которые сравнивают со стандартным раствором. Метод полуколичественный.
Газовая или газо-жидкостная хроматография.
Экстракт из патологического материала пропускается с помощью инертного газа-носителя через стеклянную колонку, заполненную порошкообразным веществом – индикатором. На выходе колонки детектор регистрирует результат взаимодействия компонентов в виде идентификации яда и его количества.
Оба метода используют для определения многих пестицидов (ФОС, ХОС, карбаматов, пиретроидов и др.), алкалоидов, микотоксинов.
Извлечения из патологического материала вводят различными путями лабораторным животным и насекомым. Примеры.
а) Для обнаружения ядов-исектицидного действия в чашку Петри с экстрактом ядовитого вещества поместить 20-30 комнатных мух (мух-дрозофил, личинок комаров). Через определенное время подсчитывают число погибших мух.
б) Для обнаружения ядов-гликозидов нанести каплю экстракта ядовитого вещества на изолированное сердце лягушки. При наличии токсической дозы сердечных гликозидов происходит остановка сердца в систоле .
в) Для обнаружения ядов фитотоксинов после введения экстракта ядовитого вещества внутрь мыши наблюдают за характерной симптоматикой отравления животного ( например, судороги- при отравлении вехом ядовитым).
г) Для обнаружения ядов-алкалоидов при закапывании в глаз кошке экстракта патологического материала анализируют изменение величины зрачка :например, при отравлении атропином (мидриаз) или пилокарпином (миоз).
Д)Для обнаружения ядов-микотоксинов ( для некоторых видов микотоксинов характерно дерматотоксическое действие) экстракт втирают в депилированные участки кожи кролика, или добавляют в аквариумную воду с рачками- дафниями, рыбами.
Биологические методы применяют для оценки общей токсичности кормов для животных.
При диагностике фитотоксикозов важное значение имеет определение вида ядовитого растения. Для этого производится ботанический анализ растительного корма животных.
А) На пастбище методом отбора среднего образца и идентификации ядовитых растений в естественных условиях их произрастания оценивается степень засорённости пастбища ядовитыми растениями и возможность отравления животных.
Б) При стойловом содержании анализируется сено в местах хранения и остатки растительного корма в кормушке. Ботанический анализ при этом проводится невооруженным глазом и, а также с помощью лупы и микроскопа. По характерным морфологическим признакам ( вид, цвет, запах листьев, стеблей, цветов, корней, семян) определяется видовая принадлежность ядовитых растений .
В) У крупного рогатого скота ботаническому исследованию подвергается сожержимое желудка, т.к. в рубце части растений бывают крупными, малоразжеванными и доступными для анализа. Для улучшения распознавания растений надо поместить их в сосуд с водой для расправления.
Следующим этапом анализа при фитотоксикозах является извлечение и идентификация биологически-активных веществ в растениях, которые определяют тип токсического эффекта ( алкалоиды, гликозиды, эфирные масла и др.)
Определение степени угнетения жизненно- важных ферментов. Наиболее часто применяется ферментный метод для определения ядовитых веществ группы ФОС и производных карбаминовой кислоты. Оценивается в % степень угнетения фермента ацетилхолинэстеразы, которая пропорциональна содержанию ядов в патматериале в мг/кг.
2.6 Микробиологические методы
Используются для обнаружения и идентификации грибков, поражающих корм для животных. Зерно или соломоподобный корм в стерильном боксе высевают в чашках Петри на соответствующей питательной для грибка среде. После термостатирования визуально оценивают характер роста грибов, а после окраски и микроскопирования определяют видовую принадлежность грибов.
6.Порядок ведения документации ХТА и оформление заключения
При проведении ХТА все выполняемые операции регистрируются в рабочем журнале в хронологической последовательности. В конце исследования составляется акт ХТА, который является юридическим документом.
Образцы патологического материала сохраняют на холоде до конца анализа и вручения результатов по адресу. После этого образцы уничтожаются.
Практическая работа
Освоение навыков отбора проб патологического материала и корма, упаковки, составления сопроводительной информации для ХТА.
Экскурсия в ветеринарную химико- токсикологическую лабораторию.
Цель экскурсии: Знакомство с порядком приема патологического материала для ХТА в лаборатории; оформлением документации, техникой проведения анализов, техникой безопасности при работе с ядовитыми веществами.
Вопросы программированного контроля знаний по теме.
| | |
1.Какая жидкость может быть использована для сохранения от разло-жения патологического материала для ХТА?
| |
2. В каком количестве отбирается проба тканей кишечника с содер-жимым для ХТА от погибших отравленных животных ?
| |
3. С помощью каких методов при ХТА проводится извлечение ядовитых веществ группы тяжелых метал-лов из патматериала?
|
3.1 отгонка водяным паром
3.2 фильтрация
3.3 минерализация
3.4 экстрагирование
|
4. Какой метод ХТА относится к физико-химическим?
|
титрометрия
тонкослойная хроматография
4.3 фотоколориметрия
|
5.На каких видах насекомых проводится исследование токсич-ности патматериала?
|
| | |
6.1 Постановка диагноза при отравлениях.
6.2 Рекомендации о пригодности кормов и продуктов питания животного происхождения.
6.3 Рекомендации о лечении животного.
|
7.Диагноз на отравление ставится с учетом:
|
7.4.клинической картины интоксикации;
7.5информации об условиях содержания, режима кормления,
лечебно- профилактических мероприятиях, предшествующих
отравлению (вакцинация, дегельментизация, дезинфекция и др.);
7.6 все ответы правильные.
|
8. Основной метод отбора среднего образца для ХТА
|
Метод просеивания через сито.
Метод квадратирования.
8.3 Метод средней арифметической.
|
9.При отравлении вехом ядовитым у животных отмечается специфический запах (изо рта, при проколе рубца, от мочи):
|
9.1 запах петрушки;
9.2 запах миндаля;
9.3 запах скипидара.
|
10. При отравлении какими растениями закапывание в глаз кошке экстракта патматериала вызывает мидриаз?
|
10.1 Растения, содержащие алкалоиды группы атропина ( красавка, дурман);
10.2 Растения, содержащие алкалоиды группы кофеина ( чайный куст, кофейное дерево);
10.3 Растения, содержащие сердечные гликозиды ( ландыш, горицвет весенний).
|
Тема №2 Общие вопросы токсикологии
Вопросы для самостоятельной подготовки к занятию
Предмет и задачи ветеринарной токсикологии. Основные разделы общей и частной токсикологии. Связь токсикологии с другими науками. Факторы, определяющие опасность яда.
История развития токсикологии. Роль отечественных и зарубежных ученых в развитии токсикологии. Значение работ Н.А. Сошественского, И.А. Гусынина, С.В.Баженова.
Основные понятия токсикологии: ядовитое вещество, токсичность, отравление, токсическая доза. Классификация ядов и отравлений.
Параметры токсикометрии: (ПДК, КВИО, СЛ50, МДУ); определение , единицы измерения, значение для оценки токсичности ядовитых веществ.
Токсикокинетика ядовитых веществ; закономерности всасывания, распределения, биотрансформации и выделения ядов у животных. Понятие о кумуляции и летальном синтезе.
Токсикодинамика ядовитых веществ: механизм действия, виды действия, эффекты при совместном и повторном введении ядов.
Основные клинические синдромы при острых отравлениях животных.
Эндо- и экзогенные факторы, определяющие степень токсичности ядов для животных.
Общие принципы лечения отравлений у животных; характеристика средств специфической и неспецифической терапии отравлений.
Основные правила хранения, транспортировки, учета, отпуска, и применения ядохимикатов.
Ветеринарно-санитарная экспертиза продуктов убоя животных при отравлениях; понятие об МДУ и сроках ожидания.
12. Пестициды: определение, классификация по химической принадлежности, целям применения и токсичности.
13. Общие принципы профилактики отравлений животных, птиц, рыб и пчел.
Химико-токсикологический контроль за качеством кормов, пастбищ и воды для животных
Информационный материал
|
Скачать 2 Mb.