Биохимия лактации. Биохимия лактации
 Скачать 278.5 Kb.
|
|
VI.2. ТЕМА 2: БИОХИМИЯ МОЛОКА. БЕЛКИ И ФЕРМЕНТЫ МОЛОКА Работа №1. Разделение и обнаружение казеина, альбумина и глобулина молока Принцип метода: При подкислении среды белки молока (α-, β- и γ-казеины, молочные альбумины и глобулины) выпадают в осадок. Ход работы: в пробирку наливают около 1 мл молока и 2-3 мл воды. Перемешивают и добавляют по каплям раствор 1% уксусной кислоты до прекращения выпадения осадка хлопьевидного казеина (в избытке осадок растворяется). Содержимое пробирки фильтруют в другую пробирку и промывают осадок на фильтрате 2–3 мл воды (фильтрат №1). На фильтрате остается осадок казеина, который включает в свой состав и липиды молока. Осадок фильтрата переносят в пробирку и обрабатывают 5 мл 1% р–ра гидроксида натрия, после чего отфильтровывают липиды молока (они задерживаются на фильтре) (фильтрат №2). Фильтрат №2 делят на две части и проводят биуретовую реакцию и реакцию с молибденовым реактивом на наличие в нем белка казеина, который является фосфопротеидом и содержит в своем составе молекулы ортофосфорной кислоты. К фильтрату №1 добавляют 2–3 капли раствора соды (до слабо–кислой реакции на лакмус) и кипятят. Выпадает осадок молочных альбуминов и глобулинов. ВЫВОД по результатам исследования: Работа №2. Определение ферментов молока Свежее некипяченое и непастеризованное молоко содержит большую группу ферментов, свойственным другим биологическим жидкостям. Некоторые из этих ферментов (пероксидазу) используют для определения: молоко пастеризованное или не подвергалось термической обработке. а) определение пероксидазы по реакции с йодистым крахмалом Принцип метода: метод основан на разложении перекиси водорода ферментом пероксидазой, содержащейся в молоке и молочных продуктах. Освобождающийся при разложении перекиси водорода активный кислород окисляет йодистый калий, освобождая иод, образующий с крахмалом соединение синего цвета. При отсутствии фермента пероксидазы в молоке и молочных продуктах цвет содержимого пробирки не меняется. Из этого следует, что молоко и молочные продукты подверглись пастеризации при температуре не ниже 80°С. Чувствительность метода высока и позволяет обнаружить добавление не менее 5% непастеризованных продуктов к пастеризованным. Ход работы: в пробирку наливают 5 мл молока, 5 капель р-ра иодистокалиевого крахмала и 5 капель 0,5% р-ра перекиси водорода, содержимое пробирки перемешивают и наблюдают за изменением окраски смеси. ВЫВОД по результатам исследования: б) определение пероксидазы бензидиновой пробой Принцип метода: основан на способности бензидина (бурая окраска) окисляться в дифенохинондимин (сине-зеленый цвет) в присутствии перекиси водорода под действием фермента пероксидазы, содержащейся в некипяченом молоке. Ход работы: к 5 мл молока добавляют 1-2 капли раствора бензидина, 1 мл 2% р-ра перекиси водорода и следят за изменением окраски смеси. ВЫВОД по результатам исследования: Работа № 3. Реакция Умикова на отличия женского молока от коровьего Принцип метода: женское молоко при нагревании до 60°С с аммиаком окрашивается в фиолетовый цвет. Эта реакция специфична только для женского молока. Интенсивность окраски зависит от периода лактации: чем позднее период, тем интенсивнее окраска. Ход работы: в одну пробирку наливают 1-2 мл женского молока, а в другую - 1-2 мл коровьего. В обе пробирки добавляют по 1-2 мл раствора аммиака и помещают на водяную баню при 60°С. Наблюдают появление фиолетовой окраски в первой пробирке и ее отсутствие - во второй. ВЫВОД по результатам исследования: Работу выполнил: Проверил: VII . Литература: ОСНОВНАЯ ЛИТЕРАТУРА 1.Возрастная биохимия (под ред. Даниловой Л.А.). Учебное пособие для медицинских вузов. - SOTIS.C.-Петербург, 2007 (90 экземпляров в библиотеке ТГМА). 2.Гнусаев С.Ф Вскармливание детей первого года жизни. Пособие для врачей и студентов медицинских вузов [Текст]/Гнусаев С.Ф., Алексеева Ю.А., Федерякина О.Б.- С -Пб.- 2004.- 64 с. 3. Особенности обмена веществ у детей от внутриутробного до пубертатного периодов. - Тверь, 2010. 4.Профильные тесты и ситуационные задачи для студентов педиатрического факультета. - Тверь, 2010. ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ЛИТЕРАТУРА 1.Воронцов И.М., Фатеева Е.М., Хазенсон Л.Б. Естественное вскармливание детей. - С.Пб.,1993 2.Здоровая пища и питание женщин и их семей. Учебный курс и рабочий семинар для работников здравоохранения. 3.Вопросы биохимии в педиатрии/под ред. Л.А. Даниловой. - С.Пб.: ППМИ,1993 4.Кешишян Е.С. Вскармливание детей первого года жизни. Лекция для врачей [Текст] / Кешишян Е.С., Рюмина И.И. - Москва. -2004 . -60с. 5.Алферов В.П., Пищевая непереносимость у детей. Пособие для врачей [Текст]/ Алферов В.П., Романюк Ф. П., Пройда Л.Н. - С-Пб. -2007.- 68 с. 6.http://www.Ronl.ru 7.http://www.thefood.ru 8.http://www.vegetarianec.ru 9.http://vgt.nm.ru 10.http://www.znaytovar.ru |