Лекция на тему Биотехнология производства сывороток. Биотехнология производства сывороток
 Скачать 296 Kb.
|
Биотехнология производства сывороток.Гиперимунные или специфические сыворотки представляют собой сыворотки крови животных, систематически иммунизированных бактериальными или вирусными антигенами. Гипериммунные сыворотки содержат антитела, обладающие строго специфическим действием на бактериальные токсины, патогенные бактерии или вирусы, против которых иммунизировали животных.
Изготовление лечебно-профилактических гипериммунных сывороток представляет сложный, длительный и многогранный технологический процесс, в котором участвуют врачи-микробиологи, биотехнологи, биохимики, зооинженеры, рабочие-аппаратчики, работники электротехнической службы. Технология производства гипериммунных сывороток объединяет ряд подразделений биопредприятий, главным из которых является сывороточный цех. Структура цеха должна включать: 1. Карантинное отделение 2. Имvунизационные клиники 3. Антигенные лаборатории 4. Отделения получения, концентрации и очистки сывороток. При создании гипериммунных сывороток требуются стерильные условия. Боксы должны обеспечиваться притоком стерильного воздуха. Рабочие места, стены, потолок, пол подвергаются влажной уборке с дезрастворами и УФЛ - облучения. Остальные помещения должны иметь приточно-вытяжную вентиляцию. Сжатый воздух, вакуум, холодная, горячая, дистиллированная, деминерализованная вода подаются по системе трубопроводов. В сывороточном цехе должны иметься автоклавные, термостатные рефрижераторные помещения, холодильники. Основными задачами иммунизационных отделений являются: 1. Отбор животных 2. Иммунологическая подготовка животных-продуцентов 3. Содержание и кормление животных 4. Иммунизация животных 5. Кровопускание 6. Ветеринарно-санитарное и зоотехническое обслуживание животных. Для приготовления гипериммунных сывороток чаще всего используют лошадей и крупный рогатый скот (волы). При производстве сыворотки против рожи используют свиней. Животных, применяемых для получения сывороток, завозят из стационарно благополучных по инфекционным болезням районов. При этом, они должны быть клинически здоровыми, средней и выше средней упитанности, свободными от накожных паразитов. На получение высокоэффективных лечебно-профилактических сывороток влияют: - качество применяемых антигенов, в частности их чистота, объем и концентрация; - неспецифические раздражители и адъюванты; - индивидуальные особенности животных-продуцентов, в частности их способность к иммунобиологической перестройке при создании у них грундиммунитета, для чего необходим тщательный отбор животных-продуцентов; - метод и схемы гипериммунизации; - содержание и кормление животных в период их подготовки и эксплуатации. Существует прямая связь между качеством антигена, силой антигенного раздражения и уровнем накопления специфических антител в крови животных. Для приготовления антигенов должны использоваться штаммы микроорганизмов, обладающие хорошо выраженными антигенными и иммуногенными свойствами. Качество антигенов зависит от следующих факторов: 1. Чистоты (неконтаминированность посторонней микрофлорой); 2. Степень очистки антигенов от балластных белков; 3. Концентрации. При изготовлении гипериммунных сывороток применяют антигены, специфическое действие которых усилено адъювантными веществами, в качестве которых используют гель гидроокиси алюминия, алюминиевые квасцы и др. В практике производства антитоксических сывороток широко используют хлористый кальций, алюмокалиевые квасцы, адьюванты типа Фрейда, тапиока. При этом большое значение имеет качество адъювантов, которое зависит: - от чистоты (определяется содержанием подобных химических соединений); - от стойкости образования геля; - от полноты адсорбции антител. При получении большинства противовирусных гипериммунных сывороток используют антигены без адъювантов. Отбор животных-продуцентов. Грундиммунизация Получение гипериммунных сывороток осуществляется в несколько этапов:
Подбор животных-продуцентов Всех завезенных на биофабрику животных выдерживают в карантине 45 суток. За это время их всесторонне обследуют с ежедневным (утром и вечером) двукратным измерением температуры тела, проверяют на пораженность гельминтами и при необходимости дегельминтизируют. Всех животных исследуют на инфекционные болезни, согласно требованиям нормативно-технической документации. Лошадей исследуют: 1. Caп 2. Трихомоноз 3. Бруцеллез 4. Туберкулез 5. Пироплазмидозы 6. Инфекционная анемия Крупный рогатый скот исследуют: 1. Туберкулез 2. Бруцеллез 3. Лептоспироз Свиней исследуют: 1. Туберкулез 2. Бруцеллез Овец исследуют: 1. Бруцеллез 2. Туберкулез 3. Паратуберкулез При отборе животных-продуцентов учитывают их физиологические и иммунобиологические показатели. На активность выработки животным-продуцентом гипериммунной сыворотки антител влияют: 1. Тип нервной деятельности животного-продуцента 2. Реактивность организма 3. Порода 4. Пол 5. Конституция 6. Возраст Лошадей используют в возрасте от 3 до 12 лет, помеси донской и казахской пород, массой 450-500 кг. Волов используют в возрасте от 3 до 8 лет, массой не менее 350 кг, красностепной, калмыцкой, симментальской, швицкой астраханской пород. Свиней используют в возрасте 5-6 месяцев, массой не менее 80 кг, крупной белой породы. Овец, баранов и валухов используют в возрасте 2-3 лет и массой 30-45 кг (для получения диагностических сывороток и сывороточных сред). Учитывая, что введение антигенов животным и периодическое кровопускание приводят к нарушению обмена веществ и анемии, а в ряде случаев, и к снижению титров антител, главное внимание уделяют вопросам полноценного, сбалансированного кормления животных-продуцентов. Кормление животных-доноров отличается от кормления других животных и осуществляется по специально разработанным и утвержденным рационам. Такие рационы должны содержать по 11-12 кормовых единиц и по 1000-1200 г переваримого протеина, а также включать сочно-витаминные корма и быть строго сбалансированными по минеральному составу. Для восстановления крови после крововзятия важно правильно организовать минеральное кормление животных. На 1 кг сухого корма лошадей должно приходиться: железа - 145-165 мг; меди - 15-18 мг; кобальта -1,2-1,4 мг; марганца - 9 мг. Для восстановления красной крови лошадям вводят в рацион эритроциты, фибрин, кормовые антибиотики, проращенный овес. Иногда проводят реинфузию эритроцитов. Кормят животных-продуцентов 3-5 раз в день, водопой - вволю, соль лизунец - вволю (кроме свиней). Крупных животных содержат индивидуально, мелкий рогатый скот и свиней - группами. Грундиммунизация животных продуцентов Теоретически обоснованно и практически целесообразно отбирать животных-продуцентов по иммунологическим показателям. При отборе животных - продуцентов, их проверяют на наличие антител к тому или иному антигену серологическими методами. Например, отбор лошадей-продуцентов для производства противодифтерийной сыворотки проводится по титру естественного противодифтерийного анатоксина в крови животных, выявляемого в реакции нейтрализации. Если антител в крови животных не обнаруживают, их грундируют, т.е. вводят антиген и по нарастанию титра антител, в результате грундиммунизации, отбирают лошадей-продуцентов противостолбнячной, противоботулинической, противодифтерийной и других сывороток. При производстве гипериммунных сывороток против диплококковой инфекции используют волов. Если у волов в крови антитела к возбудителю диплококковой инфекции содержатся в титре 1:200 - 1:3200, то их не грундируют, а сразу используют для гипериммунизации. Если антител не обнаруживают вовсе, волов грундируют. Отбор волов и грундиммунизацию обычно проводят в местах заготовки животных. При проведении грундиммунизации животным вводят убитый антиген или живые атенуированные микроорганизмы (убитые или живые вакцины). Эти антигены вводят дважды, с интервалом в 2-3 недели, внутримышечно или подкожно. До начала грундиммунизации и через 7-8 суток после последнего введения антигена у животных берут кровь и определяют в ее сыворотке наличие антител к тому антигену, с помощью которого в последующем готовят гипериммунную сыворотку. Выявление в сыворотке крови антител в титрах 1:800 и выше указывает на то, что данное животное может быть использовано как продуцент гипериммунной сыворотки, т.е. такое животное обладает высокой реактивностью организма и иммунная система его способна вырабатывать антитела в необходимых титрах. Кроме того, организм животного сенсибилизируется, «знакомится» с антигеном и при последующей гипериммунизации быстро ответит на введение антигена выработкой антител. Предварительное, правильно проведенное грундирование животных обеспечивает повышение (в 5 paз и более) титров специфических антител при последующей гиперимунизации тем же антигеном, увеличивает выход высокоактивного препарата и создает условия получения сывороток в более короткие сроки. Всех животных, у которых при грундиммунизации не обнаруживают антител или обнаруживают в титре менее 1:800, подвергают выбраковке. Лошадей исследуют: 1. Caп 2. Трихомоноз 3. Бруцеллез 4. Туберкулез 5. Паратуберкулез 6. Инфекционная анемия Крупный рогатый скот исследуют: 1. Туберкулез 2. Бруцеллез 3. Пироплазмидозы Свиней исследуют: 1. Туберкулез 2. Бруцеллез 3 Паратуберкулез Овец исследуют: 1. Бруцеллез 2. Лептоспироз Гипериммунизация животных Гипериммунизация - это метод парэнтерального введения животным нарастающих доз соответствующих антигенов с целью получения наивысшей ответной имунологической реакции организма, а следовательно, и максимального увеличения в крови животных титра специфических антител, который должен обеспечить лечебный, профилактический и диагностический эффект препаратов. При гипериммунизации сыворотка крови меняется. Обычно нарастает количество общего белка, увеличивается количество гамма- и бета- глобулиновых фракций, уменьшается содержание альбуминов. Так, если в нормальной сыворотке крови лошадей альбумины составляют 50 % от общего количеств белков, то в иммунной сыворотке их бывает 35 % и ниже. Успех гипериммунизации животных-продуцентов во многом зависит не только от тщательного их подбора, качества антигена и адьювантных веществ, но и от правильно выбранной схемы гипериммунизации, правильной технологии выполнения этих схем иммунизации, а также технологии кровопускания или обескровливания продуцентов в конце их эксплуатации. Антиген вводится обычно подкожно или внутримышечно в несколько мест с таким расчетом, чтобы точки инъекции находились вблизи лимфатических узлов. При этом, в иммуногенез быстрее вовлекается большое количество лимфоузлов, что повышает общую и иммунологическую реактивность организма. Введение антигена одновременно в несколько мест, кроме того, обеспечивает лучшую рассасываемость его и появление более равномерных и менее болезненных инфильтратов. Антигены в небольших дозах (5-25 мл) обычно вводят подкожно в верхнюю часть шеи животного, а в больших количествах - в область спины и крупа внутримышечно. Нужно иметь в виду, что при введении животному больших доз антигена образуются инфильтраты и даже абсцессы. Но абсцессы обычно бывают стерильными. Места введения антигена или крововзятия протирают дезинфицирующими растворами. Для гипериммунизации, как было показано выше, чаще всего использую лошадей. Цикл гипериммунизации обычно длительный и составляет 1-2 и более месяцев. Впрочем, в каждом случае цикл иммунизации во многом зависит от вида получаемой гипериммунной сыворотки. Например, для получения гипериммунной противосибиреязвенной сыворотки используют лошадей в возрасте от 3 до 10 лет. Вначале здоровым животным вводят четырехкратно вакцину Ценковского II для создания стойкого иммунитета (грундиммунизация), а потом лошадей подвергают гипериммунизации вирулентной суточной бульонной культурой возбудителя сибирской язвы. Всего используют 12 вирулентных штаммов возбудителя, комбинируя их по четыре в виде смеси для каждой иммунизации. Гипериммунизацию лошадей начинают с малых доз: 0,5; 1,0; 2,5 и 5,5 мл с интервалом в трое суток. Затем культуры возбудителя сибирской язвы вводят с интервалами в 3-4 суток и в дозах 10,0; 20,0; 40,0; 80,0; 100,0; 110,0; 120,0; 130,0; 140,0; 150,0 мл. Обычно бывает достаточным ввести антиген 13 раз, и сыворотка лошадей-продуцентов становится активной. При введении доз от 10 до 80 мл к культуре добавляют 0,2 % алюминиевых квасцов, а к дозам от 100 до 150 мл - 0,1 % квасцов. При повышении у животных температуры тела интервал между инъекциям увеличивают до 4 или 5 суток. В каждом конкретном случае схемы иммунизации могут быть разными. Схемы иммунизаций отличаются одна от другой даже при получении одной и той же сыворотки. Специалисты сывороточного производства считают, что каждое животное отличается индивидуальной реактивностью организма и для него необходима своя, отдельная схема гипериммунизации. Разнообразие схем иммунизации определяется следующим: - различием методов введения антигена; - дозировкой антигена; - количеством инъекций; - интервалами между инъекциями; - объемом забираемой у животного крови; - кратностью цикловых кровопусканий. Введение антигенов обычно не вызывает резких отклонений в состоянии здоровья животных, лишь иногда наблюдаются местные и общие реакции. Эффективность иммунизации животных повышается при дробном введении антигенов одновременно в различные участки тела с охватом возможно большего количества лимфатических узлов. По окончании гипериммунизации, когда в сыворотке крови животного установлен максимальный титр специфических антител, у него берут кровь обычно через 7-10 суток после последней инъекции антигена. Этот период соответствует максимальному накоплению антител в крови животных и полностью укладывается в закономерности иммуногенеза. Количество забираемой крови зависит:
К взятию крови животных приучают постепенно. Обычно при каждом крововзятии кровь берут из яремной вены из расчета800 мл на каждые 50 кг массы животного (или 13 % к общей массе крови животного). Многочисленные эксперименты и клинические исследования свидетельствуют о том, что гемодинамика, эритропоэз, лейкопоэз, регенерация сывороточных белков, функциональное состояние различных органов при кровопусканиях в значительной мере зависит от дозы и кратности взятия крови. Однократное кровопускание, в дозах не превышающих 1 % от массы тела животного, не вызывает заметных гемодинамических, гемоцитологических и биохимических сдвигов в ближайшие сроки от момента взятия крови. В то же время установлено, что двукратное кровопускание стимулирует образование иммуноглобулинов М (IgМ), плазмоцитарную реакцию лимфоидных органов, влияет на уровень гамма- и бета- глобулинов, повышает синтез пропердина, лизоцима и бета-лизинов, увеличивает бактерицидность сыворотки крови и фагоцитарную активность лейкоцитов, повышает превентивные свойства сыворотки а также сопротивляемость организма инфекции. Совершенно иным является эффект многократных взятий крови. Они приводят к изменению иммунных реакций. В частности, они стимулируют образование различных факторов иммунитета, но угнетают активность IgM-антител. Тотальное обескровливание проводят тогда, когда решается вопрос о прекращении использования животных как продуцентов. Обычно это делают в момент максимального накопления антител и появления тенденции снижения их синтеза. Перед тотальным взятием крови для получения её в наибольших количествах животным обычно вводят сердечные вещества. Но нужно отметить, что животные-продуценты могут пройти несколько циклов гипериммунизации (5-8) и решение вопроса о тотальном кровопускании принимается строго индивидуально. Приготовление сывороточных препаратов Сыворотку получают методом цитрирования крови с последующим сепарированием и дефибринированием плазмы. Сыворотку крови консервируют 0,5 %-ным раствором фенола и отстаивают в специальных емкостях в течение двух месяцев. Отстоявшуюся сыворотку фильтруют вначале через пластины Ф, а затем через стерилизующие пластины СФ. В последующем сыворотку расфасовываю во флаконах емкостью по 100 мл. Флаконы закрывают пробками и для герметичности их обкатывают алюминиевыми колпачками. На флаконы наносят этикетку и часть продукции сдают на контроль. Контроль сывороток проводят по общепринятым методикам на стерильность, безвредность, специфичность и др. Гипериммунные сыворотки, получаемые из крови путем удаления форменных элементов и фибрина, называются нативными в отличие от сывороток, подвергнутых дополнительной очистке и концентрации специальными методами. Принципы очистки сывороток основаны на выделении из них активных белковых фракций, преимущественно гамма-глобулинов, и удалении балластных фракций, не являющихся носителями антител (например, альбумины). Выделенные фракции растворяют в меньшем объеме растворителя, по сравнению с исходным объемом, что позволяет препарат сконцентрировать и вводить в меньших дозах. Необходимость в получении концентрированных сывороток связана: во-первых, со значительными объемами выпускаемых лечебных сывороток, исчисляемыми сотнями тонн. Для расфасовки сывороток требуется большое количество флаконов, пробок, колпачков, ящиков для упаковки. Кроме того, большие затраты уходят на транспортировку такого объема сывороточных препаратов; во-вторых, ввиду недостаточно высокой активности отдельных сывороток, они вводятся животным в больших дозах: с профилактической целью - по 20-60 мл, с лечебной - по 40-120 мл. Уменьшения общего объема выпускаемых сывороток и повышения их активности можно достигнуть путем ихочистки и концентрации иммуноглобулиновой фракции гипериммунной сыворотки. В производственных условиях очистку и концентрацию сывороток проводят чаще всего комбинированным способом, включающим: - ферментативный гидролиз; - прогрев ферментированных сывороток в кислой среде; - солевое фракционирование; - дополнительная очистка от неактивных белков с использованием органических растворителей, сорбентов; - дополнительное выдерживание сывороток при пониженных температурах. При такой обработке удаляется до 80-85 % балластных белков сыворотки. Агглютинирующие сыворотки и технология их приготовления Агглютинирующие сыворотки готовят путем гипериммунизации животных различными корпускулярными антигенами, введением их парентеральным путем. В качестве антигенов используют живые или убитые различными способами культуры соответствующих микробов. В связи с непостоянным содержанием антигенных компонентов у одного и того же вида бактерий желательно животных иммунизировать несколькими штаммами (2—3) этого вида микроба. Для получения поливалентных агглютинирующих сывороток прибегают к одновременному введению смеси антигенов из нескольких типов бактерий одного и того же вида. В процессе работы необходимо следить за однородностью популяции штамма, используемого для иммунизации. Лучшим способом сохранения агглютиногенных свойств является лиофильное высушивание. В большинстве случаев для получения полноценных агглютинирующих сывороток используют в качестве антигенов культуры микробов в S-форме. Реже требуются О- или R-варианты. Для получения сывороток лучше использовать в качестве антигенов живые культуры бактерий или вирусов, в ряде случаев для иммунизации животных использовать вновь пересеянные (суточные) культуры микробов. В ряде случаев введение живых культур может вызывать тяжелую реакцию организма иммунизируемых животных и даже их гибель. Поэтому, где это допустимо, животных иммунизируют убитыми взвесями микроорганизмов. Для получения диагностических агглютинирующих сывороток чаще всего используют кроликов. Иммунизацию в большинстве случаев проводят внутривенным способом в нарастающих дозах и интервалами в 4 суток. Обычно производят 3—4 инъекции антигена. Преципитирующие диагностические сыворотки и технология их приготовления Преципитирующие сыворотки предпочтительно готовят для диагностики сибирской язвы. Первыми для этих целей получили преципитирующую сыворотку Асколи и Валенти в 1910 году. Они иммунизировали внутривенным способом лошадей слабовирулентной культурой возбудителя сибирской язвы. В последующие годы методы получения качественных сывороток совершенствовались. В настоящее время преципитирующую сибиреязвенную сыворотку получают путем внутривенной иммунизации лошадей слабовирулентными штаммами 916-1, Ш-15, 94 и штаммом из матрикса второй вакцины Ценковского. Указанные штаммы выращиваются на гороховом агаре в течение 18—20 часов при 36—37° С. Культуры соответствующих штаммов смывают с поверхности горохового агара физиологическим раствором, тщательно шуттелируют, фильтруют и стандартизируют. Лошадей гипериммунизируют поочередным введением каждого из указанных штаммов внутривенно. Всего делают 16—17 инъекций антигена, увеличивая дозу с 5 до 70 мл. В период гипериммунизации делают контрольные исследования на накопление антител. По окончании гипериммунизации кровь от лошадей берут через 9—16 суток после последнего введения антигена из расчета 800 мл на 50 кг массы животного. Из крови получают сыворотку методом ее цитрирования с последующим сепарированием и дефибринизацией плазмы. Сыворотку консервируют 0,5%-м раствором фенола. Затем сыворотку выдерживают в специальных отстойниках в течение двух месяцев, после чего подвергают ее стерилизующей фильтрации, разливают во флаконы емкостью 50—100 см3, закрывают их резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками. После этого препарат подвергается биологическому контролю. Антитоксические диагностические сыворотки Чаще всего антитоксические сыворотки готовят с целью диагностики клостридиозов: злокачественного отека, инфекционной энтеротоксемии, ботулизма и других заболеваний, возбудители которых образуют сильные экзотоксины и имеют множество серологических типов. В качестве антигенов при получении таких сывороток используют анатоксины. Технологическим примером получения таких сывороток является изготовление антитоксических сывороток Cl. perfringens типов А, В, С, D, Е и F. В качестве продуцентов таких диагностических сывороток чаще используют валухов тонкорунных пород в возрасте двух лет. Антигенами являются очищенные и концентрированные анатоксины, полученные с помощью соответствующих типов Cl. perfringens. Для каждого типа указанного микроба используют отдельных продуцентов, которых содержат в отдельных боксах. Антигены овцам вводят подкожно в возрастающих дозах с принятым интервалом 4—6 суток между инъекциями. Гипериммунизацию животных прекращают после получения сывороток с активностью, предусмотренной инструкцией по ее изготовлению. Поэтому в процессе эксплуатации у продуцентов берут кровь и в ее сыворотке определяют титры антитоксинов. Активность каждого типа антитоксических сывороток устанавливают в реакции нейтрализации специфических токсинов при введении их смесей белым мышам или крысам и выражают ее количеством антитоксических единиц. Диагностические сыворотки для постановки реакций связывания комплемента При ряде инфекционных заболеваний образуются так называемые комплементсвязывающие антитела. При их определении в практике используются специфические диагностические сыворотки, содержащие такие антитела. Чаще они используются для определения типа вируса, вызвавшего то или другое заболевание. Показательным примером является приготовление специфических диагностических ящурных сывороток. Он вызывается одним из вариантов вируса ящура: А, О, С, SAT-1, SAT-2, SAT-3, Asia-1. Идентификацию штамма циркулирующего вируса ящура проводят с помощью реакции связывания комплемента (РСК). Специфическую типовую и вариантную сыворотки получают от морских свинок, которых заражают вирусосодержащей суспензией соответствующего типа, с добавлением к ней сапонина и спустя 30—40 суток дополнительно гипериммунизируют тем же материалом путем двух-четырех внутримышечных инъекций. Через 7—10 суток после последней инъекции морских свинок обескровливают и из крови готовят инактивированную сыворотку. Сыворотку проверяют в РСК на активность и специфичность. В качестве антигена для изготовления сывороток используют штаммы вируса ящура, адаптированные к организму новорожденных крольчат или к культурам клеток. МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА И ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ПРИЕМЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ Антитела строго специфичны и способны выявить минимальные различия в химическом составе и пространственной конфигурации молекул. В результате сложной антигенной структуры многих микроорганизмов при иммунном ответе на них в организме образуются неоднородные антитела, то есть в сыворотке будут содержаться смесь антител. Последние продуцируются разными линиями В-лимфоцитов и направлены к различным детерминантам антигена. Если бы определенную линию лимфоцитов удалось выделить и культивировать вне организма, как культуры клеток, то полученный клон лимфоцитов продуцировал бы однородный тип антител — моноклональные антитела. В иммунологии такая идея возникла давно. Но, к сожалению, антителобразующие лимфоциты плохо растут в культуре и зачастую отмирают. В то же время клетки злокачественной опухоли костного мозга, миеломы, обладая способностью к неограниченному росту, интенсивно продуцируют иммуноглобулины, идентичные между собой по структуре. То есть по сути это моноклональные антитела к неизвестному антигену. Ученые давно стремились на основании гибридомной технологии получить такие клоны гибридных клеток, которые бы сочетали энергию размножения миолемных клеток с высокой продукцией антител- лимфоцитов, то есть, чтобы они постоянно продуцировали моклональные антитела. Первые успехи в данном направлении были достигнуты английскими учеными Георгом Келером и Сезаром Мильштейном (1975). Они получили в результате слияния клеток миеломы РЗ и лимфоцитов из селезенки мышей, иммунизированной эритроцитами в присутствии полиэтиленгликоля, гибридные клетки, которые при культивировании в селективной среде продуцировали иммуноглобулины только к эритроцитам. Такие клетки-химеры или гибридомы, будучи полученными путем слияния антителобразующих лимфоцитов и опухолевых клеток, наследовали способность к неограниченному росту в культуре клеток и в то же время к продукции антител определенной специфичности (моноклональных антител). Но следует иметь в виду, что после слияния клеток двух различных линий образуется клон, антитела, которые он образует, необязательно сразу будут моноклональными в иммунологическом смысле, так как в каждой клетке гибридного клона вначале присутствуют хромосомы обеих родительских клеток. Экспрессия этих хромосом ведет к продукции как селезеночных, так и миеломных иммуноглобулинов. Однако на ранних стадиях размножеия гибридных клеток они быстро утрачивают часть хромосом. Важным при этом является выделить клоны клеток, потерявших хромосомы, присущие миеломе, но сохранившие хромосомы иммунных лимфоцитов. То есть выделяют те клоны клеток, которые синтезируют только тяжелые и легкие цепи иммуноглобулинов к заданному антигену. В дальнейшем стали проводиться работы по получению моноклональных антител к различным по природе антигенам с помощью гибридомных клеток. Получение культур клоновых клеток открывает широкую перспективу иммунологических исследований по получению видо- и типоспецифических моноклональных антител к различным возбудителям заболеваний. При мечении моноклональных антител флуорохромами и ферментами появляется возможность широко использовать моноклональные антитела при диагностике бактерийных, грибковых и вирусных заболеваний с применением РИФ и ИФА. |