ЧАСТНАЯ МИКРА. Частная микра
 Скачать 235.31 Kb.
|
5) Хеликобактеры. Классификация. Свойства. Заболевания, вызываемые ими. Эпидемиология и патогенез. Иммунитет. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика и лечение.Классификация К роду Helicobacter в настоящее время относится до 10 видов микроорганизмов (Helicobacter pylori, Helicobacter heilmannii,Helicobacter mustelae, Helicobacter felis и т.д). Основным возбудителем заболеваний у человека является H. pylori. Определенное значение в патологии имеет H. heilmannii. Считается, что Helicobacter pylori играет существенную роль в патогенезе острого и хронического гастритов, язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки. Кроме того, инфекция Helicobacter pylori является предрасполагающим фактором в развитии рака желудка и лимфоцитарной опухоли желудочно-кишечного тракта (мальтомы). Морфология Это грамотрицательные, короткие, извитые S-образные бактерии средних размеров, подвижные, имеют 4-5 жгутиков, лофотрихи. Содержание Г+Ц составляет 35-37%. Культуральные свойства Хорошо растут в микроаэрофильных условиях, в аэробных и анаэробных условиях не растут. Температурный оптимум 37°С, не растут при температуре 25-28 и 42°С, хорошо растут на кровяном агаре, на средах, содержащих 10% сыворотки. Не растут на средах, содержащих глицерин, желчные соли и NaCl. Биохимические свойства Оксидазо- и каталазоположительны, проявляют выраженную уреазную активность, обладают фосфатазой, образуют H2S, не свертывают молоко. Антигенная структура Имеется О-АГ – ЛПС, Н-АГ, а также поверхностные мембранные белковые АГ (OMP-белки), по которым определяют типоспецифичность возбудителя с помощью моноклональных АТ. Факторы патогенности В патогенезе существенное значение имеют адгезины возбудителя, вакуолизирующий цитотоксин (VacA), поражающий эпителий желудка, белок CagA – продукт генов островков патогенности, ферменты супероксиддисмутаза и каталаза. Резистентность Характеристика заболевания Источник инфекции – больные люди. Патогенез При пероральном попадании возбудителя большое число бактерий скапливается в антральной части желудка, так как там мало клеток, секретирующих соляную кислоту, что помогает выживанию бактерий на поверхности эпителия. Проникая через слой слизи, хеликобактеры прикрепляются к эпителиальным клеткам (в области межклеточных ходов адгезины микроба связываются с мембранными гликолипидами, компонентами слизи), проникают в железы слизистой оболочки, разрушают слизистый слой и обусловливают контакт желудочного сока со стенкой органа. ЛПС стимулирует выделение ИЛ-8, миграцию нейтрофилов и способствует развитию острого воспаления. Локализация в области межклеточных ходов обусловлена хемотаксисом к местам выхода мочевины и гемина. Под действием фермента уреазы мочевина превращается в аммиак, который повреждает слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки. Кроме того, аммиак нейтрализует соляную кислоту желудка, способствуя выживанию хеликобактерий. Клиническая картина Клинические проявления не отличаются от симптомов гастродуоденитов. Инкубационный период – 7 суток. В острой фазе заболевания отмечается изменение рН желудочного сока, тошнота, рвота, в дальнейшем появляются симптомы язвенного гастродуоденита. Лабораторная диагностика Материал для исследования: биоптаты слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки. Бактериоскопический метод. Выявляют бактерии в препаратах, окрашенных гематоксилин-эозином или акридиновым оранжевым. В фазовоконтрастном микроскопе определяют характерную подвижность. Бактериологический метод. Производят посев материала на кровяной агар с амфотерицином, культивируют в термостате 5-7 суток при 37° в микрофильных, аэробных и анаэробных условиях. Вид микроба определяют по характерной морфологии и виде колоний, способности к росту только в микроаэрофильных условиях, по наличию оксидазной и уреазной активности. Анализ крови на хеликобактерию В анализе крови можно обнаружить антитела к бактерии. Появляются они через 1-2 месяца после заражения. Однако даже после положительного лечения антитела способны сохраняться в крови на срок до 1 года, поэтому для контроля эффективности лечения этот метод не используют. Дыхательный тест на инфекцию. Перед проведением дыхательного уреазного теста пациенту запрещается курить, принимать спиртные напитки, антибиотики, препараты для желудка. Тест проводится натощак, при этом пациент дышит в специальную трубочку. Вначале идет забор образца выдыхаемого воздуха, после чего человеку предлагают выпить раствор карбамида с меченным углеродом. Спустя 15-20 минут снова берут на исследование выдыхаемый воздух. Суть теста в том, что хеликобактерия расщепляет карбамид, а уголь выделяется легкими во время дыхания, особая система фиксирует его концентрацию. Выявление антигенов возбудителя в ИФА. ПЦР- диагностика - наиболее чувствительный и специфичный тест. 1 Мазок, окрашенный по Граму Биохимические тесты:-уреазный -оксидазный - каталазный Тест на способность продукции цитохромоксидазы (оксидазный тест) выполняют следующим образом: каплю 1% водного раствора тетраметилпарафенилендиамина гидрохлорида наносят на исследуемые колонии непосредственно на поверхности чашки. Через 20-30 с оксидазопозитивные колонии Н.pylori окрашиваются в темный цвет. Контролем служат суточные агаровые культуры E.coli (негативный контроль) и P.aerugenosa (позитивный контроль). Тест на каталазную активность проводят в капле Н2О2 на стекле: через 3-5 с в взвеси каталазопозитивной культуры Н.pylori происходит образование пузырьков газа. Позитивным контролем служит суточная агаровая культура E.coli, негативным – любой стрептококк. Фазово-контрастная микроскопия Н.pylori может быть обнаружен до микробиологического исследования при помощи фазово-контрастной микроскопии. В препарате – типичные изогнутые бактерии в хаотичном движении. Гистологический метод Этот наиболее объективнй метод диагностики Н.pylori инфекции, так как позволяет обнаружить возбудитель этой инфекции, определить положение бактериальных тел в слизи, покрывающей СОЖ, наблюдать взаимоотношение Н.pylori с апикальной мембраной эпителиоцитов, а также определить пути взаимодействия микроба с тканями макроорганизма. При гистологическом исследовании проводится микроскопия парафиновых срезов, окрашенных различными методами - гемотоксилином-эозином, Романовского-Гимза, Вартина-Старри, генциан-виолетом, Гомери, Гента. Оценка биопсийных образцов проводится в соответствии с Сиднейской классификацией (1990 г.). Н.pylori определяются в виде мелких слегка извитых палочек, находящихся в просвете желудка в непосредственной близости от собственной пластинки СОЖ и на поверхности эпителиальных клеток. Выделяют 3 степени обсемененности Н.pylori: 1) слабая (+) - до 20 микробных тел в поле зрения; 2) средняя (+) - до 50 микробных тел в поле зрения; 3) высокая (+++) - более 50 микробных тел в поле зрения Иммуногистохимический метод Биопсийный материал, фиксированный в формалине и залитый в парафин, обрабатывается моноклональными антителами против Н.pylori. Готовые к применению коммерческие наборы с моноклональными антителами работают при разведении 1:200000 и избирательно окрашивают только Н.pylori. Быстрый уреазный тест (оценка местной уреазной активности) В основу определения уровня желудочной уреазной активности положен следующий принцип: уреаза катализирует быстрый гидролиз мочевины, находящейся в содержимом желудка. В результате реакции образуется аммиак и углекислый газ. рН среды сдвигается в щелочную сторону и это изменение можно зафиксировать с помощью индикатора. Быстрота изменения окраски индикатора зависит от уреазной активности, которая, в свою очередь, зависит от количества бактерий. В некоторых случаях уреазный тест становится положительным через несколько минут. При малом количестве бактерий изменение окраски в уреазном тесте может произойти через несколько часов, а иногда возможен и ложноотрицательный результат. В настоящее время разработано большое количество промышленно изготовленных уреазных тестов, среди которых наиболее распространен CLO-тест (Австралия). Коммерческий CLO-тест представляет собой гелеобразную таблетку, содержащую мочевину, феноловый красный (индикатор рН) и бактериостатический агент. Биоптат кладут на поверхность таблетки и при наличии уреазы индикатор изменяет ее окраску от желтой до малиновой. Через 20 минут этот тест положителен в 75% случаев, а через 24 часа в 95% случаев у больных с подтвержденным бактериологически хеликобактериозом. Время появления малинового тона косвенно указывает на количество микроорганизмов: (+) - незначительная инфицированность (малиновое окрашивание к концу суток); (++) - умеренная инфицированность (малиновое окрашивание в течение 2 часов); (+++) - значительная инфицированность (малиновое окрашивание появляется в течение первого часа) (-) - отрицательный результат (малиновое окрашивание не наступает). Лечение Для лечения используются схемы, включающие ингибиторы желудочной секреции (блокатор протонного насоса омепразол), антибиотики (кларитромицин, азитромицин, доксициклин, метронидазол), коллоидный субцитрат висмута (Де-нол). Профилактика Специфическая профилактика не разработана. |