микроскопия печени. Исследование печени мышей
 Скачать 55.38 Kb.
|
|
ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПЕЧЕНИ МЫШЕЙ Каждый исследуемый случай подвергался обзорной микроскопии, при которой оценивался общий характер строения печени, особенности стромаль-ного и паренхиматозного компонентов, наличие или отсутствие очагов кроветворения, наличие или отсутствие вторичных изменений (кровоизлияния, некроз, воспаление), состояние микроциркулятор-ного русла. Для оценки уровня морфофункциональной активности гепатоцитов на препаратах, окрашенных гематоксилином и эозином, использовали следующие морфометрические исследования: определение диаметра ядер (Яс1) окуляр-микрометром и объема ядер (Яу) клеток по формуле: flv=4/3 nr3, где r - радиус ядра, который равен S ЯС; 2) определение диаметра ядер(КС) окуляр-микрометром и объема (Kv) клеток по формуле: Kv=4/3 nr3, где r - радиус ядра, который равен S КС; 3) определение объема цитоплазмы (Цу) клеток по формуле: Цу=Ку - Яv; 4) определение ядерно-цитоплазматического индекса (ЯЦИ) по формуле: ЯЦИ=Яу/ Цу. Научная библиотека КиберЛенинка: http://cyberleninka.ru/article/n/morfometricheskie-i-morfofunktsionalnye-pokazateli-pecheni-donoshennyh-novorozhdennyh-ot-zdorovyh-materey-s-fiziologicheski#ixzz4BHs7SehG Микроскопически в печени гистоархитектоника сохранена, балочно-радиарное строение прослеживается четко. В центральных венах отмечается умеренное полнокровие, синусоиды неравномерно р асширены. Гепатоциты с эозинофильной зернистой цито-плазмойи округлымба з офильнымядром(рис.1). Диаметрядор гьпытллия ои мистсяил я м, 12±С,06 мкм, объем ядер - 103,15±4,81 мкм3, диаметр клетки (глнитоцита)- 21,1им,03 мкм, гбмсмклетмо (ае-пьторатс)- 1бс,11±Л,4Д мкм3, объем цитоплазмы гепатоцита - 63,66±2,32 мкм3, ЯЦИ - 0,61±0,02. ДНП в ядрах гепатоцитов распределялось диффузно Научная библиотека КиберЛенинка: http://cyberleninka.ru/article/n/morfometricheskie-i-morfofunktsionalnye-pokazateli-pecheni-donoshennyh-novorozhdennyh-ot-zdorovyh-materey-s-fiziologicheski#ixzz4BHt1n71N Одним из наиболее достоверных иммуномор-фологических маркеров пролиферативной активности клеток является уровень экспрессии ядерного белка К1-67. Интенсивность окрашивания к К1-67 вгепатоцитах оценивалась как умеренная (++), а в клетках стромы - как слабая (+) (рис. 3). Строма развита умеренно, преимущественно в области портальных трактов и представлена коллагеновыми волокнами (рис. 4). Стромально-парен-химатозные показатели печени были следующими: объем паренхимы - 96,6±0,12 см3, объем стромы с сосудами - 39,0±0,06 см3, стромально-паренхима-тозный коэффициент - 0,40±0,04. Научная библиотека КиберЛенинка: http://cyberleninka.ru/article/n/morfometricheskie-i-morfofunktsionalnye-pokazateli-pecheni-donoshennyh-novorozhdennyh-ot-zdorovyh-materey-s-fiziologicheski#ixzz4BHtKn06O В настоящее время для оценки степени тяжести морфологических изменений ткани печени широко применяются различные способы медицинской морфометрии. Однако традиционные морфометрические исследования (определение удельной площади цитоплазмы и ядер гепатоцитов, синусоидов и синусоидальных клеток) не дают полную картину патологических изменений в печени и степени их тяжести. Поэтому в проведенном исследовании использован способ определения удельной площади патоморфологических изменений тканей органов [6]. В качестве морфологических факторов были выбраны стереотипные морфологические изменения, возникающие при токсическом поражении печени: некроз и дистрофия гепа-тоцитов, лейкоцитарная инфильтрация ткани печени, расширение синусоидов и центральных вен, наличие стаза крови в синусоидах и в центральных венах. Кроме того, учитывались основные нормальные гистоструктуры ткани печени: неизмененные гепатоциты, синусоидные клетки, синусоиды. У потомства подсчитывались очаги кроветворения в ткани печени. Научная библиотека КиберЛенинка: http://cyberleninka.ru/article/n/limfaticheskiy-region-pecheni-materi-i-potomstva-pri-beremennosti-oslozhnennoy-deystviem-ekotoksikantov#ixzz4BIbQjJxN При исследовании печени 14-суточного потомства от животных с токсическим гепатитом выявлены характерные изменения паренхимы органа: уменьшается относительная площадь нормальных гепатоцитов, появляются клетки с вакуолярной дистрофией и очаги некрозов, уменьшается количество двуядерных гепатоци-тов и синусоидных клеток, отмечается тенденция к увеличению ядерно-цитоплазматического соотношения. Реагирует микроциркуляторное русло: значительно уменьшаются относительные площади нормальных синусоидов, появляются расширенные синусоиды. Таким образом, несмотря на отсутствие непосредственного токсического воздействия, многие морфологические изменения печени потомства аналогичны структурным изменениям в печени материнского организма. При исследовании лимфатического узла выявлено изменение его функциональной специализации. В корковом веществе появляются вторичные лимфоидные узелки, которые не определяются у здорового потомства. Цитоархитектоника зон печеночного узла отличается увеличением доли средних лимфоцитов, возникновением иммунобластов и клеток с фигурами митозов, в мозговых синусах появляются иммунобласты и средние лимфоциты, уменьшается относительное число ретикулярных клеток. Научная библиотека КиберЛенинка: http://cyberleninka.ru/article/n/limfaticheskiy-region-pecheni-materi-i-potomstva-pri-beremennosti-oslozhnennoy-deystviem-ekotoksikantov#ixzz4BIcyRm3k Образцы печени для световой микроскопии брали из края левой латеральной доли печени, фиксировали их в 10% растворе нейтрального формалина, обезвоживали в серии спиртов с возрастающей концентрацией, заключали в парафин. Готовили срезы толщиной 5-6 мкм. От каждого животного получали по 5-6 микроскопических срезов ткани печени. Для изучения структурных компонентов ткани печени срезы окрашивали гематоксилином Майера и эозином и заключали в полистирол на предметных стеклах. Полученные препараты изучали на световом микроскопе Jenamed-2 Histology Zeiss при увеличении *1000. Препараты печени исследовали морфометрически с использованием окулярной сетки из 25 точек [1]. Подсчитывали объемную плотность зон с дистрофическими и некротическими изменениями гепатоцитов, численную плотность двухядерных гепатоцитов. Научная библиотека КиберЛенинка: http://cyberleninka.ru/article/n/morfologicheskie-osobennosti-tkani-pecheni-pri-povrezhdenii-kapsaitsin-chuvstvitelnyh-neyronov-i-induktsii-vospaleniya-formalinom-i#ixzz4BIePIgcy Комплекс тканевых нарушений печени после введения капсаицина (150 мг/кг) складывается из сосудистой реакции и заметных изменений со стороны гепатоцитов. В этом случае в печени наблюдали резкое расширение сосудов центральных отделов долек, сладж эритроцитов, а в портальных трактах — умеренно выраженную лейкоцитарную инфильтрацию, местами выходящую за пределы пограничной пластинки. По сравнению с контролем гепатоциты подвержены изменениям, в некоторых видны выраженные деструктивные явления (вакуолизация цитоплазмы, пикноз ядер, распад балок). Увеличенное количество двухядерных клеток свидетельствовало о наличии пролиферативного процесса в органе. Морфометрический анализ показал, что объемная плотность дистрофически измененных ге-патоцитов в группе животных, получавших кап-саицин, была выше по сравнению с контролем (Таблицы 1, 2). Объемная плотность некрозов в печени у обработанных нейротоксическими дозами крыс также возрастала по сравнению с контролем. Увеличивалась и численная плотность двухядерных гепатоцитов . При введении капсаицина неонатально (50 мг/кг) балочное строение печени сохранено. Центральные вены долек расширены, полнокровны, синусоиды и портальные тракты не расширены. Часть гепатоцитов находилась в состоянии гид-ропической дистрофии. Определялись единичные моноцеллюлярные некрозы гепатоцитов. В синусоидах и портальных трактах умеренно выраженная лимфогистиоцитарная инфильтрация. Количество некрозов практически не изменено по сравнению с контролем, но почти в 5 раз увеличено количество дистрофически измененных гепатоцитов и в 2 раза — количество двухядерных гепатоцитов (Таблица 1). Анализ изменений структурной организации ткани печени после обработки нейротоксически-ми дозами капсаицина взрослых и новорожденных животных показал их однотипность. Однако имеются некоторые различия. После неонатальной обработки капсаицином у крыс более выражены очаги дистрофических изменений при незначительном количестве некрозов, тогда как у крыс, обработанных капсаицином во взрослом состоянии количество некрозов больше. Изучение временного характера развития тканевых реакций после введения капсаицина в дозе 150 мг/кг показало, что реакция ткани печени на введение капсаицина развивалась уже через 1 сутки, а максимум регистрируемых изменений приходился на 7-е сутки — резко возрастало количество некротически и дистрофически измененных гепатоцитов. К 14-м суткам количество дистрофий и некрозов снизилось, но оставалось еще высоким; наблюдалось максимальное количество двухядерных гепатоцитов. Заметную реакцию ткани печени наблюдали и через 4 недели (см. описание выше). Приведенные данные показали, что введение капсаицина вызывает комплекс изменений в ткани печени, состоящий из нарушений микро-циркуляторного русла, воспалительной реакции, дистрофических и некротических изменений и пролиферативного процесса. Научная библиотека КиберЛенинка: http://cyberleninka.ru/article/n/morfologicheskie-osobennosti-tkani-pecheni-pri-povrezhdenii-kapsaitsin-chuvstvitelnyh-neyronov-i-induktsii-vospaleniya-formalinom-i#ixzz4BIf1ZPrK Повышенная выработка организмом или избыточное поступление женских половых гормонов извне стимулирует чувствительность органов-мишеней посредством рецепторов. Усиленная и неконтролируемая экспрессия ЭР приводит к развитию пролиферативных заболеваний В отличие от эффектов, связанных с физиологическим метаболизмом эстрогенов, опосредованных через ЭР в нормальных и опухолевых тканях, менее известны их другие эффекты. Установлено, что ряд метаболитов стероидных гормонов эстрогено-вого ряда вызывают поломку генетического материала клетки, усиление расплетения и увеличение числа разрывов цепочки ДНК [24]. В ходе естественного метаболизма эстрогенов образуются агрессивные свободные радикалы, способные оказывать повреждающее, мутагенное действие на ДНК, и, следовательно, приводить к новообразованиям [23]. Отличительной чертой внутриутробного развития плода человека независимо от его пола является предельно высокая концентрация стероидных женских половых гормонов в крови матери, что неразрывно связано с функционированием её эндокринной системы и плаценты для поддержания и нормального течения беременности [5]. Любые факторы, способные так или иначе повысить концентрацию эстрогенов в крови плода могут приводить к канцерогенным (в том числе и программирующим) эффектам их метаболитов на молекулярно-генетическом уровне в эстроген-чувствитель-ных тканях, включая закладки … К концу двадцатого столетия накопилось достаточно много эпидемиологических, клинических и экспериментальных данных в пользу гипотезы Баркера - не только генетические, но и факторы окружающей среды могут влиять на развивающийся плод внутриутробно, вызывая морфологические и физиологические изменения в тканях и органах, что в последующем способствует развитию заболеваний не только в периоде детства, но и у взрослых [1]. В последние годы целым рядом зарубежных ученых установлено, что повышенное количество кортизола, проникающее через плаценту, способно вызвать развитие патологий, которые могут проявиться в детском и подростковом возрасте [14, 15, 18, 20]. Научная библиотека КиберЛенинка: http://cyberleninka.ru/article/n/kortizol-pri-beremennosti-obzor-literatury#ixzz4BIRNGM00 |