микробиология контрольная. Контрольная работа 1 по микробиологии Вариант 9 Клабукова Анастасия Александровна Курса 1
 Скачать 0.58 Mb.
|
В литературе описаны случаи общей интоксикации препаратами левомицетина при их передозировании. Это требует ограничить их использование.Препараты пенициллина, как указывалось раньше, чаще всего вызывают аллергические реакции и редко - токсические, которые проявляются только при непосредственном его контакте с головным или спинным мозгом; он способен деполимеризовать нейроны в различных участках головного мозга. Внутривенное введение больших доз пенициллина иногда сопровождается незначительными нервными и сердечными осложнениями.Эритромицин и олеандомицин используют в виде малотоксических щелочей или солей. И все же большие их дозы способны вызвать незначительные диспептические явления.Линкомицин угнетает активность ряда ферментов пищеварения и иногда приводит к диспепсии. Известны случаи лейкопении и нейтропении после его использования, поражение печени с повышением содержания трансаминаз в крови. Ристомицин проявляет местное раздражающее действие, поэтому его вводят только в вену. Кроме того, длительное использование высоких доз этого препарата в вызывает поражение кроветворных органов, лейкопению, нейтропению, тромбоцитопению и агранулоцитоз. Поэтому не следует комбинировать его с левомицетином или другими гемотоксичными препаратами. Известны случаи его ототоксичного влияния, в связи с чем нельзя комбинировать ристомицин со стрептомицином и другими ототоксичными антибиотиками. Полимиксин М при парентеральном использовании проявляет нефротоксичное действие, поэтому его вводят только внутрь. В таком случае он не всасывается и не проявляет токсического действия. И только иногда наблюдаются диспептические явления.Нистатин и леворин менее токсичны и хорошо переносятся больными даже в больших дозах, поскольку они плохо растворяются и не всасываются.Как видно, многие антибиотики в организме вызывают, кроме лечебного эффекта, и нежелательные явления. Поэтому их использование требует от врача некоторой осторожности.Осложнение антибиотикотерапии
Обьекты, применяемые в биотехнологии (микроорганизмы, органы, ткани) Микроорганизмы как основные объекты биотехнологии В настоящее время микроорганизмы помогают людям в производстве эффективных питательных белковых веществ и биологического газа. Их используют при применении биотехнических методов очистки воздуха и сточных вод, при использовании биологических методов уничтожения сельскохозяйственных вредителей, при получении лечебных препаратов, при уничтожении утильсырья. Некоторые виды бактерий используются для регенерации ценных метаболитов и лекарств, их используют с целью решения проблем биологического саморегулирования и биосинтеза, очищения водоемов. Микроорганизмы, и прежде всего бактерии, - классический объект для решения общих вопросов генетики, биохимии, биофизики, космической биологии. Бактерии широко используются при решении многих проблем биотехнологии. Микробиологические реакции благодаря своей высокой специфичности широко используются в процессах химических превращений соединений биологически активных природных соединений. Известно около 20 типов химических реакций, которые осуществляются микроорганизмами. Многие из них (гидролиз, восстановление, окисление, синтез и пр.) с успехом используются в фармацевтической химии. При произведении этих реакций применяются разные виды бактерий, актиномицетов, дрожжеподобных грибов и других микроорганизмов. Промышленное использование микроорганизмов для получения новых пищевых продуктов способствовало созданию таких видов промышленности как хлебопекарская и молочная, производство антибиотиков, витаминов, аминокислот, спиртов, органических кислот и пр. Роль микроорганизмов для биотехнологии. 1. Одноклеточные организмы, как правило, характеризуются более высокими скоростями роста и синтетических процессов, чем высшие организмы. Тем не менее, это присуще не всем микроорганизмам. Некоторые из них растут крайне медленно, однако представляют известный интерес, поскольку способны продуцировать различные очень ценные вещества. 2. Особое внимание как объекты биотехнологических разработок представляют фотосинтезирующие микроорганизмы, использующие в своей жизнедеятельности энергию солнечного света. Часть из них (цианобактерии и фотосинтезирующие эукариоты) в качестве источника углерода утилизируют СО2, а некоторые представители цианобактерий, ко всему сказанному, обладают способностью усваивать атмосферный азот (т.е. являются крайне неприхотливыми к питательным веществам). Фотосинтезирующие микроорганизмы перспективны как продуценты аммиака, водорода, белка и ряда органических соединений. Однако прогресса в их использовании вследствие ограниченности фундаментальных знаний об их генетической организации и молекулярно-биологических механизмах жизнедеятельности, по всей видимости, не следует ожидать в ближайшем будущем. 3. Определенное внимание уделяется таким объектам биотехнологии, как термофильные микроорганизмы, растущие при 60-80°С. Это их свойство является практически непреодолимым препятствием для развития посторонней микрофлоры при относительно не стерильном культивировании, т.е. является надежной защитой от загрязнений. Среди термофилов обнаружены продуценты спиртов, аминокислот, ферментов, молекулярного водорода. Кроме того, скорость их роста и метаболическая активность в 1,5-2 раза выше, чем у мезофилов. Ферменты, синтезируемые термофилами, характеризуются повышенной устойчивостью к нагреванию, некоторым окислителям, детергентам, органическим растворителям и другим неблагоприятным факторам. В то же время они мало активны при обычных температурах. Так, протеазы одного из представителей термофильных микроорганизмов при 20°С в 100 раз менее активны, чем при 75°С. Последнее является очень важным свойством для некоторых промышленных производств. Например, широкое применение в генетической инженерии нашел фермент Tag-полимераза из термофильной бактерии Thermus aquaticus. Другие свойства микроорганизмов в биотехнологии Микроорганизмы могут быть использованы и при добыче угля из руд. Литотрофные бактерии (Thiobacillus ferrooxidous) окисляют сернокислое закисное железо до сернокислого окисного железа. Сернокислое окисное железо в свою очередь окисляет четырехвалентный уран, в результате чего уран в виде сульфатных комплексов выпадает в раствор. Из раствора уран извлекается методами гидрометаллургии. Кроме урана из растворов могут выщелачиваться и другие металлы, в том числе и золото. Бактериальное выщелачивание металлов за счет окисления содержащихся в руде сульфидов позволяет вести добычу металлов из бедных забалансованных руд. Очень выгодным и энергетически экономичным путем превращения органического вещества в топливо является метаногенез с участием многокомпонентной микробной системой. Метанобразующие бактерии совместно с ацетоногенной микрофлорой осуществляют превращение органических веществ в смесь мета и углекислоты. Микроорганизмы можно использовать не только для получения газообразного топлива, но и для повышения добычи нефти. Микроорганизмы могут образовывать поверхностно - активны вещества, снижающие поверхностно натяжение на границе между нефтью и вытесняющей ее водой. Вытесняющие свойства воды усиливаются с увеличением вязкости, что достигается применением бактериальной слизи, состоящей из полисахаридов. При существующих методах разработки нефтяных месторождений извлекается не более половины геологических запасов нефти. С помощью микроорганизмов можно обеспечить вымывание нефти из пластов и освобождение ее из битуминозных сланцев. Окисляющие метан бактерии, помещенные в нефтяной слой, разлагают нефть и способствуют образованию газов (метана, водорода, азота) и углекислоты. По мере накопления газов увеличивается их давление на нефть и, кроме того, нефть становится менее вязкой. В результате нефть из скважины начинает бить фонтаном. Необходимо помнить о том, что применение микроорганизмов в каких бы то ни было условиях, в том числе и в геологических, требует создания благоприятных условий для сложной микробной системы. Внесение избыточных антропогенных веществ ведет к нарушению установившегося естественного равновесия. На начальных этапах развития индустрии было достаточно рассеять загрязняющие вещества в водотоках, из которых они удалялись путем естественного самоочищения. Газообразные вещества рассеивали в воздухе через высокие трубы. В настоящее время уничтожение отходов выросло в очень серьезную проблему. В очистительных системах при очистке вод от органических веществ используется биологический метод с применением системы смешанной микрофлоры (аэробные бактерии, водоросли, простейшие, бактериофаги, грибы), активного ила, биопленки, окисляющих поступающих веществ. Представители микробной смеси способствуют интенсификации естественных процессов очистки воды. Но при этом следует помнить, что условием устойчивой работы микробного сообщества служит постоянство состава окружающей среды. Одной из задач биотехнологии является разработка технологии получения с помощью микроорганизмов белка из различных видов растительных субстратов, из метана и очищенного водорода, из смеси водорода и окиси углерода, из тяжелых углеводородов нефти с помощью метилотрофных дрожжей или бактерий, Candida tropicalis, метаноокисляющих и целлюлозоразрушающих бактерий и других микробов. Использование активных штаммов видов микроскопических грибов способствует обогащению белками и аминокислотами таких кормов как комбикорм, жом, отруби. Для этой цели используют селекционированные нетоксичные быстро растущие виды термо- и мезофильных микромицетов Fusarium sp., Thirlavia sp., а также некоторые виды высших грибов. Биотехнология производства культуры клеток, тканей и органов растений Клеточные технологии, основанные на культивировании in vitro органов, тканей, клеток и изолированных протопластов высших растений, могут облегчить и ускорить традиционный процесс создания новых сортов и видов. Они предлагают принципиально новые пути, такие как сомаклональная изменчивость, мутагенез на клеточном уровне, клеточная селекция, соматическая гибридизация для создания генетического разнообразия и отбора форм с искомыми признаками. Кроме того, клеточные технологии эффективны в создании безвирусного материала вегетативно размножаемых растений. Пионером клонального микроразмножения считается французский ученый Жан Морель, который в 50-х годах прошлого столетия получил первые растения – регенеранты орхидей. В это время техника культивирования апикальных меристем in vitro была уже хорошо разработана. Как правило, исследователи в качестве первичного экспланта использовали верхушечные меристемы травянистых растений: гвоздики, хризантемы, подсолнечника, гороха, кукурузы и т.д. В нашей стране работы по микроклональному размножению были начаты в 30-х годах в лаборатории культуры тканей и морфогенеза ИФР РАН. Под руководством Р.Г. Бутенко были изучены условия микроразмножения картофеля, сахарной свеклы, гвоздики, герберы и др. растений и предложены промышленные технологии. В дальнейшем исследования по микроклональному размножении охватили и древесные растения. Первые работы по культуре тканей древесных растений были опубликованы в середине 20-х годов ХХ-го столетия и связаны с именем Готре, который показал, что камбиальные ткани некоторых растений способны к каллусогенезу in vitro. Но первые растения - регенеранты осины, доведенные до почвенной культуры, были получены лишь в середине 60-х годов Матесом. Культивирование тканей хвойных пород in vitro долгое время редко использовалось как объект исследования. Это было связано со специфическими трудностями культивирования тканей, изолированных из растения. Известно, что древесные, и особенно хвойные растения характеризуются медленным ростом, трудно укореняются, содержат большое количество вторичных соединений (фенолы, терпены и т.д.), которые в изолированных тканях активируются. Окисленные фенолы обычно ингибируют деление и рост клеток, что ведет к гибели первичного экспланта или уменьшению способности тканей древесных растений к регенерации адвентивных почек, которая с возрастом растения-донора исчезает практически полностью. В настоящее время, несмотря на перечисленные трудности, насчитывается более 200 видов древесных растений из 40 семейств, которые были размножены in vitro (каштан, дуб, береза, клен, сосна, ель, секвойя и др.). Микробиологический контроль фармацевтических учреждений: виды, компетентность бактериологических служб, объекты исследований, нормативные документы. Микробной порче подвергаются готовые лекарственные формы : сухие (порошки, сборы), жидкие ( микстуры , настои , отвары , капли) , мягкие (мази , пасты , шарики , свечи) и стерильные инъекционные препараты. Лекарства с высоким обсеменениям микробами , особенно патогенными , могут вызывать инфекционные заболевания у людей . К фитозоонозам - инфекции, вызываемые патогенными микроорганизмами , общими для теплокровных ( включая человека ) и растений чаще всего относят кишечные иерсиниоз , листериоз , псевдотуберкулез , микотоксикозы . Размножение микроорганизмов в готовых лекарствах ведет к изменению их физических и органолептических свойств , появлению токсичности . Микробная обсеменение лекарственных препаратов зависит от соблюдения в аптеке санитарно - эпидемического режима, регламентируется в настоящее время приказом МЗ РФ № 309 от 21.10.97 «Об утверждении инструкции по санитарному режиму аптечных организаций (аптек)». Причиной микробного обсеменения готовых лекарств может быть микробное загрязнение растительного лекарственного сырья, воздуха производственных помещений, оборудования, посуды, дистиллированной, рук персонала. Инъекционные препараты , глазные капли и мази, препараты для новорожденных должны быть стерильными . В ряде случаев инъекционные средства , оставаясь стерильными , обладают пирогенными свойствами. Пирогенная реакция организма, возникающая за счет применения лекарств , характеризуется повышением температуры , вазомоторными расстройствами, в тяжелых случаях - шоковым состоянием. Пирогенные вещества ( пироген ) , что является эндотоксинами (преимущественно грамотрицательных бактерий ), не инактивируються при кипячении , для их разрушения необходимо автоклавирование в течение 3 час. И причиной пирогенности лекарственных препаратов (появление эндотоксинов и в результате - пирогенности) является микробное загрязнение воды дистиллированной, нарушения асептики технологического процесса, увеличение времени между приготовлением раствора и стерилизацией. С жидких инъекционных лекарственных форм легче обсеменяються микробами настои і отвары; при их хранении появляются признаки порчи: помутнение, смена цвета, пленка, необычный запах. Срок хранения этих препаратов ограничен. Спиртные настойки меньше склонны к порче в следствие антимикробного действия алкоголя. Сухие порошкообразные вещества, особенно тальк и крахмал, мягкие лекарственные формы также подвержены микробного загрязнения. Их микробная порча носит очаговый характер и проявляется изменением цвета и консистенции вещества. Микробный состав готовых лекарств -плесневые и дрожжевые грибы- Penicillium, Aspergillus, Mucor; -коки - сарцины, стафилококки; -спороносные палочковидные бактерии - B. subtillis, B. Mesentericus Кандида Стафилококки Предупреждение микробного порчи готовых лекарственных веществ возможно при соблюдении условий, снижающих их микробное загрязнение: соблюдения правил личной гигиены, качественное обеззараживание воздуха аптечных помещений, правильная обработка посуды, оборудование, при необходимости (стерильные лекарства) - асептическое изготовление. Стерилизация механическим способом Микрофлора нестерильных лекарственных форм. Нестерильными называют лекарственные формы, в которых допускается содержание определенного количества непатогенных микробов. Основные лекарственные формы: настои, настойки, порошки, пилюли, мази, капли и др. Признаки порчи нестерильных лекарственных препаратов: смена цвета, неприятный запах, помутнение, осадок, пленка, изменение консистенции. У жидких і мягких лекарственных формах условия для роста і размножение микроорганизмов более подходящие. Это связано с высоким содержанием воды, растительных масел и отсутствием консервантов в составе многих мазей. Более того, содержание в составе мазей антимикробных веществ не всегда гарантирует их микробную чистоту. У жидких лекарственных формах метаболиты микроорганизмов могут сменить его химический состав, а также привести к образованию токсичных продуктов. У твердых лекарственных формах риск микробной порчи минимальный, поскольку отсутствуют условия для размножения микробов. Большая загрязненность сырья, ее неправильное хранение может приводить к изменению свойств. Для соблюдения санитарного режима изготовление лекарственных препаратов проводится санитарно-микробиологический контроль объектов окружающей среды, предприятия и каждой серии лекарственной формы, что выпускается. Контроль стерильности лекарственных средств проводится путем посева на тиогликолевую среду для выявления различных бактерий, в частности анаэробов; при посеве на среду Сабуро выявляют грибы, главным образом рода Кандида. Стерильность лекарственных средств с антимикробным действием определяют путем мембранной фильтрации: фильтр после фильтрации исследуемого препарата делят на части и вносят для подращивания задержанных микроорганизмов к жидким питательным средам. При отсутствии роста препарат считается стерильным. Лекарственные средства, что не требуют стерилизации, содержат микроорганизмы, поэтому их исследуют на микробную чистоту: проводят количественное определение жизнеспособных бактерий і грибов в 1г или 1мл препарата, а также проявляет микроорганизмы (бактерии семейства энтеробактерий, синегнойная палочка, золотистый стафилококк), которые не должны быть имеющимися в нестерильных лекарственных средствах . У нестерильных лекарственных формах определяют: 1.Микробное число - количество бактерий и грибов в 1 г (мл). 2.Наявность кишечной палочки, золотистого стафилококка, синегнойной палочки. Нормы микробов в нестерильных лекарственных формах: 1. У 1г (мл) препарата для прийома внутрь не более 1000 бактерий і 100 грибов. 2 В 1г (мл) препарата для местного применения - не более 100 микробов, в т.ч. грибов. 3. У таблетированных препаратах не должно быть патогенной микрофлоры, а общая обсемененность не должна превышать 10 тис. микробных клеток на таблетку. 4. Не допускается наличие кишечной палочки, золотистого стафилококка, синегнойной палочки. Пути повышения микробной чистоты нестерильных лекарственных средств. Зависит от источников и путей попадания микроорганизмов у лекарственных средствах возможны разные подходы к обеспечению необходимого уровня микробной чистоты нестерильных лекарственных средств . Если микробное обсеменение вызвано попаданием вместе с сырьем, то для достижения необходимого уровня микробной чистоты достаточно очистить от микроорганизмов сырье. Если обсеменение микробами происходит в процессе изготовления, то проводят деконтаминацию готовой лекарственной формы. Предварительного обеззараживания можно достичь передвижением сыпучих материалов (при отсутствии споровых микроорганизмов, низкой влажности исходного порошка и высокого давления). На практике применяют четыре способа деконтаминации сырья и готовых лекарственных средств. Термический способ . Широко распространенный метод промышленной деконтаминации . Не пригоден для обработки термолабильных лекарственных форм , для которых применяют прогревание до 60-70 ° С горячим воздухом , инфракрасное и высокочастотное излучение . Химический способ . Пригоден для стерилизации светонепроницаемый веществ (бактерицидное действие реализуется на глубине 1 мм). Чаще всего его используют для обработки упаковочного материала и технологической воды . Возможна обработка УФ - лучами формообразующих веществ ( крахмала , талька , сахара) в дисперсном состоянии ( при перемешивании ) . Ионизирующее излучение . Наиболее перспективный способ деконтминациы сырья и готовых лекарственных форм . Ионизирующее излучение обладает высокой проникающей способностью. При облучении не образуются канцерогенные , мутагенные , токсичные вещества , сохраняются физико - химические и биологические свойства обрабатываемых лекарств. Метод используют для обработки антибиотиков , витаминов , ферментов , гормонов и алкалоидов. Стерильные и асептические лекарственные формы . Стерильные ( безмикробные ) лекарственные формы готовят в асептических условиях и стерилизуют. К ним относятся растворы для инъекций , глазные капли , препараты для детей до 1 года. Стерильные лекарственные формы . Источники загрязнения и методы бактериологического контроля Асептические лекарственные формы готовят в асептических условиях без стерилизации. Асептика - предупреждение попадания микробов в лекарственный препарат. Асептические и стерильные лекарственные формы готовят в асептических условиях : 1 . Требования к помещению. Помещение называется асептический блок . Уборка в нем проводится 1 раз в смену с использованием дезинфицирующих растворов ( хлорамин Б - 1 % , перекись водорода - 3%). Для стерилизации воздуха и поверхностей применяют бактерицидные лампы. Отбор проб для бактериологического исследования ( силами центров ДСЕН ) различных объектов в аптеках проводится не менее 2 раз в квартал. Пробы воздуха отбирают аспирационным методом с помощью аппарата Кротова . Микробное число воздуха в асептическом блоке не должно превышать 500 - 750 до и 1000 Мк/м3 после работы, а золотистого стафилококка , плесневых и дрожжевых грибов не должно быть в 250 л воздуха ни до, ни после работы . 2.Требования к аптечной посуды , дистиллированной воды . Они обрабатываются в автоклаве ( 120 ° - 1 атм . - 45 мин . Или 132 ° - 2 атм . - 20 мин ) . 3 . Требование к персоналу. Персонал работает в стерильной одежде (халат , шапочка , бахилы , марлевая повязка ) , обрабатывает руки дезраствором . 4 ( 0,5 % р -р хлорамина Б или этанол - 80 % ) . В стерильных лекарственных формах содержание микроорганизмов не допускается , в асептических - допускается не более 10-15 в 1г ( мл ) . Нормативными документами, регламентирующими санитарный режим аптечных организаций и микробиологический контроль качества лекарственных средств являются: - «Методические указания по микробиологическому контролю в аптеках » , 1985 г. ; - Приказ МЗРФ № 53 от 25.03.94 года " Об усилении контроля качества лекарственных средств"; - Приказ № 118 от 14.06.94 года " О аккредитации региональных ( территориальных) контрольно - аналитических лабораторий ( центров контроля качества лекарственных средств ) и сертификации лекарственных средств - Приказ № 309 МЗ РФ от 21 октября 1997г . « Об утверждении инструкции по санитарному режиму аптечных организаций ( аптек) » ( см. придажение № 3). 5 . Объекты санитарно - бактериологического обследования в аптеках В аптеках согласно инструкции , утвержденной приказом Министерства здравоохранения , не менее двух раз в квартал осуществляется бактериологический контроль , объектами которого служат : • вода дистиллированная ; • инъекционные растворы до и после стерилизации ; • глазные мази после стерилизации ; • глазные капли , приготовленные в асептических условиях на стерильной основе; • сухие лекарственные вещества , используемые для приготовления инъекционных растворов ; • нестерильные лекарственные формы; • аптечная посуда , пробки , прокладки , другие материалы ; • инвентарь , оборудование , руки , санитарная одежда персонала ; • воздух аптечных помещений. 6 . Определение микрофлоры в лекарственных формах При исследовании лекарственных форм осуществляют: определения общего микробного числа ( микробная обсемененность ) • определение бактерий группы кишечной палочки • определение дрожжевых и плесневых грибов ; • определение условное - патогенных и патогенных микроорганизмов Общее микробное число ( ОМЧ ) - количество микроорганизмов , содержащихся в 1 г ( мл) препарата , определяют по числу выросших колоний . Определение микробной обсемененности растительного лекарственного сырья В асептических условиях (в стерильной чашке Петри, обоженными ножницами и пинцетом ) из листа или верхнего слоя корневища вырезают кусочек площадью 1 см2 , который помещают в пробирку с 10 мл стерильного физиологического раствора и взбалтывают в течение 5 мин . Из полученного смыва готовят четыре десятиразовым разведения (1:10 , 1:100 , 1:1000 , 1:10000 ) , для посева в связи с большим обсеменением растительного сырья используют два последних ( 1: 1000 и 1: 10000 ) разведения. В стерильную чашку Петри вносят 1 мл смыва , после чего в нее наливают 15 мл расплавленного и остуженного до 45 ° С МПА , перемешивают и после застывания агара посевы инкубируют при 37 ° С 24 - 48 час. Делают подсчет колоний , выросших на поверхности и в глубине агара . Полученное число колоний умножают на степень разведения. Бактериологическое исследование стерильных лекарственных средств Инъекционные растворы , глазные капли , лекарственные средства для новорожденных , другие лекарственные препараты, стерилизуются в процессе их изготовления , засевают неразведенными в тиогликолевой среда для определения микробной обсемененности и среду Сабуро для выявления дрожжевых и плесневых грибов . Посевы на тиогликолевой среде выдерживают 14 суток при 37 ° С , на среде Сабуро 14 суток при 24 ° С. Учет результатов посевов проводят по отсутствию видимых изменений в посевах . Определение микробной обсемененности готовых лекарств Жидкие лекарственные формы разводят стерильным физиологическим раствором 1:10 ( или 1:100 ) и засевают в объеме 0,5 мл на МПА в чашке Петри. 1г порошка или таблеток помещают в пробирку с 10 мл физиологического раствора и после растворения проводят посев на МПА . Мягкие лекарственные формы (мази , пасты) в количестве 1 г взвешивают в асептических условиях , переносят в пробирки с 10 мл стерильного 1,4 % раствора натрия гидрокарбоната для диспергирования проводимое вращательным движением пробирки между ладонями в течение 2-4 мин . , 0,5 мл полученного раствора засевают на МПА в чашках Петри. Чашки с посевами помещают в термостат на 48 ч, затем подсчитывают число колоний и определяют количество бактерий в 1 мл или 1 г образца . Определение общего количества грибов Определение общего количества грибов проводят на твердой среде Сабуро , на которое засевают 0,5 мл цельного или разведенного 1:10 препарата . Посевы инкубируют при 24 ° С в течение 5 суток , затем подсчитывают число выросших колоний и определяют количество грибов в 1 мл (1 г ) препарата . Качественное определение условно - патогенных и патогенных микроорганизмов 1 . Определение бактерий семейства Enterobacteriaceae ( роды Escherichia , Salmonella , Shigella ) . Посев лекарственных средств проводят на среду Эндо и висмут - сульфитный агар . Идентификацию энтеробактерий осуществляют следующим образом: если в образце обнаружены грамотрицательные неспорю палочки дают отрицательную реакцию на цитохромоксидазы , ферментируют глюкозу и восстанавливают нитраты в нитриты , исследуемый препарат содержит бактерии семейства Enterobacteriaceae . 2 . Определение патогенных стафилококков . Определение патогенных стафилококков проводят посевом на желточно - солевой агар . На этой среде патогенные стафилококки вызывают расщепление лецитина , проявляющееся в просветлении вокруг колоний зоны помутнения с радужным венчиком по периферии . Выделенную чистую культуру исследуют на наличие плазмокоагулазы . 3 . Выявление Pseudomonas aeruginosa . Осуществляют на среде с глицерином. Синегнойная палочка в этой среде образует зеленоватые флуоресцирующие колонии , выделяющие в среду сине , - зеленый пигмент. 4 . Выявление протея . Проводят посевом на МПА по Шукевичу . Наличие условно - патогенных и патогенных микроорганизмов в лекарственных препаратах недопустимо . Согласно требованиям Государственной фармакопеи XI издания приняты следующие критерии оценки микробной обсемененности лекарственных средств. Определение пирогенности Пирогенности (повышение температуры тела ) обусловлена наличием в стерильных лекарственных препаратах продуктов распада бактерий ( липополисахаридов ) . Стерильные инъекционные растворы должны быть апирогенны . Определение пирогенности проводят на здоровых кроликах обоих полов, не альбиносы , весом 2,5-3,0 кг , содержащихся на полноценном рационе. Испытываемую дистиллированную воду или лекарственные средства вводят трем кроликам в ушную вену в количествах и растворителях , предусмотренных соответствующими инструкциями . Воду для инъекций и раствор лекарственного средства считают непирогенним если сумма повышений температуры 3 кроликов меньше или равна 1,4 ° С. Если сумма превышает 2,2 ° С, то испытуемые растворы считают пирогенными . В случаях , когда сумма повышений температуры 3 кроликов находится в пределах от 1,5 до 2,2 ° С , испытания проводят на 5 кроликах . В этом случае раствор считают непирогенним , если сумма повышений температуры у всех 8 кроликов не превышает 3,7 ° С. В соответствии с Постановлением ЦК КПСС и Совета Министров СССР от 19.08.82 "О дополнительных мерах по улучшению охраны здоровья населения" санитарно-эпидемиологическая служба придает особо важное значение дальнейшему совершенствованию форм осуществления государственного санитарного надзора, значительная роль в котором отводится проведению текущего санитарного контроля. Разработанные Методические указания представляют дополненные по некоторым показателям "Методические указания по микробиологическому контролю в аптеках" <*> N 1201-74 от 04.12.74, внедрение которых будет способствовать повышению эффективности текущего санитарного надзора за режимом аптек. Объекты бактериологического контроля Объектами бактериологических исследований являются: 1.1. Вода дистиллированная. 1.2. Инъекционные растворы до стерилизации. 1.3. Инъекционные растворы после стерилизации. 1.4. Глазные капли после стерилизации. 1.5. Глазные капли, приготовленные в асептических условиях на стерильных основах. 1.6. Сухие лекарственные вещества, используемые для изготовления инъекционных растворов. 1.7. Аптечная посуда, пробки, прокладки, прочие вспомогательные материалы. 1.8. Инвентарь, оборудование, руки и санитарная одежда персонала. 1.9. Воздушная среда. 2. Отбор проб Отбор проб для исследования производят сотрудники санитарно-эпидемиологических станций, а при проведении исследований в лечебно-профилактических учреждениях - работники бактериологической лаборатории. Кратность обследований с отбором проб составляет не менее 2-х раз в квартал. 2.1. Пробы дистиллированной воды, используемой для приготовления лекарственных средств (кроме лекарств для инъекций и глазных капель), отбирают в количестве 30 куб. см в стерильные бутылки с последующим закрытием ватными пробками и бумажными колпачками. Пробы отбирают из бюретки, конец которой предварительно обжигают ватой, смоченной спиртом. При неудовлетворительных результатах анализа отбор пробы проводят из приемника. При наличии в аптеке трубопровода для дистиллированной воды отбор проб осуществляют из бюретки над столом ассистента и дефектара. Для оценки санитарного содержания трубопровода выемки дистиллированной воды производят непосредственно из трубопровода и затем из бюреток. Оценка результатов бактериологического исследования производится в соответствии с требованиями ГОСТ 2874-82 "Вода питьевая". 2.2. Пробы дистиллированной воды, используемой для приготовления инъекционных растворов и глазных капель, отбирают в стерильные флаконы в количестве 15 - 20 куб. см непосредственно из емкостей, в которых осуществляется стерилизация. 2.3. Инъекционные растворы (до стерилизации) отбирают во время их приготовления, но не позднее полутора часов, и доставляют в лабораторию в тех же флаконах, в которых они будут подвергнуты стерилизации. 2.4. Инъекционные растворы, глазные капли после стерилизации и приготовленные асептическим способом доставляют в аптечной упаковке. 2.5. Глазные капли из торгового зала аптек доставляют непосредственно во флаконах, отпускаемых в лечебно-профилактические учреждения и населению. Целесообразно отбирать глазные капли 3 - 4 наименований как со стола ассистента, так и прилавка. 2.6. Отбор сухих лекарственных веществ <*> проводят стерильными ложками в стерильную посуду лаборатории в количестве 30 - 50 г. В случае, если вещество таблетированное, то отбирают фламбированным пинцетом в стерильную посуду лаборатории в количестве 30 - 50 г. 2.7. Аптечную посуду, подготовленную для розлива инъекционных растворов и глазных капель, отбирают в момент приготовления их в количестве трех штук одинаковой емкости. Флаконы доставляют в лабораторию в укупоренном виде, используя при этом пробки и прокладки, для отпуска лекарственных средств. 2.8. Пробки (корковые, полиэтиленовые) и прокладки отбирают в момент приготовления инъекционных растворов и глазных капель пинцетом после фламбирования и помещают по пять штук в широкогорлые стерильные колбы или банки с последующим закрытием стерильными ватно-марлевыми пробками и бумажными колпачками. 2.9. Фильтровальные воронки, пипетки, мерные колбы, цилиндры, используемые для приготовления инъекционных растворов, контролируют путем ополаскивания их 10 куб. см стерильной водопроводной воды. 2.10. Используемые в аптеках пипетки прополаскивают несколько раз в пробирке, содержащей 10 куб. см стерильной водопроводной воды, пробирки со смывной жидкостью доставляют в лаборатории для исследования. 2.11. Смывы с инвентаря, оборудования, рук и санитарной одежды персонала аптеки осуществляют с помощью ватных тампонов, помещенных в пробирки с 2 куб. см 0,85% раствора хлорида натрия или 0,1% пептонной воды. 2.12. Пробы воздуха отбирают в следующих помещениях: - в асептическом блоке, стерилизационной; - ассистентской, фасовочной, комнате дефектара и материальной; - в моечной; - в зале обслуживания. Отбор проб воздуха производят при соблюдении следующих условий: - чистое подготовленное к работе помещение; - закрытые форточки и двери; - определение в помещении % относительной влажности воздуха; - уровень высоты отбора проб воздуха соответствует высоте рабочего стола; - не ранее чем за 30 мин. после влажной уборки помещения. Пробы воздуха отбирают аспирационным методом с помощью приборов для бактериологического анализа воздуха: модель 818 (прибор Кротова), ПОВ, ПАБ. Скорость протягивания воздуха должна составлять 25 литров в минуту, количество пропущенного воздуха - 100 литров для определения общего количества бактерий; 250 литров для определения золотистого стафилококка и 250 литров для определения плесневых и дрожжевых грибов. Для определения общего содержания бактерий в 1 куб. м отбор производят на 2% питательный агар, разлитый в чашки по 12 - 15 мл. Для определения золотистого стафилококка используют желточно-солевой агар, для определения плесневых и дрожжевых грибов - среду Сабуро. 3. Методики исследования 3.1. Исследования дистиллированной воды, используемой для приготовления лекарственных средств (кроме лекарств для инъекций и глазных капель). 3.1.1. Определение количества мезофильных аэробных и факультативных анаэробных бактерий в 1 куб. см дистиллированной воды. Исследуемую воду вносят по 1 куб. см в две параллельные чашки Петри, которые затем заливают питательным агаром и выдерживают 24 часа при температуре 37 град. C и 24 часа при комнатной температуре. После этого подсчитывают число выросших колоний как на поверхности, так и внутри питательного агара. Подсчет колоний проводится обязательно с помощью лупы, так как колонии бактерий даже после 48-часового инкубирования могут быть настолько мелкими, что невооруженным глазом не видны. При вычислении результатов анализа выводят среднее арифметическое из числа колоний, выросших на обеих чашках. Для выявления плесневых и дрожжевых грибов засевают по 0,5 куб. см исследуемой воды на поверхность двух чашек Петри со средой Сабуро и инкубируют при температуре 20 - 22 град. C в течение 3 - 4 суток. Затем подсчитывают число колоний плесневых и дрожжевых грибов на обеих чашках. Результаты оценивают по общему количеству непатогенных микроорганизмов путем суммирования числа бактерий, выросших на чашках с питательным агаром и на среде Сабуро<*> <*> Приказ Минздрава СССР N 537 от 30.11.62, приложение N 1. 3.1.2. Определение титра бактерий группы кишечной палочки Методика действующего Госстандарта 18963-73 "Вода питьевая. Методы санитарно-биологического анализа". 3.2. Исследование дистиллированной воды для приготовления инъекционных растворов и глазных капель, инъекционных растворов до стерилизации и глазных капель, приготовленных в асептических условиях на стерильных основах. 3.2.1. Определение количества мезофильных аэробов и факультативных анаэробов производят в соответствии с пунктом 3.1.1. 3.2.2. Определение наличия бактерий группы кишечных палочек в 1,0 куб. см. Лекарственные средства засевают в количестве 1 г (куб. см) на 9 куб. см разведенной глюкозо-пептонной среды, среды Кесслер и Кода. Посевы выращивают при температуре 37 град. C в течение 18 - 24 часов с дальнейшим высевом секторами на среду Эндо, последнюю инкубируют при температуре 37 град. C 18 - 24 часа и проводят просмотр посевов. Из подозрительных колоний делают мазки, красят по Граму и микроскопируют. При наличии грамотрицательных палочек оставшуюся часть колоний пересевают на глюкозо-пептонной среду с поплавком, инкубируют при 37 град. C в течение 18 - 24 часов. Наличие кислоты и газа на глюкозо-пептонной среде обусловливает содержание бактерий группы кишечных палочек. 3.2.3. Количественное определение бактерий группы кишечных палочек. 1 г (куб. см) лекарственных средств засевают на чашку и заливают средой Эндо, т.е. применяют глубинный метод посева. После инкубации посевов при температуре 37 град. C в течение 18 - 24 часов учитывают колонии, типичные для бактерий группы кишечной палочки. 3.3. Исследование сухих лекарственных веществ, используемых для приготовления инъекционных растворов и глазных капель. Исследования проводят в случаях неоднократных неудовлетворительных бактериологических анализов, превышения норм предельно допустимого содержания непатогенных микроорганизмов <*>, при удовлетворительных результатах анализов дистиллированной воды, используемой для их приготовления, при удовлетворительных данных бактериологического контроля посуды, флаконов, пробок, прокладок. Результаты, полученные при исследовании сухих лекарственных веществ, служат одним из оснований для выбора партии при приготовлении инъекционных растворов. -------------------------------- <*> Приказ Минздрава СССР N 537 от 30.11.62, приложение N 1. Сухие лекарственные вещества разводятся стерильной дистиллированной водой с целью создания соответствующих концентраций инъекционным растворам и глазным каплям, изготовляемым в аптеках. Объем и методика исследования приготовленных растворов см. пункт 3.2. Результаты, полученные при исследовании сухих веществ в растворах, должны соответствовать требованиям приложения Приказа N 573, такие же требования предъявляются к глазным каплям, приготовленным в асептических условиях на стерильной основе. 3.4. Исследования аптечной посуды, пробок, прокладок, воронок, цилиндров. 3.4.1. Подготовка к исследованию. Три одноименных флакона, доставленные в лабораторию, последовательно ополаскивают в 10 куб. см стерильной водопроводной воды. Воду из флакона во флакон переливают над пламенем горелки, тщательно споласкивая каждый флакон. В банки или широкогорлые колбы с доставленными пробками и прокладками наливают 10 куб. см стерильной водопроводной воды и тщательно споласкивают. 3.4.2. Определение в смывной жидкости: - количество мезофильных аэробных и факультативно анаэробных бактерий (см. пункт 3.1). Число колоний, установленное в 1 куб. см смывной жидкости, умножают на 10, что соответствует содержанию бактерий на всей смывной поверхности 3-х одноименных предметов; - определение наличия бактерий группы кишечных палочек: 8 куб. см оставшейся смывной жидкости засевают в 1 куб. см концентрированной глюкозо-пептонной среды и инкубируют при температуре 37 град. C в течение 18 - 24 часов. Дальнейший ход исследования и идентификацию бактерий группы кишечных палочек проводят по пункту 3.1. 3.4.3. Интерпретация результатов бактериологических исследований: - количество мезофильных аэробов и факультативных анаэробов не должно превышать 150 колоний с 3-х флаконов, 5-ти пробок, 5-ти прокладок (т.е. в 10 куб. см смывной жидкости); - бактерии группы кишечной палочки не допускаются. 3.5. Методика исследования воздуха. Доставленные чашки с посевами на питательном агаре и желточно-солевом агаре инкубируют в термостате при 37 град. C в течение 24 часов, посевы на желточно-солевом агаредополнительно выдерживают еще 24 часа при комнатной температуре. Посевы на среде Сабуро инкубируют при температуре 22 - 28 град. C 4 суток. Для определения общей бактериальной обсемененности через 48 часов посевы просматривают, подсчитывают количество выросших колоний и производят пересчет на 1 куб. м. Для определения количественного содержания золотистого стафилококка просматривают посевы на желточно-солевом агаре после 48-ми часов инкубации, колонии, подозрительные на стафилококк, подсчитывают и проводят идентификацию <*>. После идентификации производят пересчет полученных результатов на 1 куб. м воздуха. <*> Приложение N 2 к Приказу Минздрава СССР N 720 от 31.07.78. Клинические проявления инфекционного процесса по степени выраженности. Классификация инфекционных заболеваний по количеству возбудителей, вызвавших заболевание, по локализации в организме, по течению. Определение понятий «реинфекция», «рецидив», «суперинфекция». Инфекция - сумма биологических реакций, которыми макроорганизм отвечает на внедрение микробного (инфекционного) агента, вызывающего нарушение постоянства внутренней среды (гомеостаза). Аналогичные процессы, вызванные простейшими, называются инвазиями. Сложный процесс взаимодействия между микроорганизмами и их продуктами, с одной стороны, клетками, тканями и органами человека — с другой, характеризуется чрезвычайно широким разнообразием своего проявления. Патогенетические и клинические проявления этого взаимодействия между микроорганизмами и макроорганизмом обозначаются термином инфекционная болезнь (заболевание). Другими словами, понятия "инфекционная болезнь" и "инфекция" абсолютно не равнозначны, заболевание — это только одно из проявлений инфекции. Хотя даже в специальной медицинской литературе в настоящее время термин "инфекция" достаточно широко употребляется для обозначения соответствующих инфекционных болезней. Например, в выражениях "кишечные инфекции", "воздушно-капельные Sинфекции", "инфекции, передающиеся половым путем". Инфекционные болезни по-прежнему наносят огромный ущерб человечеству. Они вышли на первое место среди других болезней, составляя 70% всех заболеваний человека. За последние годы зарегистрировано 38 новых инфекций — так называемых эмерджентных болезней, в том числе ВИЧ, геморрагические лихорадки, "болезнь легионеров", вирусные гепатиты, прионные болезни; причем в 40% случаев это нозологические формы, ранее считавшиеся неинфекционными. Особенности инфекционных болезней состоят в следующем: • их этиологическим фактором является микробный агент; • они передаются от больного здоровому; • оставляют после себя ту или иную степень невосприимчивости; • характеризуются цикличностью течения; • имеют ряд общих синдромов. 2. В соответствии с этими особенностями любое инфекционное заболевание имеет определенные клинические стадии (периоды) своего течения, выраженные в той или иной степени: • инкубационный период — период от момента проникновения инфекционного агента в организм человека до появления первых предвестников заболевания. Возбудитель в этот период обычно не выделяется в окружающую среду, и больной не представляет эпидемиологической опасности для окружающих; продромальный период — проявление первых неспецифических симптомов заболевания, характерных для общей интоксикации макроорганизма продуктами жизнедеятельности микроорганизмов и возможным действием бактериальных эндотоксинов, освобождающихся при гибели возбудителя; они также не выделяются в окружающую среду (хотя при кори или коклюше больной в этот период уже эпидемиологически опасен для окружающих); период разгара заболевания — проявление специфических симптомов заболевания. При наличии в этом периоде развития заболевания характерного симптомокомплекса клиницисты называют такое проявление заболевания манифестной инфекцией, а в тех случаях, когда заболевание в этот период протекает без выраженных симптомов, — бессимптомной инфекцией. Этот период развития инфекционного заболевания, как правило, сопровождается выделением возбудителя из организма, вследствие чего больной представляет эпидемиологическую опасность для окружающих; период исходов. В этот период возможны: Реинфекция-повторное заражение перенесшего заболевание организма тем же самым или др. вариантом определенноговида возбудителя. Встречается в тех случаях, когда заболевание не привело к развитию достаточнонапр.яженного иммунитета или иммунитет быстро утратил свою активность. Для предупреждения развития Р., так же как и рецидива, проводят комбинированное лечение б-ного антибиотиками и вакцинами; выявляют илечат (санируют) б-ных (носителей) аналогичной патологией из окружения б-ного; изолируют б-ного. Рецидив- возобновление болезни после кажущегося полного выздоровления (ремиссии). Рецидив объясняется тем обстоятельством, что патоген в ходе лечения не полностью исчезает из организма и, в определённых условиях, вновь вызывает появление симптомовзаболевания. Клиническая картина рецидива, как правило, повторяет клиническую картину первичного заболевания, нередко в усугубленной форме. К рецидиву не относится реинфекция — повторное заражение тем же (или незначительно мутировавшим) инфекционным агентом из внешней среды, что и первичный. Также к рецидиву не относится активация патологического процесса в метастазе (рецидивом считается возобновление роста опухоли на её исходном месте). Суперинфекция- процесс, в результате которого клетка, изначально зараженная одним вирусом, коинфицируется через какое-то время (en:coinfection) другим штаммом вируса или другим вирусом. Вирусные суперинфекции могут привести к появлению резистентныхштаммов вирусов, для лечения которых потребуются иные препараты. Например, коинфекция человека двумя разными штаммами вируса ВИЧ может привести к образованию штамма, резистентного к антиретровирусной терапии. Также, показано, что комбинированная инфекция уменьшает общую эффективность иммунного ответа. |