микробиология контрольная. Контрольная работа 1 по микробиологии Вариант 9 Клабукова Анастасия Александровна Курса 1
 Скачать 0.58 Mb.
|
|
Диагностические иммунные сыворотки. Диагностические сыворотки в условиях лабораторий применяют для постановки серологических реакций с целью идентификации выделенных микроорганизмов и обнаружения растворимых белков микробного происхождения. Готовят их путем гипериммунизации кроликов или других животных микробными или вирусными антигенами, иногда клетками организма животных (эритроцитами). Используют агглютинирующие сыворотки (сальмонеллезные, колибактериозные, листериозные и др.), преципитирующие (сибироязвенная), гемолитические в РСК. Диагностические иммунные сыворотки часто метят флюорохромами и применяют для экспресс-диагностики инфекционных болезней (флюоресцирующая сальмонеллезная сыворотка, листериозная и др). Из диагностических сывороток готовят иммуноглобулины (антирабический флюоресцирующий иммуноглобулин для диагностики бешенства). Диагностические сыворотки должны обладать строгой специфичностью и высокой чувствительностью. Серологические реакции: виды, использование Реакция агглютинации (РА) Серологическая реакция агглютинация является высокоспецифичной. Она проста в исполнении и достаточно наглядна, чтобы быстро определить наличие антигенов в сыворотке крови больного. Ее используют для постановки реакции Видаля (диагностика брюшного тифа и паратифа) и Вейгля (сыпной тиф). Она основана на специфическом взаимодействии между антителами человека (или агглютининами) и микробными клетками (агглютеногенами). После их взаимодействия образуются частицы, которые выпадают в осадок. Это и есть положительный признак. Для постановки реакции могут использоваться живые или убитые микробные агенты, грибы, простейшие, клетки крови и соматические клетки. Химически реакция разбита на два этапа: 1.Специфическое соединение антител (АТ) с антигенами (АГ). 2.Неспецифическая – осаждение конгломератов АГ-АТ, то есть образование агглютината. Реакция непрямой агглютинации (РПГА) Данная реакция обладает большей чувствительностью, чем предыдущая. Ее используют для диагностирования заболеваний, вызываемых бактериями, внутриклеточными паразитами, простейшими. Она настолько специфична, что позволяет обнаружить даже очень низкую концентрацию антител. Для ее постановки используют очищенные бараньи эритроциты и красные кровяные тельца человека, предварительно обработанные антителами или антигенами (это зависит от того, что именно лаборант хочет найти). В некоторых случаях человеческие эритроциты обрабатывают иммуноглобулинами. Серологические реакции эритроцитов считаются состоявшимися, если произошло их осаждение на дно пробирки. О положительной реакции можно говорить, когда клетки располагаются в виде перевернутого зонтика, занимая все дно. Отрицательная реакция засчитывается, если эритроциты осели столбиком или в виде пуговки в центре дна. Реакция преципитации (РП) Серологические реакции этого типа служат для выявления крайне малых частиц антигенов. Это могут быть, например, белки (или их части), соединения белков с липидами или углеводами, части бактерий, их токсины. Сыворотки для проведения реакции получают путем искусственного заражения животных, обычно кроликов. Таким методом можно получит абсолютно любую преципитирующую сыворотку. Постановка серологических реакций преципитации похожа по механизму действия на реакции агглютинации. Антитела, содержащиеся в сыворотке, соединяются с антигенами в коллоидном растворе, образуя крупные белковые молекулы, которые осаждаются на дно пробирки или на субстрат (гель). Этот способ считается высокоспецифичным и может обнаружить даже ничтожно малые количества вещества. Используется для диагностики чумы, туляремии, сибирской язвы, менингита и других заболеваний. Кроме того, задействован в судебно-медицинской экспертизе. Реакция преципитации в геле Серологические реакции можно проводить не только в жидкой среде, но и в агаровом геле. Это называется метод диффузной преципитации. С его помощью изучают состав сложных антигенных смесей. Этот способ основан на хемотаксисе антигенов к антителам и наоборот. В геле они движутся навстречу друг другу с разной скоростью и, встречаясь, образуют линии преципитации. Каждая линия – один комплект АГ-АТ. Реакция нейтрализации экзотоксина антитоксином (РН) Антитоксические сыворотки способны нейтрализовать действие экзотоксина, который вырабатывают микроорганизмы. На этом и основаны данные серологические реакции. Микробиология использует этот способ для титрования сывороток, токсинов и анатоксинов, а также определения их лечебной активности. Сила нейтрализации токсина определяется условными единицами – АЕ. Кроме того, благодаря этой реакции можно определить видовую или типовую принадлежность экзотоксина. Это применяется при диагностике столбняка, дифтерии, ботулизма. Исследование можно проводить как «на стекле», так и в геле. Реакция лизиса (РЛ) Иммунная сыворотка, которая попадает в организм больного, обладает, кроме своей основной функции пассивного иммунитета, еще и лизирующими свойствами. Она способна растворять микробные агенты, клеточные чужеродные элементы и вирусы, поступающие в организм больного. В зависимости от специфичности входящих в состав сыворотки антител выделяют бактериолизины, цитолизины, спирохетолизины, гемолизины и другие. Эти специфические антитела называются "комплемент". Он содержится практически во всех жидкостях тела человека, имеет сложную белковую структуру и крайне чувствителен к повышению температуры, встряхиванию, действию кислот и прямых солнечных лучей. Но в высушенном состоянии способен сохранять свои лизирующие свойства до полугода. Существуют такие виды серологических реакций этого типа: - бактериолиз; - гемолиз. Бактериолиз проводят, используя сыворотку крови пациента и специфическую иммунную сыворотку с живыми микробами. Если в крови присутствует достаточное количество комплемента, то исследователь увидит лизис бактерий, и реакция будет считаться положительной. Вторая серологическая реакция крови заключается в том, что взвесь эритроцитов больного обрабатывают сывороткой, содержащей гемолизины, которые активизируются только в присутствии определенного комплимента. Если таковой имеется, то лаборант наблюдает растворение красных клеток крови. Данная реакция широко используется в современной медицине для определения титра комплемента (то есть его наименьшего количества, провоцирующего лизис эритроцитов) в сыворотке крови и для постановки анализа на связывание комплемента. Именно этим способом проводится серологическая реакция на сифилис - реакция Вассермана. Реакция связывания комплемента (РСК) Эта реакция используется для того, чтобы обнаружить в сыворотке крови больного антитела к инфекционному агенту, а также с целью идентифицировать возбудителя по его антигенной структуре. До этого момента мы описывали простые серологические реакции. РСК считается сложной реакцией, так как в ней взаимодействуют не два, а три элемента: антитело, антиген и комплемент. Суть ее заключается в том, что взаимодействие между антителом и антигеном происходит только в присутствии белков комплимента, которые адсорбируются на поверхности образовавшегося комплекса АГ-АТ. Сами антигены, после присоединения комплемента, подвергаются существенным изменениям, которые и показывают качество проведенной реакции. Это может быть лизис, гемолиз, иммобилизация, бактерицидное или бактериостатическое действие. Сама реакция происходит в две фазы: 1.Образование комплекса антиген-антитело, которое визуально не заметно исследователю. 2.Изменение антигена под действием комплемента. Эта фазу чаще всего можно отследить невооруженным глазом. Если же визуально реакции не видно, то используют дополнительную индикаторную систему, позволяющую выявить изменения. Индикаторная система Данная реакция основана на связывании комплемента. В исследуемую пробирку спустя час после постановки РСК добавляют очищенные эритроциты барана и гемолитическую сыворотку, не содержащую комплемента. Если в пробирке остался несвязанный комплемент, то он присоединится к комплексу АГ-АТ, образованному между бараньими клетками крови и гемолизином, и вызовет их растворение. Это будет означать, что РСК отрицательна. Если эритроциты остались целыми, то, соответственно, реакция положительная. Реакция гемагглютинации (РГА) Существуют две принципиально разные реакции гемагглютинации. Одна из них - серологическая, она используется для определения групп крови. В этом случае эритроциты взаимодействуют с антителами. А вторая реакция не относится к серологическим, так как красные кровяные тельца реагируют с гемагглютининами, продуцируемыми вирусами. Так как каждый возбудитель действует только на конкретные эритроциты (куриные, бараньи, обезьяньи), то можно считать эту реакцию узкоспецифичной. Понять, положительная реакция или отрицательная, можно по расположению клеток крови на дне пробирки. Если их рисунок напоминает перевернутый зонтик, значит, искомый вирус присутствует в крови больного. А если все эритроциты сложились наподобие монетного столбика, то искомых возбудителей нет. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) Это высокоспецифичная реакция, позволяющая установить вид, тип вирусов или наличие специфических антител в сыворотке крови пациента. Суть ее заключается в том, что антитела, добавленные в пробирку с исследуемым материалом, препятствую осаждению антигенов на эритроцитах, тем самым останавливая гемагглютинацию. Это и является качественным признаком наличия в крови специфических антигенов к конкретному искомому вирусу. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) В основе реакции лежит способность выявлять комплексы АГ-АТ при люминесцентной микроскопии после их обработки флюорохромными красителями. Это метод прост в обращении, не требует выделения чистой культуры и занимает мало времени. Он незаменим для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний. В практике эти серологические реакции делятся на два вида: прямые и непрямые. Прямая РИФ производится с антигеном, который заранее обработан флюоресцирующей сывороткой. А непрямая заключается в том, что сначала препарат обрабатывают обычным диагностикумом, содержащим антигены к искомым антителам, а затем повторно наносится люминесцентная сыворотка, которая специфична к белкам комплекса АГ-АТ, и микробные клетки становятся заметны при микроскопии. Гиперчувствительность замедленного типа. Общая характеристика. Инфекционная аллергия и аутоаллергия. Гиперчувствительность замедленного типа — единственный тип гиперчувствительности, непосредственную основу которого составляют клеточные, а не гуморальные механизмы. Ее прототип — реакция Манту — ответ сенсибилизированного организма на внутрикожное введение туберкулина. Туберкулиновая реакция была описана Р. Кохом (R. Koch) в 1890 г. Реакции этого типа развиваются медленнее, чем аллергические реакции немедленного типа и достигают максимальной выраженности через 24–48 ч после введения антигена. Проявлением реакции Манту служит гиперемированная папула со слабым отеком, но выраженным уплотнением. В центре папулы может развиться некроз. Морфологическая основа реакции — очаг воспаления с умеренно выраженными сосудистыми явлениями и наличием лимфоцитарно-макрофагальной инфильтрации (нейтрофилы могут присутствовать в очаге лишь временно). Реакция гиперчувствительности замедленного типа лежит в основе одной из двух форм клеточного иммунного ответа — воспалительной, обусловленой CD4+ Т-клетками и их взаимодействием с макрофагами. Гиперчувствительность замедленного типа явилась одним из первых иммунологических процессов, на примере которых была осознана возможность развития антигенспецифического иммунного ответа, не связанного с выработкой антител, и аргументирована решающая роль лимфоцитов в качестве эффекторных клеток этой реакции. Аллергические реакции замедленного типа подразделяют: 1) инфекционную аллергию; 2)контактную аллергию; 3)аллергические реакции к растворимым белкам; 4) аутоаллергические реакции; 5) аллергические реакции при трансплантации. Инфекционная аллергия Инфекционная аллергия (бактериальная) – это повышенное проявление реакции организма на повторное попадание внутрь возбудителя инфекции. Зачастую пациенты, которые переболели инфекцией, склонны повторно заболевать этой же инфекцией, но уже в более выраженной форме болезни. Инфекционная аллергия характеризуется иммунологической идентичностью, т.е. возращением болезненных симптомов под воздействием активирующего фактора, которым выступают возбудители инфекционных заболеваний. Причины развития заболевания Инфекционная аллергия обычно вызвана возбудителями следующих инфекционных заболеваний: бруцеллез, чума, туляремия, сибирская язва; туберкулез; сифилис, гонорея; орнитоз (попугайная болезнь); дезинтерия; глубокие микозы; токсоплазма, некоторые грибковые заболевания, а также, паразитарные. Развитие инфекционной аллергии происходит при определенных условиях. Когда одновременно в организме продолжительное время присутствует очаг воспаления и инфекция, находящаяся внутриклеточно, то это уже предпосылки к развитию бактериальной аллергии. При течении заболевания небольшой продолжительности аллергия не возникает, даже если другие условия соблюдены. Аутоаллергия При различных патологических состояниях белки крови и тканей могут приобрести аллергенные, чужеродные для организма свойства. Механизм образования аутоаллергенов различный. Незначительное количество аутоаллергенов содержится в организме в готовом виде (эндоаллергены). В результате действия на белки организма высокой или низкой температуры, ионизирующего излучения образуются вторичные или приобретенные аутоаллергены. Они способствуют образованию аутоантител. В результате соединения последних с аутоаллергенами возникают различные повреждения клеток и тканей организма. Могут образоваться инфекционные аутоаллергены вследствие взаимодействия собственных антигенных компонентов организма животного с бактериальными аллергенами К аутоаллергическим заболеваниям относят аллергический энцефалит и аллергические коллагенезы. Аллергический энцефалит возникает при повторном введении различного рода экстрактов, полученных из мозговой ткани всех взрослых млекопитающих животных (исключая крыс), а также из мозга кур. Наблюдаемые явления дессиминированного энцефалита характеризуются определенными изменениями тканей мозга (лейкоцитарная инфильтрация и частичная демиелизация белого вещества, пролиферация микроглии). Аллергические коллагенезы представляют своеобразную форму инфекционных аутоаллергических заболеваний. Образовавшиеся в этих случаях аутоантитела вызывают в тканях цитотоксический эффект; возникает поражение внеклеточной части соединительной ткани коллагенезного характера. К аллергическим коллагенезам относят острый суставной ревматизм, некоторые формы гломерулонефрита и др. Решить тестовые задания, выбрав правильный вариант (варианты) ответов: Клеточная стенка отсутствует: А. у бактерий Б. у микоплазм Д. у спирохет Гликолитические и протеолитические свойства бактерий изучают на средах: А. МПА, МПБ В. Гисса Для дезинфекции рук персонала аптек используют: А. 70% этиловый спирт В. 0,5% раствор хлоргексидина биглюконата в 70% этиловом спирте Санитарные показатели микробы воды: А. золотистый стафилококк Б. гемолитический стрептококк В. кишечная палочка При определении микробиологической чистоты лекарственного средства для устранения его антимикробного действия используют: Б. увеличение разведения лекарственного средства В. применение специфического инактиватора Г. применение неспецифического инактиватора Патогенные грибы чувствительны: Д. ко всем перечисленным Карантинные или конвенционные болезни: А. наиболее опасны В. профилактика их обусловлена международными соглашениями Г. требуют проведения экстренных лечебно-профилактических мероприятий Антитела класса Е: А. принимают участие в аллергических реакциях Б. основные защитники организма Г. вырабатываются в большом количестве при аллергии При производстве вирусных вакцин культивирование штаммов производят: А. в культуре клеток Г. в курином эмбрионе Параметры (тесты) контроля иммуноглобулинов при производстве: Б. безвредность В. апирогенность |