Контрольная работа по микробиологии. Контрольная работа по микробиологии студентки 3 курса спбгавм коротаевой Любови Анатольевны СанктПетербург 2006
 Скачать 248 Kb.
|
|
Опсонины и реакция опсонизация Опсонинами (греч. opson — пища) называют антитела нормальных и иммунных сывороток, изменяющие микроорганизмы и подготавливающие их к более интенсивному фагоцитированию. Под влиянием опсонинов происходит изменение поверхности микробных тел, в частности их электрического потенциала, вследствие чего они легко подвергаются фагоцитозу. Опсонины обусловливают специфическую сенсибилизацию, повышенную чувствительность бактерий к фагоцитозу. Степень активности опсонинов принято выражать опсоническим индексом, который представляет собой отношение фагоцитарного показателя иммунной сыворотки к фагоцитарному показателю нормальной сыворотки. Фагоцитарным показателем называется частное от деления числа микробов, поглощенных 100 фагоцитами, на число фагоцитов. Вычисление опсонофагоцитарного показателя производится по специальной формуле, дающей более точный результат. Показатель опсонического индекса должен быть больше 1. Другие иммунологические реакции Реакция иммобилизации. При заболеваниях, вызываемых патогенными трепонемами, в крови больных людей образуются антитела, приостанавливающие движение трепонем и вызывающие их гибель. Иммобилизующее действие антител совершается в присутствии комплемента, хотя и не происходит его связывание или оно наблюдается в ограниченной степени. Проявление реакции иммобилизации установлено в отношении не только трепонем, но и других микроорганизмов (возбудитель амебиаза, некоторые подвижные бактерии и др.), при которых участие комплемента необязательно и не всегда приводит к гибели микробов. Реакция иммунного прилипания. Имеются антитела, в присутствии которых микроорганизмы становятся липкими (клейкими). Обработанные такими антителами микробы склеиваются не только между собой, но и с лейкоцитами, эритроцитами, тромбоцитами, дрожжами и другими микроорганизмами. Реакция иммунного прилипания высокочувствительна, она происходит с участием комплемента. Реакция нейтрализации вирусов с помощью специфических антител. Эта реакция применяется для обнаружения вируса или противовирусных антител в крови больных людей или животных. Обычно ее проводят на животных или в культуре ткани. Если сыворотка специфичная, то она защищает животное от вирусной инфекции или предохраняет клетки культуры ткани от цитопатического действия вируса. Реакция с флюоресцирующими антителами. За последние годы в диагностике инфекционных заболеваний широкое применение нашел метод прямой и непрямой иммунофлюоресценции. В этом методе используют антитела (иммуноглобулины), меченные флюоресцентным красителем – изоцианатом - флюоресцеином. Соединяясь с антигеном, они образуют комплекс, который при освещении ультрафиолетовыми лучами дает ярко- желтое свечение. В прямом методе взаимодействие происходит между антигеном и специфическими антителами, предварительно обработанными флюоресцирующими красителями. При непрямом методе вначале антиген связывают с обычным антителом, затем этот комплекс (антиген — антитело) обрабатывают меченным антиглобулином, который соединяется с ним. Образующийся комплекс антиген — антитело — антиглобулин легко обнаруживается в люминесцентном микроскопе. Серологические реакции между вирусами и соответствующими антителами описаны в специальной части. РАБОТА ЧЕРНЯХОВСКОЙ РАЙОННОЙ ВЕТЕРИНАРНОЙ ЛАБОРАТОРИИ Черняховская районная ветеринарная лаборатория — диагностическое учреждение государственной ветеринарии, основными задачами которого являются: а) установление лабораторного диагноза болезней животных, в том числе птиц, пушных зверей, рыб и пчел; б) выявление животных, больных заразными болезнями или болезнями, связанными с нарушениями обмена веществ и другими отклонениями в жизнедеятельности организма; в) выявление причин массовых заболеваний животных; г) экспертиза мяса, молока и других пищевых продуктов. Деятельность районной ветеринарной лаборатории направлена на обеспечение ветеринарного благополучия животноводства, предупреждение и ликвидацию заразных и незаразных болезней животных с целью создания здоровых стад и увеличения производства животноводческих продуктов, а также с целью охраны населения от болезнен, общих для человека и животных. Для выполнения указанных выше задач районная ветеринарная лаборатория: а) проводит в плановом порядке с целью диагностики заболеваний животных (в том числе птиц, пушных зверей, пчел и рыб) бактериологические, микроскопические, серологические, патологоанатомические, биохимические, токсикологические, копрологическне и другие лабораторные исследования соответствующих материален, поступающих непосредственно из хозяйств или ветеринарных учреждений района; б) исследует корма и воду — с целью определения их безвредности для животных; в) сообщает в установленном порядке учреждениям, хозяйствам и другим предприятиям и организациям, приславшим материалы на исследование, результаты исследований, и заключения по ним с соответствующими рекомендациями; г) консультирует ветеринарные учреждения, ветеринарных специалистов, местные органы и работников хозяйств по вопросам профилактики и ликвидации болезней животных (включая птиц, пушных зверей, пчел и рыб); д) при выявлении особо опасных болезней определяет характер, объем и порядок диагностических исследований, обеспечивает их проведение в сжатые сроки, в случае необходимости направляет своих специалистов для уточнения диагноза на месте и выяснения степени распространения инфекции; е) осуществляет методическое руководство работой диагностических кабинетов, а также руководит деятельностью находящихся в ее ведении мясомолочных и пищевых контрольных станций, обобщает результаты их работы, информирует о них главного ветеринарного врача района; ж) анализирует итоги диагностической работы в районе, и вносит необходимые предложения главному ветеринарному врачу района, а также вышестоящему ветеринарному органу; з) оказывает помощь районной ветеринарной станции и другим ветеринарным учреждениям района, а также ветеринарной службе специализированных комплексов, колхозов и других хозяйств в разработке мероприятий по предупреждению и ликвидации заболеваний животных; и) пропагандирует передовой опыт борьбы с болезнями животных и ветеринарные знания среди населения и работников фермы; к) выполняет другие работы по заданию вышестоящего ветеринарного органа. 3. Черняховская районная ветеринарная лаборатория имеет право: а) давать специалистам ветеринарных учреждений и хозяйств обслуживаемой зоны методические указания по вопросам диагностики заболеваний сельскохозяйственных животных; б) давать заключения по вопросам диагностики заболеваний животных, проведения ветеринарных мероприятий, а также по другим вопросам компетенции ветеринарной лаборатории. В ведении районной ветеринарной лаборатории могут находиться мясомолочные и пищевые контрольные станции района. Районная ветеринарная лаборатория организуется по типовому штату, утвержденному в установленном порядке, и возглавляется директором — ветеринарным врачом. Директор и бухгалтер районной ветеринарной лаборатории назначаются на работу и освобождаются от работы областным управлением сельского хозяйства. Остальные работники ветеринарной лаборатории и работники мясомолочных и пищевых контрольных станций, подчиненных лаборатории, назначаются на работу и освобождаются от работы директором лаборатории. Директор районной ветеринарной лаборатории находится в подчинении ветеринарного отдела областного управления сельского хозяйства. Он несет ответственность за выполнение возложенных на лабораторию и подчиненные ей мясомолочные и пищевые контрольные станции задач, за правильность и своевременность заключений по исследуемым лабораторией материалам, а также за сохранность и правильное использование находящихся в его распоряжении денежных средств и материальных ценностей лаборатории. Директор районной ветеринарной лаборатории имеет право: а) привлекать специалистов подчиненных лаборатории мясомолочных и пищевых контрольных станции для выполнения диагностических исследований и других лабораторных работ в случаях неполной их загруженности работой по ветеринарно-санитарной экспертизе, а также в других необходимых случаях; б) применять меры поощрения и взыскания по отношению к подчиненным ему работникам лаборатории и мясомолочных и пищевых контрольных станций: в) распоряжаться кредитами, отпускаемыми лаборатории, и другими ее материальными ценностями. Черняховская районная ветеринарная лаборатория содержится за счет ассигновании по областному и районному бюджету и за счет специальных средств, поступающих в установленном порядке. Лаборатория имеет право открывать расчетные и текущие счета в кредитных учреждениях, вести соответственные финансовые операции в пределах отпускаемых ей сметных ассигновании, а также спецсредств. Районная ветеринарная лаборатория должна иметь типовые производственные помещения согласно установленному перечню, а также транспортные средства но установленным нормам. Районная ветеринарная лаборатория имеет круглую печать с изображением государственного герба и своего наименования, а также угловой штамп. Районная ветеринарная лаборатория ведет учет своей работы и представляет в установленном порядке отчетность. В ветеринарной лаборатории участвовала в диагностике бруцеллеза у животных. Методы серологической диагностики бруцеллеза Серологическая диагностика бруцеллеза заключается в обнаружении специфических антител в сыворотке крови животных при помощи реакции агглютинации в пробирках (РА), реакции связывания комплемента (РСК), реакции длительного связывания комплемента на холоде (РДСК), пластинчатой реакции агглютинации с роз бенгал антигеном (роз бенгал проба, РБП) и в молоке коров при помощи кольцевой реакции (КР). Постановка и учет результатов реакции агглютинации в пробирках (РА). Реакцию агглютинации в пробирках с бруцеллезным антигеном применяют при диагностике бруцеллеза у крупного рогатого скота, овец, коз, лошадей, буйволов, верблюдов, оленей, собак, пушных зверей и животных других видов. Компоненты реакции агглютинации: испытуемые сыворотки крови; позитивная бруцеллезная сыворотка, изготовленная биопредприятием или полученная от больного бруцеллезом животного. На этикетке флакона с такими сыворотками указывают титры в РА и РСК и дату изготовления: негативная сыворотка (сыворотка крови здоровых животных), изготовленная биопредприятием или полученная в лаборатории; антиген бруцеллезный, единый для РА, РСК и РДСК; раствор хлорида натрия. При исследовании сывороток крови крупного рогатого скота, лошадей, верблюдов, собак, пушных зверей и морских свинок для разведения испытуемых сывороток и антигена используют фенолязировэнный. (0,5%-ный) физиологический раствор хлорида натрия (0,85%-ный), при исследовании сывороток крови овец, коз, буйволов — 5%-ный и оленей — 10%-ный фенолизированный раствор хлорида натрия Постановка реакции агглютинации. Реакцию агглютинации проводят в объеме 1 мл в четырех разведениях: при исследовании сывороток крови овец, коз, буйволов, оленей и собак — 1 : 25, 1 : 50, 1 : 100 и 1 : 200; крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов — 1 : 50, 1 : 100, 1 : 200 и 1 : 400; пушных зверей и морских свинок — 1:10, 1 : 20, 1 : 40 и 1 : 80. При массовых исследованиях допускается постановка реакции в первых двух разведениях. Разлив компонентов реакции проводят индивидуальными мерными пипетками или групповыми дозаторами Флоринского. Для исследования каждой испытуемой сыворотки крови требуется 5 пробирок. В пробирках первого ряда делают основное разведение. Для этого сыворотку крови крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов берут в дозе 0,1 мл, вносят в пробирки и добавляют к ней 2,4 мл соответствующего раствора хлорида натрия (получают разведение сыворотки 1 : 25). Сыворотку крови овец, коз, буйволов, оленей и собак берут в дозе 0,2 мл и добавляют 2,3 мл соответствующего раствора хлорида натрия (разведение 1 : 12,5), а сыворотку крови пушных зверей и морских свинок берут в дозе 0,3 мл и добавляют 1,2 мл соответствующего раствора хлорида натрия (разведение 1 : 5). Таким образом делают основное разведение испытуемых сывороток в пробирках первого ряда штатива (по 10 проб в ряду). После приготовления основного разведения сывороток в первом ряду в пробирки третьего, четвертого и пятого рядов вливают по 0,5 мл соответствующего раствора хлорида натрия. Затем из пробирок первого ряда при помощи группового дозатора Флоринского переносят в пробирки второго и третьего рядов по 0,5 мл основного разведения сывороток (1 : 2о, 1 : 12,5 или 1:5). В пробирках третьего ряда сыворотки смешивают с раствором хлорида натрия, по 0,5 мл этого разбавления переносят в пробирки четвертого ряда и так же из пробирок четвертого ряда — в пятый. Из пробирок пятого ряда по 0,5 мл жидкости удаляют. Таким образом делают последовательные двукратные разведения одновременно 10 сывороток. После этого в каждую пробирку второго, третьего, четвертого и пятого рядов с разведенными сыворотками вносят при помощи группового дозатора Флоринского или другого дозирующего устройства по 0,5 мл антигена, предварительно разбавленного в соотношении 1 : 10 соответствующим раствором хлорида натрия. После добавления антигена разведение сывороток в каждой пробирке удваивается и в зависимости 6t вида исследуемых животных будет составлять соотношения: 1 : 50; ! : 100, 1 : 200 и 1 : 400; 1 : 25; 1 : 50; 1 : 100 и 1 : 200 или 1 : 10; 1 : 20, 1 : 40 и 1 : 80. В пробирки первого ряда бруцеллезный антиген не вносят, и они служат контролем качества сыворотки При наличии хлопьев, фибрина, эритроцитов и посторонних примесей результаты реакции агглютинации не учитывают. При массовых исследованиях сыворотки разливают индивидуальной микропипеткой (с грушей) или групповыми дозаторами Флоринского в две пробирки в дозах 0,02 и 0,01 мл (сыворотки крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов) или 0,04 и 0,02 мл (при исследовании сывороток овец, коз, буйволов, оленей и собак). Затем а каждую пробирку по 1,0 мл антигена, разведенного соответствующим раствором хлорида натрия в соотношении 1 : 20. При этом разведения сывороток будут соответствовать соотношениям 1 : 50 и 1 : 100 или 1 : 25 и 1 : 50. При постановке реакции агглютинации одновременно с испытуемыми сыворотками ставят контроли: с негативной сывороткой в тех же разведениях, как с испытуемыми; с позитивной бруцеллезной сывороткой в разведениях до ее предельного титра. После добавления к испытуемым и контрольным сывороткам антигена штативы с пробирками осторожно встряхивают и помещают в термостат при 37—38°С на 16—20 ч, затем .выдерживают при комнатной температуре в течение 1 ч, после чего проводят учет реакции. Учет реакции агглютинации. Результаты реакции учитывают визуально и определяют в крестах по следующей схеме: (++++) — полное просветление жидкости, микробные тела антигена осели на дно пробирки в виде «зонтика», при легком встряхивании «зонтик» разбивается на хлопья и комочки, а жидкость остается прозрачной (100% агглютинации); (+++) — неполное просветление жидкости и хорошо выраженный «зонтик» (75% агглютинации); (++) — просветление жидкости, «зонтик» умеренно выражен (50% агглютинации); (+) — едва заметное просветление жидкости, «зонтик» выражен слабо, при встряхивании заметно небольшое количество хлопьев или комочков (25% агглютинации); (—) — просветления жидкости и образования «зонтика» не наступило, на дне пробирки виден «пунктик» осевших микробов антигена, при легком встряхивании образуется равномерная взвесь. За титр антител принимают последнее разведение сыворотки, в котором произошла агглютинация не менее чем на 2 креста (++), что соответствует количеству международных единиц (ME) антител в 1 мл сыворотки (например, сыворотка с конечным титром РА 1 : 100 содержит 100 ME, 1 : 200—200 ME и т. п.). Для более объективной оценки результатов РА в крестах готовят стандарты мутности, соответствующие 0, 25, 50 и 75% просветления жидкости. В четыре пробирки последовательно наливают 1, 2, 3 и 4 мл антигена, разведенного 1 : 10. Затем в том же порядке в три первых пробирки добавляют 3, 2 и 1 мл фенолизированного физиологического раствора. В четвертую пробирку раствор не добавляют. После встряхивания пробирок жидкость из каждой из них переносят по 0,5 мл в серологические пробирки и добавляют по 0,5 мл фенолизированного физиологического раствора. Полученные стандарты соответствуют 75, 50 и 25% просветления жидкости. В последней, четвертой, пробирке просветление отсутствует. Стандарты мутности готовят каждый раз при поставке РА и выдерживают в термостате одновременно с основной реакцией. Степень просветления в пробирках с исследуемыми сыворотками определяют визуально путем сравнения со стандартами и результаты реакции выражают в крестах. При массовых исследованиях сывороток в двух разведениях все сыворотки, давшие агглютинацию с оценкой не менее чем на 2 креста (++) в каком-либо из указанных -разведений, исследуют повторно в четырех разведениях. Диагностическая оценка реакции агглютинации. Реакцию считают положительной при наличии агглютинации с сыворотками крови крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов, начиная с разведения 1 : 100 (100 ME антител); коз, овец, буйволов, оленей и собак — с разведения 1 : 50 (50 ME); пушных зверей и морских свинок — с разведения 1 : 10 (10 ME) с оценкой не менее чем на 2 креста. Реакцию считают сомнительной при наличии агглютинации только в разведении 1 : 50 (50 ME) с сыворотками крови крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов и в разведении 1 : 25 (25 ME) с сыворотками овец, коз, буйволов, оленей и собак с оценкой не менее чем на 2 креста. При получении сомнительного результата реакции сыворотку крови данного животного исследуют повторно через 3—4 нед. На неблагополучных по бруцеллезу фермах животных, при исследовании которых будет получена дважды сомнительная РА, относят к положительно реагирующим. В заключении лаборатории о результатах исследования должна быть сообщена диагностическая оценка каждой пробы (положительная, сомнительная, отрицательная) и конечное разведение (титр) сыворотки, в котором получен соответствующий результат, выраженное в международных единицах (например: конечный титр сыворотки крови крупного рогатого скота 1 : 100 с оценкой 2 креста или более — «положительная 100 ME»; конечный титр сыворотки 1 : 50 с оценкой 2 креста или более — «сомнительная 50 ME»). Суммарные результаты исследования испытуемых сывороток, серию антигена, срок его годности, а также предельный титр позитивной сыворотки записывают в журнал серологических исследований. Постановка и учет реакции связывания комплемента (РСК). СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
|