лекции микробы. Курс лекций по учебному материалу V семестра специальная микробиология. Вирусология. Одесса2012 Лекция 11
 Скачать 3.28 Mb.
|
|
Иммунитет. После перенесенной болезни формируется прочный иммунитет. В последние годы количество повторных инфекций возросло и достигло примерно 50 процентов от общего количества случаев заболевания. Были предложены различные объяснения причины повторных инфекций. Некоторые ученые поддерживают мнение о том, что повторные случаи сыпного тифа возникают в результате потери иммунитета, приобретенного после первой болезни, после чего человек может заражаться повторно. Согласно второй точке зрения, повторные случаи сыпного тифа представляют собой рецидивы первого заболевания. (В США такие формы известны как болезнь Брилля-Цинссера). Рецидивы сыпного тифа наступают после различных неблагоприятных воздействий (инфекционные или другие заболевания, хирургическое вмешательство, переохлаждение, психические и физические травмы, переутомление, голод и др.) на организм, который в течение длительного времени являлся носителем риккетсий в покоящихся формах в состоянии персистирования. Лабораторная диагностика. В основу лабораторной диагностики положен серологический метод исследований: 1) реакция агглютинации с риккетсиями Провачека (реакция Вейля-Феликса с протеем ОХ-19 в последнее время потеряла практическое значения ведствие ее малой специфичности); 2) реакция связывания комплемента; 3) реакция непрямой гемагглютинации. Используются также реакция Нобеля (ускоренная реакция агглютинации), кровяно-капельная проба по Минкевичу, биопроба (заражение морских свинок). Аллергическая кожная проба с антигеном из Rickettsia prowazekii используется для выявления иммунитета к сыпному тифу среди населения Необходимо иметь в виду, что у больных, леченных антибиотиками, реакция агглютинации может быть в низком титре и без последующего его нарастания. Лечение. С введением в практику терапии больных сыпным тифом тетрациклинов, левомицетина летальность снизилась до единичных случаев и в последние годы совсем не регистрируется. Профилактика. Включает: 1) раннюю диагностику, изоляцию и госпитализацию больных; 2) санитарную обработку в очаге (дезинсекция); 3) учет и наблюдение за контактировавшими с больным; систематическое проведение мер по ликвидации завшивленности среди населения и повышение его санитарной культуры; 4) вакцинацию сухой живой сыпнотифозной вакциной, изготовляемой из авирулентного штамма Е. В связи со значительным улучшением санитарного состояния населения иммунизации подлежат только отдельные контингенты. Сыпной тиф в прошлом был грозной инфекцией. Заболеваемость резко увеличивалась во время национальных бедствий (голод и войны). Во время Русско-Турецкой войны (1758-75) около 200 000 человек в русской армии были поражены сыпным тифом, из них более 40 000 умерло. Известно, что во время Наполеоновских войн были массовые эпидемии сыпного тифа. Только в Германии в 1812-1814 г.г. заболело сыпным тифом более 2 миллионов человек. Обширные эпидемии сыпного тифа также были во время 1-й Мировой войны. В 1915 г. в Сербии 50 процентов населения (1,5 миллиона) были поражены сыпным тифом, и 150000 погибло. Гражданская война и экономическая разруха обусловили в Советской России массовое заболевание сыпным тифом, которым за период с 1 января 1918 г. по 1 октября 1920 г. переболело более 6 млн. человек. Высока была заболеваемость в периодторой мировой войны; особенно сильно пострадало население стран, временно оккупированных немецкими захватчиками. Так, например, в сельских районах Белоруссии за 1943 - 1944 гг. более 60% всего населения было поражено сыпным тифом. Благодаря значительному улучшению условий жизни людей и проведению профилактических мероприятий эпидемический сыпной тиф в большинстве стран ликвидирован. Возбудитель крысиного риккетсиоза. Rickettsia typhi открыта в 1928 г. X. Музером. Риккетсии крысиного тифа менее полиморфны, чем риккетсий Провачека. Размеры их 0,35 - 1,3 мкм. Их легко культивировать в курином эмбрионе, они длительно сохраняются во внешней среде, особенно в высушенном состоянии. Обезьяны и кролики относительно устойчивы. У морских свинок (самцов) при накожном заражении в конъюнктиву глаза, слизистую оболочку носовой и ротовой полостей появляется лихорадка; наиболее характерный симптом - риккетсиозный периорхит (скротальный феномен Музера), развивающийся при внутрибрюшинном заражении. Очень чувствительны к Rickettsia typhi крысы и мыши. Основным источником возбудителя в природе являются крысы и мыши, которые инфицируются друг от друга посредством блох, вшей, возможно, и клещей, а также пероральным путем. Люди заражаются эндемическим крысиным тифом от грызунов. Возбудитель проникает через слизистые оболочки глаз, носа, рта, поврежденные кожные покровы, а также вместе с пищевыми продуктами, инфицированными мочой больных грызунов, через дыхательные пути и контактным путем (втирание фекальных масс зараженных блох и вшей при расчесывании кожи). Заражение человека возможно при укусе крысиного клеща Bdelonyssus bacoti. Заболеваемость крысиным сыпным тифом среди людей обычно носит эндемический и спорадический характер. В некоторых случаях в зависимости от эпизоотического состояния могут возникать местные вспышки. Болезнь характеризуется сезонностью, наибольшее количество заболеваний приходится на август - ноябрь (период увеличения плотности и активности грызунов). Заболевание у человека во многом сходно с эпидемическим сымнпным тифом. Болезнь характеризуется лихорадкой, появлением сыпи на лице, груди, животе, спине, ладонях, подошвахвначале сыпь имеет розеолезньш, а позднее папулезный характер; редко она бывает петехиальной. После болезни развивается сравнительно стойкий иммунитет, перекрестный с иммунитетом при эпидемическом сыпном тифе. Для дифференциации с эпидемическим сыпным тифом параллельно ставят реакцию агглютинации или связывания комплемента с соответствующими антигенами из возбудителей, а также внутрибрюшинно заражают самцов морских свинок для воспроизведения скротального феномена (риккетсиозный периорхит). Лечение больных эндемическим крысиным тифом проводят тетрациклинами, левомицетином. Борьба с этим риккетсиозом заключается в систематическом уничтожении крыс и мышей, предупреждении проникновения грызунов в порты с прибывающих судов, защите пищевых продуктов от крыс, уничтожении крысиных блох, вшей и клещей. В некоторых случаях делают прививки людям, живущим в эндемических районах. 3. группа клещевых пятнистых лихорадок Возбудитель марсельской лихорадки. Rickettsia conori впервые описана в 1910 г. А. Конором и А Брухом Риккетсии имеют палочковидвую форму. Они полиморфны. Длина их 1 - 1 75 мкм и ширина 0,3-0,4 мкм. Риккетсии хорошо культивируются на переживающих тканях куриного эмбриона. К риккетсиям марсельской лихорадки чувствительны обезьяны, морские свинки, кролики, крысы, мыши, суслики. Марсельская лихорадка характеризуется эндемичностью и сезонностью (летний период). Передается при укусе клещей Rhipicephalus sanguineus, в организме которых возбудитель сохраняется в различных фазах их развития. Источником являются клещи, у которых установлена трансовариальная передача, и собаки, на которых паразитируют клещи. Заражение возможно через конъюнктиву глаз путем втирания риккетсий в слизистые оболочки Болезнь сопровождается сыпью, которая вначале имеет розсолезный или макулезный характер, далее становится макуло-папулезной, иногда с образованием вторичных петехий. В большинстве случаев марсельская лихор адка протекает брокачественно, без рецидивов. Лабораторную диагностику проводят путем: 1) постановки реакции связывания комплемента с сыворотками больных и риккетсиямн марссльской лихорадки (наиболее специфическая реакция); 2) выделения риккетсий из крови больных, язвенных поражений кожи, розеол и из клещей, снятых с собак Кровь или растертых в ступке клещей вводят внутрибрюшинно самцам морских свинок. Зараженных животных исследуют на наличие риккетсий в мезотелии пораженных влагалищных оболочек яичек. Внутриядерное расположение риккетсий подтверждает диагноз болезни. Лечение производят левомицетином, тетрациклинами. Профилактика обеспечивается общими мерами эпидемического контроля. Всех домашних и охотничьих собак в эндемических областях берут на учет и систематически обрабатывают инсектицидными препаратами, а места их содержания обрабатывают фумигантами для истребления клещей. Бродячих собак уничтожают. Возбудитель североазиатского риккетсиоза. В 1938 г. советскими исследователями (П. Ф. Здродовским и др.) изучены риккетсиозные заболевания в эндемических очагах Западной, Центральной и Восточной Сибири, на Дальнем Востоке, в Средней Азии и Монгольской Народной Республике. Возбудитель Rickettsia sibirica морфологически сходен с риккетсиями марсельской лихорадки, имеет палочковидную форму, иногда встречается в виде нитевидных грубых образований. В электронном микроскопе выявлены жгутикоподобные образования 10 - 12 нм толщиной и 0,3 - 3 мкм длиной. Культивируется в переживающих тканях куриных эмбрионов, локализуется в ядрах пораженных клеток тканей и органов. Риккетсии являются патогенными для обезьян, морских свинок, кроликов, крыс, мышеи. Болезнь передается клещами родов Dermacentor, Haemophysalis, которые паразитируют на домашних и крупных диких животных степных и луговых пространств и наибольшую активность проявляют весной В этот период они могут нападать на человека и заражать его. Максимум заболеваний приходится на май, сезонность апрель - октябрь. Поражается преимущественно сельское население У больных североазиатским ккетсиозом отмечают увеличение лимфатических узлов, появление на груди, спине и внутренних поверхностях конечностей розеолезной и папулезной сыпи с геморрагиями. Сыпь может быть на лице, ладонях и подошвах; она сохраняется и после падения температуры, а на ее месте остается пигментация. Наблюдаются конъюнктивит и инъекции склер. Болезнь протекает доброкачественно, без рецидивов. С целью лабораторной диагностики обычно ставят реакцию связывания комплемента с сыворотками больных и антигеном из Rickettsia sibirica. Диагностический титр комплементсвязывающих антител невысокий (1:20 - 1:200). Реакция, как правило, бывает положительной с 11-го дня болезни. В специальных лабораториях производят выделение возбудителя внутрибрюшинньш заражением самцов морских свинок кровью больных, взятой в ранний период болезни. У животных появляются лихорадка и воспаление яичка (скротальный феномен), сопровождающееся накоплением риккетсий в его оболочке. Профилактика осуществляется путем индивидуальной защиты людей от нападения клещей, а также проведением комплекса мероприятий, направленных на уничтожение клещей, паразитирующих на домашних животных, дезинфекции постоянных и временных жилых помещений. Возбудитель везикулезного или осповидного риккетсиоза. Rickettsia akari описана Р. Хюбнером, У. Джеллинсоном, К. Померанцем в 1946 г. Переносчик - Allodermanyssus sanguineus. Везикулезный риккетсиоз представляет собой общее инфекционное заболевание с инкубационным периодом в 10 - 12 дней. Характеризуется лихорадкой; на 3 - 4-й день появляется, обильная везикулезно-папулезная сыпь, напоминающая высыпание при ветряной оспе. Риккетсий обнаруживают в крови больных в период лихорадки. Они высокопатогенны для белых и серых мышей, морских свинок, белых, серых и хлопковых крыс, культивируются в куриных зародышах, являются внутриклеточными и внеклеточными паразитами, легко размножаются в легких белых мышей при интраназальном заражении. Для диагностики применяют реакцию связывания комплемента с очищенным и высокоактивным антигеном из риккетсий. Залевания встречались в окрестностях Нью-Йорка, в некоторых районах США, в Африке, на Украине (Донбасс). Его регистрировали на протяжении всего года, немного чаще в мае - июне. Резервуаром инфекции являются домовые мыши и серые крысы. Переносчики (гамазовые клещи) обладают трансовариальной передачей; вследствие этого они являются и резервуаром инфекций в природе. Предупреждение везикулезного риккетсиоза проводится так же, как и крысиного сыпного тифа (истребление грызунов, применение инсектицидных средств для уничтожения клещей). 4. ГРУППА ЛИХОРАДКИ ЦУЦУГАМУШИ Возбудитель лихорадки цуцугамуши. Болезнь известна очень давно, риккетсиозная природа ее установлена в 1930 г. М. Нагайо и соавт. Возбудитель - Rickettsia tsutsugamushi - представляет собой мелкие полиморфные неподвижные бактериеподобные образования, весьма сходные с другими риккетсиями клещевой группы; паразитирует внутриклеточно; величина его вариабельна: 0,3 - 0,5 мкм в ширину и 0,8 - 2 мкм в длину. В мазках-отпечатках, окрашенных по Романовскому - Гимзе, риккетсий имеют пурпурную окраску и располагаются в цитоплазме мононуклеарных клеток; грамотрицательны. В электронном микроскопе отчетливо видны поверхностная оболочка и рассеянные плотные гранулы в цитоплазме. Риккетсии цуцугамуши размножаются в культурах тканей клеток млекопитающих, в хорион-аллантоисной оболочке, желточном мешке, агаровых тканевых культурах. Они образуют токсин, введение которого белым мышам вызывает гибель их через -несколько часов. К влиянию факторов внешней среды риккетсий цуцугамуши относительно лабильны, но длительно сохраняются при –70 °С, устойчивы к высушиванию. В природных условиях возбудитель находится в организме полевок и различных видов крыс. Переносчиками являются клещи-краснотелки (Trombiсша akamushi, Trombicula schueffneri) в личиночной стадии, у которых наблюдается трансовариальная передача риккетсий. К возбудителю восприимчивы обезьяны, кролики, морские свинки, мыши, крысы, хлопковые крысы, хомяки, у которых при заражении развиваются характерные клинические проявлея и обнаруживаются патологоанатомические изменения. Человек заражается в результате нападения зараженных личинок клещей краснотелок. Заболевание протекает с лихорадкой длительностью 2 - 3 нед; появляется макулезная или макулопапулезная сыпь: на месте внедрения возбудителя образуется небольшая язва, покрытая темной коркой (струп); развивается регионарный аденит. В тяжелых случаях поражается сердечнососудистая и центральная нервная системы, часто отмечаются осложнения (пневмония). Летальность до применения антибиотиков была очень высокой: от 8 до 60%. Больной человек незаразен. Лихорадка цуцугамуши распространена в Японии, Индии, Индонезии, Северной Австралии и на островах Индийского и Тихого океанов. Иммунитет типоспецифический; после перенесенной болезни невосприимчивость к этому типу или штамму сохраняется в течение нескольких лет. При заражении другими штаммами риккетсий отмечаются повторные заболевания. Лабораторная диагностика: реакция агглютинации с протеем ОХК, которая довольно часто становится положительной к концу 2-й недели болезни вследствие накопления агглютининов в крови больных людей. В период лихорадочного состояния кровью больных внутрибрюшинно заражают белых мышей; при наличии риккетсий в крови больных людей большинство зараженных животных погибает в течение 2 нед. На вскрытии обнаруживают характерные изменения и наличие возбудителя в экссудате. Лечение проводят антибиотиками тетрациклинового ряда, благодаря которым летальность снизилась до нуля. Профилактика построена на мероприятиях по истреблению клещей, а также защите человека от их нападения. 5. ГРУППА Ку-лихорадки Риккетсии Ку-лихорадки. В 1937 г. в Австралии среди рабочих скотобоен Э. Дерриком было выявлено заболевание, получившее название Ку-лихорадки (от начальной буквы английского слова Query - неясный, неопределенный). В 1939 г. Ф. Бернетом из крови и мочи больных был выделен возбудитель Coxiella burneti. Ку-лихорадка встречается во многих странах мира; с 1948 г. регистрируется в ряде районов Советского Союза. Морфология. Возбудительо болезни представляет собой мелкие (0,25 - 0,5 мкм) ланцетовидные микроорганизмы, состоящие из оболочки, цитоплазмы и нуклеоида. Он может быть кокковидным, овоидным, палочковидным, нитевидным (1 - 1,6 мкм); установлены и фильтрующиеся формы. Риккетсий Бернета неподвижны, грамотрицательны, хорошо окрашиваются по Романовскому - Гимзе, Здродовскому. Культивирование. Выращивают риккетсий Бернета по методу Кокса при 35° С в желточном мешке куриного эмбриона, в котором происходит накопление большого количества возбудителя, используемого для приготовления как диагностикума, . так и вакцинных препаратов. При первом пассаже эмбрионы гибнут на 9 - 12-е сутки, при последующих пассажах - через 5 - 7 сут. Ферментативными способностями риккетсий Бернета не обладают. Наличие токсина у них не доказано, однако они содержат аллергены и сенсибилизируют организм с образованием васкулитов и гранулем. Резистентность. Риккетсии Ку-лихорадкиЦ^ Ку-лихорадки длительно сохраняются во внешней среде: в стерильной водопроводной воде - 160 сут, в цельном стерильном коровьем молоке при комнатной температуре - 125 сут. Пастеризация молока их не убивает. Риккетсии сохраняются в твороге, кефире и других молочных продуктах. В свежем мясе зараженных животных при 4 °С риккетсий Ку-лихорадки остаются жизнеспособными 30 сут, в замороженном виде - еще дольше, в засоленном мясе (при концентрации хлорида натрия 10%) возбудитель Ку-лихорадки в условиях рефрижератора - 5 мес. Возбудитель Ку-лихорадки выдерживает действие ультрафиолетовых лучей в течение 1 - 5ч, при низких температурах сохраняет жизнеспособность несколько месяцев, не погибает в молоке от нагревания до температуры 90 °С более 1 ч, в сухих фекалиях клещей выживает 19,5 мес, в высохшей моче и крови больных животных - от нескольких недель до 6 мес. Высушенные риккетсии в ампулах под вакуумом в рефрижераторе сохраняются в течение нескольких лет; они не погибают в 1% растворе фенола в продолжение 1 сут, в 0,5% растворе формалина - 4 сут, устойчивы к действию желудочного сока, эфа, толуола, хлороформа. Патогенность для животных. В очагах Ку-лихорадки возбудитель обнаруживают у коров, коз, овец, собак, лошадей, ослов, мулов, песчанок, птиц, клещей. Болезнь характеризуется природной очаговостью и является зоонозной. Животные выделяют возбудитель c молоком, мочой, плацентой, околоплодной жидкостью и испражнениями. В эксперименте морских свинок заражают введением внутрибрюшинно 3 - 6 мл крови, взятой у больных на высоте лихорадки. У зараженных животных через 5 - 13 сут развивается лихорадка длительностью 1-6 дней. Болезнь чаще заканчивается выздоровлением. Для воспроизведения экспериментальной инфекции могут быть использованы мыши, белые крысы, хомяки, кролики. Патогенез заболевания у человека. Заражение происходит при укусах иксодовых клещей; они выделяют с фекалиями огромное количество возбудителей, которые могут поступать в организм вместе с пищей, водой и воздушно-пылевым путем. Риккетсии Ку-лихорадки весьма инвазионны, они легко проникают через слизистые оболочки, дыхательные пути и поврежденную кожу. Установлена связь заболеваний с работой на скотобойнях, в мясной промышленности, на молочных фермах. Люди заражаются при обработке шерсти, во время пребывания вблизи скотных дворов и молочных ферм, при употреблении сырого молока и молочных продуктов от больных животных. Заболевание чаще отмечается в апреле - мае. Больной человек может выделять возбудитель с мокротой, которая должна обезвреживаться. Риккетсии Бернета при проникновении в организм человека внедряются в клетки тканей и органов лимфоидно-макрофагальной системы, кровь и лимфу. Фагоцитированные риккетсии не лизируются (незавершенный фагоцитоз), они размножаются в лейкоцитах и вызывают септицемию. Ку-лихорадка характеризуется полиморфизмом клинических проявлений. Различают три формы болезни: пневмоническую, лихорадочную, или гриппозную, и менингоэнцефалитическую; каждая из них отличается рядом особенностей. Болезнь развивается внезапно, после инкубационного периода в 7 - 28 сут. Начинается она остро, с бурного подъема температстстстстстуры тела до 39 – 40 °С и сопровождается ознобом, сильной головной болью, миалгиями, слабостью и бессонницей. Летальных исходов, как правило, не бывает или они наблюдаются довольно редко. Иммунитет. У людей образуется прочный и длительный постинфекционный иммунитет. У животных болезнь протекает хронически (несколько месяцев), что свидетельствует о слабой выработке иммунитета в период заболевания. Лабораторная диагностика. Заключается в следующем: 1) реакция агглютинации со специфическим антигеном, приготовленным из культур риккетсии, становится положительной со 2-й недели болезни; максимальные титры появляются на 3 - 5-й неделе. Положительная реакция в разведении сыворотки больных людей 1:10 - 1:16 подтверждает диагноз болезни. Использование реакции агглютинации с сыворотками животных имеет определенное значение для выяснения ретроспективным путем возможных источников Ку-лихорадки. Реакцию необходимо ставить в динамике для дифференциации типичных заболеваний от случаев реконвалесценции, латентной инфекции; 2) реакция связывания комплемента со специфическим антигеном риккетсии Бернета (более чувствительная и специфическая); 3) постановка аллергической пробы, которая является строго специфической; 4) прививка исследуемого материала морским свинкам подкожно или в яичко; 5) внутрибрюшинное заражение морских свинок введением 3 - 5 мл крови больного, взятой в период лихорадки, с последующим заражением куриных эмбрионов эмульсией из селезенки от пассажной морской свинки. Таким же путем производится выделение риккетсии от клещей и животных, Лечение. Применяются антибиотики - тетрациклины, левомицетин. Профилактика. Сводится к проведению систематической дезинфекции помещений для крупного и мелкого рогатого скота, особенно в период отела и окота. Молоко от зараженных животных кипятят, так как при пастеризации молока риккетсии Бернета не обезвреживаются. Больных людей госпитализируют, выделения обеззараживают. В местах с высокой заболеваемостью проводят иммунизацию живой вакциной из риккетсии Бернета. 6.ГРУППА ПАРОКСИЗМАЛЬНЫХ РИККЕТСИОЗОВ 1. Волынская, или траншейная, лихорадка. Возбудитель - Rochalimae quintanа - внеклеточный паразит кишечника вшей. Резервуар инфекции - больной человек. Переносчик - платяная вошь. Волынская лихорадка - эпидемическое заболевание, связанное с завшивленностью населения. Заболевание протекает, доброкачественно, без сыпи, с болями в кишечнике и костях и рецидивирующей лихорадкой. Лабораторная диагностика не разработана. Волынская лихорадка отмечалась в виде значительных вспышек в первую мировую войну, а также в период второй мировой войны на различных фронтах Европы. Болезнь может повсеместно встречаться в очагах завшивленности, но не всегда распознается. 2. Клещевой пароксизмальный риккетсиоз. Возбудитель - Rochalimae quintanа. Заболевание описано в 1945 - 1947 гг. Н. Н. Сиротининым и соавт. Переносчиками являются иксодовые клещи - Ixodes ricinus, источником возбудителя - клещи и грызуны (полевки). Болезнь представляет собой спорадическое доброкачественное заболевание с пароксизмальной лихорадкой, без первичного аффекта и сыпи; наблюдалась в некоторых местностях Украины. 1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ХЛАМИДИЙ Хламидии – мелкие грамотрицательные бактерии, которые являются облигатными внутриклеточными паразитами, подобно вирусам, но отличаются от них тем, что имеют в своем составе и РНК и ДНК, рибосомы, клеточную стенку и размножаются бинарным делением. Однако, они отличаются от большинства типичных бактерий тем, что они не имеют пептидогликана в клеточной стенке и неспособны образовывать собственную АТФ. Они требуют использования АТФ хозяина – следовательно, являются энергетическими паразитами. Род Chlamydia - единственный в семействе Chlamydiaceae и порядке Chlamydiales. Существуют три вида, утвержденных международным комитетом: Chlamydia trachomatis. C. psittaci и C. pneumoniae. C. trachomatis может быть разделена на три биовара: 1. Вызывающий трахому и конъюнктивит с включениями. 2. Вызывающий венерическую лимфогранулему (паховый лимфогрануломатоз). 3. Вызывающий пневмонию у мышей. Оба биовара, вызывающие заболевания у человека, могут быть подразделены на 17 сероваров. Классическая трахома вызывается сероварами A, Ba, B и C, в то время как конъюнктивит с включениями и генитальныеинфекции - серовары D-K. Венерическую гранулему вызывают, по крайней мере, три серовара (L1, L2, L3). C. psittaci инфицирует млекопитающих и птиц и хотя имеются и серологические различия и различия в нуклеиновых кислотах, этот вид пока еще не был подразделен. C. pneumomae,, самый новый вид, во-видимому, инфицирует только людей и пока проявляет себя серологически однородным. Морфология. Хламидии – мелкие неподвижные бактерии, размерами 300-350 нм, которые плохо окрашиваются по Граму. Однако, они хорошо выявляются в препаратах, окрашенных по Романовскому-Гимзе или другими методами в виде частиц, представляющих внеклеточную, инфекционную, метаболически инертную форму хламидий, известную как элементарное тельце. Как только микроорганизм инфицирует клетку хозяина, он увеличивается в размере до 800-1000 нм. Эта неинфекционная но метаболически активная частица известна как ретикулярное тельце. Хламидии могут также обнаруживаться иммунофлюоресцентным методом, когда специфическое антитело, меченое изотиоцианатом флюоресцеина наносится на препараты, приготовленные из клинического материала, например из шейки матки, уретры или из инфицированной культуры клеток. Элементарные тельца выглядят как отдельные ярко-зеленые частицы. С помощью этой методики можно подтвердить хламидийную инфекцию в течение 30 минут после получения материала. Три вида хламидий можно дифференцировать по: 1. Росту; 2. Профилю нуклеиновой кислоты; 3. Наличию плазмид; 4. Экспрессированным антигенам 5. Включениям в клетки хозяина, которые различаются морфологически. C. trachomatis образует в своих включениях гликогеновый матрикс, который окрашивается йодом в коричневый цвет, что имеет значение в диагностике. Элементарные тельца C. trachomatis и C. psittaci 300-350 нм в диаметре с очень небольшим периплазматическим пространством. C. pneumoniae отличается тем, что имеет большое периплазматическое пространств, давая элементарные тела грушевидной формы (310 x 400 нм). Ретикулярные тельца всех трех видов хламидий крупные, округлой формы (800-1000 нм). Поскольку ретикулярные тельца метаболически активны, их внутренняя структура отражает стадию размножения. В начале цикла обнаруживается много рибосом. Позже ДНК организуется в ядра для потомства элементарных телец. Образование гликогена в ретикулярных тельцах C. trachomatis обнаруживается в электронном микроскопе примерно через 18 часов после заражения, и включения заметны примерно через 22 ч. В случае C. psittaci или C. pneumoniae образования гликогена не отмечается. Между цитоплазматической мембраной и клеточной стенкой не отмечается наличия наличия пептидогликана, как это характерно для грамотрицательных бактерий. Нуклеиновая кислота. Молекулярная масса нуклеиновой кислоты хламидий составляет порядка 660 x 106. Три вида хламидий могут быть дифференцированына основании гомологии, поскольку внутривидовое соответствие не превышает 10 %. Плазмидная ДНК обнаружена у большинства штаммов C. trachomatis и C. psittaci, но овечьи штаммы C. psittaci и C. pneumomae, по-видимому, не имеют плазмид. Белок. Полагают, что небольшое число белков имеет значение для понимания антигенности и патогенеза, а также для возможного получения вкацин. У хламидий имеется четыре белка наружной мембраны, главный из которых имеет видоспецифические эпитопы. У хламидий имеется также белок (heat shock protein), антитела к которому перекрестно реагируют с подобными белками других микроорганизмов, что делает затруднительной интерпретацию серологического ответа при хламидийных инфекциях. Липополисахариды (ЛПС). Родо-специфический антиген хламидий может быть получен методами, используемыми для извлечения липополисахаридов из грамотрицательных бактерий. Он имеет три эпитопных участка, из которых только один специфичен для хламидий. Другие эпитопы перекрестно реагируют с мутантами Escherichia coli, Proteus mirabdis и Salmonella typhimunum и с ЛПС, полученным из разных видов Acinetobacter. Поскольку ЛПС-антиген используется в реакции связывания комплемента и некоторых иммуноферментных тестах (ИФА), необходима осторожность при интерпретации результатов. Культивирование.В 1957 C. trachomatis была выделена путем культивирования в желточном мешке куриного эмбриона. Хотя этот метод теперь не используется широко для выделения хламидий, он применяется для производства антигена, особенно для реакции иммунофлюоресценции. Выделение в культуре клеток было успешно проведено в 1965 г. Для роста хламидий культуры клеток должны быть, чтобы обеспечить продуктивное взаимодействие микроорганизма и клеток-хозяев. Это достигается осаждением микроорганизмов на клетки путем центрифугирования и подавления клеток облучением или добавлением к питательной среде 5-йодо-2’-дезоксиуридина. Окраска по Романовскому-Гимзе выявляет виды хламидий, а для обнаружения содержащих гликоген включений C. trachomatis может быть использован йод. Реакция иммунофлюоресценции с соответствующими антисыворотками позволяет выявить родо- или видо-специфические антигены. Различные виды хламидий имеют незначительно различающиеся требования к условиям культивирования, но C. pneumoniae наиболее трудно культивировать и в куриных эмбрионах, и в культуре клеток. Цикл развития. Первоначально микроорганизм должен присоединиться к клетке хозяина. Обнаружены специфические прикрепительные белки, что позволяет обсуждать вопрос о возможной роли белковых отростков на поверхности элементарных телец. Не все виды хламидий легко взаимодействуют с клетками хозяина. C. psittaci и хламидии венерической лимфогранулемы присоединяются и покрывают поверхность клетки хозяина, но C. trachomatis и C. pneumoniae вряд ли на это способны. Это зависит частично от отрицательного заряда микроорганизморв и клеток хозяина, котрый приводит к отталкиванию их друг от друга. Для преодоления этого добавляют поликатионы типа ДЭАЭ-декстрана, что увеличивает адсорбцию C. trachomatis, в то время как центрифугирование C. trachomatis или C. pneumoniae с клетками хозяина дает возможность формирования гидрофильных связей и повышает прикрепляемость обоих видов хламидий. Эти взаимодействия, хотя и являются полезными in vitro, вероятно не отражают ситуацию in vivo. Как только хламидии и клетка хозяина вошли в контакт, микроорганизм поступает в клетку внутри вакуоли. Жизнеспособные хламидии, поступившие в цитоплазму клетки хозяина, подавляют слияние с лизососмами, что позволяет избежать их гибели. В вакуоле элементарное тельце теряет свое компактное дезоксирибонуклеиновое ядро. Клеточная стенка становится менее твердой из-за нарушения дисульфидных связей; частица увеличивается в размере и становится ретикулярным тельцем. Ретикулярное тельце не имеет цитохрома и неспособно вырабатывать АТФ, снабжение которой должно обеспечиваться хозяином. В вакуоле ретикулярное тельце размножается бинарным делением, в результате чего образуются плеоморфные микроорганизмы. Через 18-20 ч ДНК уплотняется, формируются дисульфидные связи в белках наружной оболочки, и образуются новые элементарные тельца внутри эндосомальных пузырьков Выход элементарных телец идет вследствие лизиса клетки хозяина. Потребность хламидий в определенных аминокислотах может вести к подавлению размножения, которое может быть восстановлено добавлением необходимых аминокислот. Иммунитет и патогенез. Хламидийные инфекции вызывают гуморальные и клеточные иммунные реакции, которые играют различную роль в выздоровлении, резистентности к повторному инфицированию и иммунопатологических осложнениях. Хламидийные инфекции у человека не могут в достаточной мере быть изучены экспериментально, так как хотя и были созданы модели на животных, реакции у них могут не вполне соответствовать реакциям у человека. Однако, были использованы две самопроизвольные инфекции, коньюнктивит с включениями у морских свинок и пневмония у мышей. Выздоровление морских свинок замедлялось при подавлении иммунитета в результате введения циклофосфамида или антилимфоцитарной сыворотки. Это указывает на то, что и гуморальный, и клеточный иммунный ответ необходимы для выздоровления от коньюнктивита с включениями у морских свинок. При инфекциях у человека хламидии обладают способностью к десквамации клеток эпителия, а также макрофагов легких и желудочно-кишечного тракта. Такие инфекции вызывают развитие воспалительной реакции с инфильтрацией нейтрофилами в острой стадии. Внутриклеточное разрушение хламидий нейтрофилами встречается в клетках кислород-зависимыми и кислород-независимыми ферментными системами. Впоследствии в инфильтрате появляются моноциты и лимфоциты. Хламидии не размножаются в моноцитах, но когда эти клетки становятся тканевыми макрофагами, и C. psittaci, и хламидии венерической лимфогранулемы могут высвобождаться из фаголизосом и давать большое количество микроорганизмов. C. trachomatis может также размножаться в макрофагах, но в меньшем объеме. Предполагают, что инфицированные макрофаги могут быть средством распространения хламидий в организме хозяина. Продукция антител идет в обычной последовательности, вначале IgM, затем - IgG, уровень антител зависит от дозы. Образуется сывороточный IgA, в слизи обнаруживается секреторный IgA (S-IgA). Чем выше уровень S-IgA, тем менее успешно выделение хламидий из полового тракта. Более позднее, на 6-8 неделе, повышение уровня IgM и IgG антител к C. pneumoniae в сравнении с ранним, на 2-3 неделе повышением при генитальной инфекции, необходимо учитывать при серологической диагностике. Значение секреторных антител (или скорее их недостаточность) хорошо видно у новорожденных, имеющих материнские IgG. У части, инфицированных в родовых путях C. trachomatis, развивается конъюнктивит, несмотря на материнские IgG. Если инфекция не лечится соответствующим образом, у них развивается пневмония в возрасте 4-12 недель, когда уровень материнских антител снижается, и новорожденные начинают образовывать собственные IgM и IgG. Присутствие IgM антител или повышение титров IgG является признаком хламидийной инфекции дыхательного тракта новорожденных. Хотя специфические антитела могут нейтрализовать хламидии in vitro, существует лишь небольшая защита против повторной инфекции глаз или слизистых половых органов у лиц с циркулирующими IgG антителами. При вторичных или более поздних инфекциях наблюдается очень быстрая инфильтрация нейтрофилами и лимфоцитами. Плазматические клетки образуют антитела, которые не способны привести к выздоровлению. Эта недостаточность защиты антителами имеет значение для попыток разработки эффективной вакцины. Клеточный ответ. Антитела - не единственный фактор, который нужно рассматривать при повторной инфекции. Клеточно-опосредованный иммунитет также играет роль, которая может быть но может и не быть полезной для организма хозяина. Цельные живые хламидии, убитые высокой температурой микроорганизмы или даже липополисахарид может стимулировать продукцию лимфокинов типа При трахоме острая инфекция заканчивается воспалительной реакцией с инфильтрацией нейтрофилами и лимфоцитами. Эти лимфоциты могут группироваться и образовывать фолликул. Центр фолликула состоит из B клеток и макрофагов, окруженных T клетками, и все они окружены тонким слоем эпителиальных клеток. Эти эпителиальные клетки слущиваются, поскольку фолликул некротизируется, и регенерация фиброзной ткани, стимулируемая интерлейкином-1, ведет к рубцеванию. При повторной инфекции или повторной стимуляцией хламидийным антигеном воспалительная реакция будет более быстрой, приводящей к формированию большого количества фолликулов и рубцеванию. То же относится и к половому тракту, где восходящая инфекция может приводить к сальпингиту. Это заканчивается воспалительной реакцией с инфильтрацией нейтрофилами и лимфоцитами, нарушением мерцательного эпителия и эпителиальных клеток вблизи лимфоцитов. Повторяющаяся инфекция вызывает тяжелое поражение труб с формированием фолликулов, значительное разрушение эпителия и рубцевание, ведущее к нарушению проходимости (обструкции) бахромчатого конца труб. Такое поражение может заканчиваться бесплодием из-за нарушения продвижения яйцеклетки и к хронического воспаления тазовых органов. 2. ХЛАМИДИЙНЫЕ ИНФЕКЦИИ У ЧЕЛОВЕКА В таблице 1 представлены хламидийные инфекции глаз, половых органов и дыхательных тракта, в таблице 2 – способ передачи хламидийных инфекций.. Таблица 1. Хламидийные инфекции человека
|