Рабочая тетрадь микробиология, 2 часть. Методическое пособие Рабочая тетрадь по микробиологии

• Название: Методическое пособие Рабочая тетрадь по микробиологии
• Анкор: Рабочая тетрадь микробиология, 2 часть.doc
• Дата: 12.12.2017
• Размер: 1.61 Mb.
• Имя файла: Рабочая тетрадь микробиология, 2 часть.doc
• Тип: Методическое пособие; #11142
• страница: 3 из 6

Тема: ХОЛЕРА. ПИЩЕВЫЕ ОТРАВЛЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ЭТИОЛОГИИ.
Цель: Изучить биологические свойства холерных вибрионов, патогенез, клинику и лабораторную диагностику холеры; классификацию пищевых отравлений бактериальной этиологии, особенности их патогенеза, клиники и лабораторной диагностики.
Основные вопросы, разбираемые на занятии:

1. 
   Биологические свойства холерных вибрионов.
   
2. 
   Патогенез холеры.
   
3. 
   Лабораторная диагностика холеры.
   
4. 
   Классификация и патогенез пищевых отравлений бактериальной этиологии.
   
5. 
   Принципы лабораторной диагностики пищевых отравлений.
   

ХОЛЕРА
Этиология - _______________________________________________________

Источник инфекции -_______________________________________________

Механизм передачи -______________________________________________

Наиболее частый фактор передачи - ______________________________

Основное звено патогенеза - _______________________________________
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ХОЛЕРЫ
1.Бактериологический метод
Исследуемый материал: ______________________________________________


Щелочной агар с 1,5% NaCI)


1 -я среда обогащения (50 мл щелочной пептонной воды с 1,5% NaCI)





2 -я среда обогащения (10 мл щелочной пептонной воды с 1,5% NaCI)





Агглютинация на стекле с холерной О1 сывороткой





(+)

1% пептонная вода




ИДЕНТИФИКАЦИЯ
а) принадлежность к биохимической группе Хайберга

Группа	Субстрат
	манноза	сахароза	арабиноза
I
II
III
IV

б) чувствительность к холерным диагностическим бактериофагам

в) развернутая реакция агглютинации с холерными сыворотками О1, Огава, Инаба

Сыворотки	Разведения сыворотки
	1/100	1/200	1/400	1/800	1/1600	1/3200	К д	К с
О1
Огава
Инаба

Серовар испытуемого штамма _______________________________________
Культура микроорганизмов, имеющая характерные для вибрионов морфологические и культуральные свойства, относящаяся к I биохимической группе Хайберга, агглютини­рующаяся групповой (О1) и вариантспецифическими холерными сыворотками (Огава, Инаба), лизирующаяся холерным диагностическим фагом идентифицируется как Vibrio cholerae, сразу же проводится определение биовара.

Признак	Биовар
	V. cholerae var. choterae	V. cholerae var. eltor
Лизабельность фагами холерный (IV) "Эль-Тор" (II)	+ -	- +
Агглютинация эритроцитов	-	+
Лизис эритроцитов	-	+
Чувствительность к полимиксину	+	-
Реакция Фогеса-Проскауэра	-	+
Гексаминовый тест	-	+

Определение антибиотикорезистентности.
ПРЕПАРАТЫ ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ХОЛЕРЫ
Холероген-анатоксин _________________________________________________ ____________________________________________________________________

____________________________________________________________________
Холерная О вакцина _________________________________________________ ____________________________________________________________________

____________________________________________________________________
Холерный бактериофаг _______________________________________________ ____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

ПИЩЕВЫЕ ОТРАВЛЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ЭТИОЛОГИИ
Классификация

1. Пищевые токсикозы (интоксикации)

Этиология ________________________________________________________

Основное звено патогенеза _________________________________________

Длительность инкубационного периода _______________________________
2. Пищевые токсикоинфекции.

Этиология

часто встречающиеся возбудители	редко встречающиеся возбудители

Основное звено патогенеза _________________________________________

Длительность инкубационного периода _______________________________
ПРИНЦИПЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ПИЩЕВЫХОТРАВЛЕНИЙ
1. Определение возбудителя в пищевом продукте и материале от больного.

2. Определение токсинов в пищевом продукте и материале от больного.

3. Определение антител в сыворотке крови больного (редко).
Методы лабораторной диагностики.

1. 
   Бактериологический метод.
   

Исследуемый материал - материал от пострадавших, пробы пищевых продуктов.
Особенности метода:

• Параллельное исследование материала, количественный посев, применение широкого набора питательных сред.

• Определение абсолютных патогенов (шигелл, сальмонелл, Cl.botulinum) во всех мате­ риалах проводят качественно;

• Определение условнопатогенных возбудителей (энтеробактерий, стафилококков, про­теев, B.cereus, Cl.perfringens) - количественно.


ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ

Наименование питательной среды	Определяемые микроорганизмы	Рисунок среды с ростом
Среда Рапопорт	Сальмонеллы
Висмут-сульфит агар	Сальмонеллы
Желчный бульон	Шигеллы
Солевой бульон	Стафилококки
Среда Эндо	Энтеробактерии
Среда Плоскирева	Патогенные энтеробактерии
Висмут-сульфит агар	Сальмонеллы
МПА по Шукевичу	Протей
ЖСА	Стафилококки
Желточный агар с маннитом, полимиксином и феноловым красным	B.cereus
Молочно-ингибиторная среда	Энтерококки
Среда Вильсона-Блер	C.perfringens
Среда Китта-Тароцци	C.botulinum

Критерии диагностики:

1. Количественное обнаружение микроорганизмов более 100 - 1000 в исследуемом материале от пострадавших и более 100000 в 1 грамме или миллилитре пищевого продукта

2. Обнаружение микроорганизмов в острый период заболевания и исчезновение в период реконвалесценции.

3. Обнаружение микроорганизмов-возбудителей у большинства пострадавших.

4. Идентичность эпидемиологических маркеров (серо-, фагр-, био-, циноваров).
2. Биологический метод выявления токсинов

Исследуемый материал - материал от пострадавших, пробы пищевых продуктов.

Особенности метода:

• 
  Экстракция для выявления ботулотоксина в реакции нейтрализации на белых мышах;
  

• 
  Определение стафилококкового энтеротоксина путем скармливания исследуемого материала котятам;
  

• Вместо лабораторных животных можно также использовать высокочувствительные иммунологически реакции: ИФА, РИГА, РСК.
3. Серодиагностика (ИФА,РНГА,РСК).


Занятие № 4 Дата______________
Тема: ГНОЙНОСЕПТИЧЕСКИЕ ИНФЕКЦИИ. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНО­СТИКА ГСИ, ВЫЗВАННЫХ АЭРОБНЫМИ И ФАКУЛЬТАТИВНО-АНАЭРОБНЫМИ БАКТЕРИЯМИ.
Цель: Ознакомиться с понятием "гнойно-септические инфекции", их этиологией и лабораторной диагностикой.
Основные вопросы, разбираемые на занятии:

1. Этиология ГСИ.

2. Характеристика биологических свойств важнейших возбудителей ГСИ:

а) стафилококки;

б) стрептококки;

в) синегнойная палочка.

3. Лабораторная диагностика ГСИ:

а) бактериологическое исследование крови;

б) бактериологическое исследование гноя.
ВАЖНЕЙШИЕ ВОЗБУДИТЕЛИ ГСИ

ВОЗБУДИТЕЛИ ГСИ



ГРИБЫ

(p. Candida и др.)


БАКТЕРИИ




ОБЛИГАТНЫЕ АНАЭРОБЫ


АЭРОБЫ И ФАКУЛЬТАТИВНЫЕ АНАЭРОБЫ




неспорообразующие

(Bacteroides и др.)


спорообразующие

(p. Clostridium )

(p. Clostridium ) (Bacteroides и др.)

порообразующие неспорообразующие

(p. Clostridium ) (Bacteroides и др.)

спорообразующие неспорообразующие

(p. Clostridium ) (Bacteroides и др.)







ГРАМПОЛОЖИТЕЛЬНЫЕ КОККИ

(p.Staphylococcus;

p. Streptococcus)


ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫЕ ПАЛОЧКИ

(многие роды семейства Enterobacteriaceae;

род Pseudomonas;

род Acinetobacter и др.)




СТАФИЛОКОККИ

1. 
   Морфологические свойства.
   

Окраска по Граму. Увеличение х

2. 
   Культуральные свойства.
   

Кровяной агар	ЖСА

3. Упрощенная классификация стафилококков

Признак	S.aureus	S.epidermidis	S.saprophyticus
Плазмокоагулаза
Анаэробное сбражи­вание маннита
ДНК-аза
Чувствительость к новобиоцину
Роль в патологии человека

4. Факторы вирулентности стафилококков:

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________


СТРЕПТОКОККИ

1. Морфологические свойства.

Окраска по Граму. Увеличение х

2. 
   Культуральные свойства.
   

Кровяной агар

2. 
   Упрощенная классификация стрептококков, встречающихся у человека
   

Группы стрептококков	Основные виды	Гемолиз	Серогруппа по Ленсфильд	Роль в патологии человека	Серогруппа
Стрептокки гр.А	S.pyogenes		А	Тонзиллиты, скарлатина, рожа, ГСИ, ревматизм, гломерулонефрит.
Стрептокки гр.В	S.agalacticae		В	Сепсис новорожденных, менингиты.
Энтерококки	S.faecalis, S.faecium		D	Эндокардиты, ГСИ, пищевые токсикоинфекции
Пневмококки	S.pneumoniae			Пневмонии, менингиты
Зеленящие стрептокки	S.sanguis ГСИ (относительно ред- S.mitis •V-'"^ .ко) S.salivarius S.mutans			ГСИ (относительно редко) Кариес

4. Факторы вирулентности S.pyogenes:

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ГСИ.
Сепсис - ___________________________________________________________

____________________________________________________________________
Бактериемия - ______________________________________________________

____________________________________________________________________
Исследование крови.
1 день.

Посев крови.

Кровь в количестве 5-10 мл засевают на жидкие питательные среды в соотношении 1/10. Желательно проводить посев крови у постели больного. Одновременно используют пита­тельные среды для аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.
Питательные среды для посева крови:

А) Среды для аэробных и факультативно-анаэробных бактерий.

Сахарный бульон. (МПБ + глюкоза)
Двухфазная среда | (МПБ-+ глюкоза + МП А)

Б) Среда для облигатно-анаэробных бактерий.

Тиогликолевая среда

2 - 36 дни.

Посевы инкубируют до 6 недель с ежедневным просмотром посевов первые 8 дней. При появлении видимого роста делают мазки, окрашивают их по Граму и, в зависимости от результатов, делают высевы на соответствующие плотные питательные среды для выделе­ния чистой культуры и ее дальнейшей идентификации.

При отсутствии роста на 3 и 5 дни делают высев на кровяной агар. При отрицательном результате на 6 день выдается предварительный отрицательный ответ.
СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЯ ОТДЕЛЯЕМОГО РАНЫ.
1 этап

а) Микроскопия мазка по Граму.
б) Посев на питательные среды:

Среда	Для выделения каких микроорганизмов используется
Кровяной агар
Сахарный бульон.
Среда Китта-Тароцци

Инкубация посевов в термостате 5 суток с ежедневным просмотром. При отсутствии роста - отрицательный ответ.
2 этап

Выделение чистой культуры и ее идентификация.
3 этап

Определение антибиотикорезистентности и, при необходимости, внутривидовое типирование.
ХОД ИССЛЕДОВАНИЯ ГНОЯ НА ФАКУЛЬТАТИВНО-АНАЭРОБНЫЕ МИКРООРГАНИЗМЫ
1 день.

а) Микроскопия мазка по Граму.

Результат ______________________ _______________________________ _______________________________

б) Посев на кровяной агар и сахарный бульон.
2 день.

а) Учет роста на кровяном агаре и микроскопия мазка по Граму:
Результат ________________________________________________________ __________________________________________________________________
Откол колоний.
б) Высев с сахарного бульона на кровяной агар. Дальнейший ход исследования совпадает с таковым при прямом посеве на кровяной агар.
3 день.

а) Выбор и постановка тестов, необходимых для идентификации выделенной культуры.

Перечислите необходимые тесты с учетом характеристики выделенной культуры:

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________
б) Определение антибиотикорезистентности и внутривидовое типирование.
4 день

Учет результатов.

а) результаты тестов для идентификации культуры:

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________
Вывод: ______________________________________________________________ ____________________________________________________________________

____________________________________________________________________
б) Определение антибиотикорезистентности.
Название метода _________________________________________________

Исследуемый материал ____________________________________________

Диагностический препарат _________________________________________

Результат

Название антибиотика	Диаметр зоны задержки роста, мм	У, УУ, Ч

Вывод: ______________________________________________________________ ____________________________________________________________________
в) Учет результатов внутривидового типирования

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________
Заключение: ________________________________________________________ ____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

Занятие № 5 Дата______________