Рабочая тетрадь микробиология, 2 часть. Методическое пособие Рабочая тетрадь по микробиологии
 Скачать 1.61 Mb.
|
|
ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «ПЕНЗЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ» (ПГУ) МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ РАБОЧАЯ ТЕТРАДЬ ПО МИКРОБИОЛОГИИ Часть 2 Частная микробиология Н.Н. Митрофанова В.Л. Мельников Методическое пособие «Рабочая тетрадь по микробиологии» составлено в соответствии с программой для студентов 3 курса по микробиологии, вирусологии, иммунологии 2002 г. Подготовлено на кафедре микробиологии, эпидемиологии и инфекционных болезней медицинского института ПГУ. В пособии представлена методика проведения практических работ по частной микробиологии для студентов медицинских вузов. Пособие рекомендовано для работы студентов на практических занятиях. Занятие № 1 Дата______________ Тема: МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ЭТИОЛОГИИ. ЭШЕРИХИОЗЫ. ШИГЕЛЛЕЗЫ. ИЕРСИНИОЗЫ. Цель: Изучить принципы и методы лабораторной диагностики инфекционных заболеваний бактериальной этиологии, основных биологических свойств энтеробактерий. Изучить биологические свойства эшерихий, патогенез, клинику и лабораторную диагностику эшерихиозов; биологические свойства шигелл, особенности патогенеза, клиники и лабораторной диагностики шигеллезов; биологические свойства иерсиний, особенности патогенеза, клиники и лабораторной диагностики иерсиниозов. Основные вопросы, разбираемые на занятии:
2. Основные биологические свойства энтеробактерий 3. Основные биохимические тесты, применямые для идентификации энтеробактерий. 4. Биологические свойства эшерихий, классификация эшерихиозов и их патогенез. 5. Лабораторная диагностика эшерихиозов. 6. Биологические свойства шигелл. 7. Патогенез шигеллезов. 8. Лабораторная диагностика шигеллезов. 9. Биологические свойства иерсиний. 10. Патогенез иерсиниозов. 11. Лабораторная диагностика иерсиниозов. МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ 1. Методы, основанные на выявлении инфекционных агентов (бактерий, грибов, вирусов, простейших и др.) а) микроскопические методы(в том числе, бактериоскопический, цитоскопический). Основаны на прямом наблюдении возбудителя в патологическом материале с помощью различных приемов микроскопии (например, бактериоскопическая диагностика гонореи, туберкулеза, цитомегаловирусной инфекции и др); б) культуральные методы(в том числе, бактериологический, вирусологический и т.п.). Включают культивирование возбудителя на питательных средах, в организме лабораторных животных или на культурах клеток с целью выделения его в чистой культуре с последующей идентификацией. Являются основными методами диагностики большинства инфекционных заболеваний; в) методы, позволяющие обнаружить в исследуемом материале продукты, синтезированные микроорганизмами:
г) иммунологические методы поиска антигеноввозбудителей в исследуемом материале (например, диагностика вирусных гепатитов с помощью ИФА); д) генетические методы,основанные на обнаружении нуклеиновых кислот возбудителя в пробе (например, диагностика хламидиаза, уреаплазмоза в ПЦР). 2. Методы, основанные на выявлении иммунного ответа. а) серодиагностика - выявление гуморального иммунного ответа с помощью серологических реакций. Используется при большинстве заболеваний инфекционной природы. б) аллергодиагностика - выявление сенсибилизации к Аг возбудителя с помощью кожных аллергических проб или аллергических проб in vitro. Применяется при диагностике хронических инфекций (туберкулез, бруцелмз и др.). 3. Неспецифические лабораторные тесты. Выявление патологических изменений, характерных для патологического процесса определенной этилогии, по характеру отклонений некоторых биохимических, гематологических и т.п. показателей (например, изменение активности трансаминаз при вирусных гепатитах). СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВАЖНЕЙШИХ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ОКИ
ТРЕХСАХАРНЫЙ АГАР С МОЧЕВИНОЙ Состав среды: МПА + глюкоза + лактоза + сахароза + мочевина + индикатор рН + индикатор на сероводород. Учет результатов
Принцип действия среды: ферментация глюкозы происходит только в анаэробных условиях в глубине среды из-за ее малой концентрации. Ферментация сахарозы и лактозы происходит в аэробных услозиях на поверхности среды. При этом цвет индикатора меняется на желтый. Расщепление мочевины сопровождается защелачиванием среды и цвет индикатора меняется на малиновый. О продукции сероводорода узнаем по почернению среды. ... ОСНОВНЫЕ ПРИНЦИПЫ ТЕРАПИИ ОКИ
а) регидратация парентеральная и пероральная; б) дезинтоксикационная терапия; 3. Мероприятия по профилактике дизбактериоза. ВАЖНЕЙШИЕ ЗВЕНЬЯ ПАТОГЕНЕЗА ОКИ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ЭТИОЛОГИИ  ЭШЕРИХИИ ЗНАЧЕНИЕ ЭШЕРИХИЙ В ПАТОЛОГИИ ЧЕЛОВЕКА
Примечание: эшерихий отдельных групп отличаются друг от друга по набору факторов вирулентности. Так как определение отдельных факторов вирулентности крайне сложно, при диагностике эшерихиозов их дифференцируют по косвенному признаку - антигенным свойствам. ■■>'' ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ЭШЕРИХИОЗОВ Бактериологический метод Исследуемый материал: ______________________________________________ 1 день Посев испражнений на среду Эндо. . , - 2 день Откол подозрительных на патогенные кишечные палочки колоний. Так как патогенные и условнопатогенные кишечные палочки неотличимы по биохимическим свойствам и образуют на среде Эндо колонии _____________ цвета, отбор колоний производят с помощью реакции агглютинации с адсорбированной поливалентной ОКА сывороткой.
Исследуемый материал ____________________________________________ Диагностический препарат _________________________________________ Р  езультат реакции:Колония, материал из которой дает положительную реакцию агглютинации откалывается на скошенный МПА. Если ни одна из 10 исследованных колоний не дает положительного результата - выдают отрицательный ответ. 3 день 1. Серотипирование выделенной культуры. а) Постановка повторной РА с ОКА сывороткой, в случае положительной реакции - испытание культуры в РА с адсорбированными поливалентными сыворотками ОКВ, ОКС, ОКД более узкого спектра действия. Исследуемый материал ____________________________________________ Диагностический препарат _________________________________________ Р езультат реакции:б) в случае положительной реакции с одной из указанных сывороток, проведение РА с моновалентными адсорбированными ОК-сыворотками, входящими в состав поливалентной, с живой культурой и прогретой 30 мин при температуре 100 °С. Нативная культура микроорганизмов - для обнаружения К-АГ; прогретая культура микроорганизмов - для обнаружения О-АГ; Исследуемый материал ____________________________________________ Диагностический препарат _________________________________________ Р езультат реакции:При отсутствии адсорбированных О-сывороток, подтверждают принадлежность культуры к ОК-группе в развернутой пробирочной РА с живой и прогретой культурами. Аналогично, и в те же сроки, проводится серотипирование по Н-антигену. По совокупности определенных разновидностей О-, К-, Н-антигенов установливают серовар штамма эшерихий. 2. Определение спектра антибиотикорезистентности и внутривидовое типирование. 4 день. Учет результатов: а) Определение антибиотикорезистентности. Название метода _________________________________________________ Исследуемый материал ____________________________________________ Диагностический препарат _________________________________________ Результат
Вывод: ______________________________________________________________ ____________________________________________________________________ б) Колицинотипирование. Название метода _________________________________________________ Исследуемый материал ____________________________________________ Диагностический препарат _________________________________________ Вывод: ______________________________________________________________ ____________________________________________________________________ Заключение: ________________________________________________________ ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________ ШИГЕЛЛЫ КЛАССИФИКАЦИЯ ШИГЕЛЛ
Наиболее тяжелую клиническую форму дизентерии вызывают_____________ От других шигелл они отличаются_____________________________________ Наибольшая степень адапации к пребыванию в окружающей среде присуща __________________________________________________________________ Патологический процесс при бактериальной дизентерии локализуется __________________________________________________________________ Основные клинические проявления дизентерии: ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ __________________________________________________________________ ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ДИЗЕНТЕРИИ I. Бактериологический метод Исследуемый материал: ______________________________________________ 1 день Посев испражнений на среды __________________________________________ . , - 2 день
Откол ___________________ колоний на ______________________________ 3 день . 1. Учет биохимических свойств по трехсахарному агару. Результат: глюкоза - ________________________ лактоза и сахароза - ________________ сероводород - ______________________ Вывод: ______________________________________________________________ ____________________________________________________________________ 2. Серотипирование выделенной культуры. Название метода _________________________________________________ Исследуемый материал ____________________________________________ Диагностический препарат _________________________________________ Результат реакции:
Вывод: ______________________________________________________________ ____________________________________________________________________ 2. Определение спектра антибиотикорезистентности и внутривидовое типирование. 4 день. Учет результатов: а) Определение антибиотикорезистентности. Название метода _________________________________________________ Исследуемый материал ____________________________________________ Диагностический препарат _________________________________________ Результат
Вывод: ______________________________________________________________ ____________________________________________________________________ б) Определение биоваров (для S.sonnei)
Вывод: ______________________________________________________________ ____________________________________________________________________ б) Колицинотипирование. Название метода _________________________________________________ Исследуемый материал ____________________________________________ Диагностический препарат _________________________________________ Вывод: ______________________________________________________________ ____________________________________________________________________ Заключение: ________________________________________________________ ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________ II. Серодиагностика дизентерии в РНГА. Название реакции _________________________________________________ Исследуемый материал ____________________________________________ Диагностический препарат _________________________________________ Результат реакции:
Диагностический титр - 1/200. Вывод: ______________________________________________________________ ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________ Заключение: ________________________________________________________ ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________ ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ДИЗЕНТЕРИИ ИСПОЛЬЗУЮТ
КИШЕЧНЫЙ ИЕРСИНИОЗ И ПСЕВДОУБЕРКУЛЕЗ Этиология: кишечный иерсиниоз - ________________________________________ псевдотуберкулез - ___________________________________________ Источник инфекции -_______________________________________________ Механизм передачи -______________________________________________ Наиболее частый фактор передачи - _______________________________ ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА КИШЕЧНОГО ИЕРСИНИОЗА И ПСЕВДОТУБЕРКУЛЕЗА I. Бактериологический метод Исследуемый материал: ______________________________________________    Х ПРЯМОЙ ПОСЕВ ОЛОДОВОЕ ОБОГАЩЕНИЕ    Буферная среда 6-9ºС, до 21 сут.  Откол lac-колоний на ТСА с мочевиной глюкоза - _____________ лактоза и сахароза - _____________ сероводород - __________ мочевина - _____________ Учет роста на ТСА с мочевиной  ИДЕНТИФИКАЦИЯ а) по биохимическим свойствам
Вывод: ______________________________________________________________ ____________________________________________________________________ б) по антигенным свойствам Исследуемый материал ____________________________________________ Диагностический препарат _________________________________________ в) Определение антибиотикорезистентности и внутривидовое типирование (по антигенным свойствам). 2. Серодиагностика Название реакции _________________________________________________ Исследуемый материал ____________________________________________ Диагностический препарат _________________________________________ Результат реакции:
Диагностический титр - 1/200. Вывод: ______________________________________________________________ ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________ Занятие № 2 Дата______________ | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
