кровь. Методика определения групп крови
 Скачать 42.28 Kb.
|
|
81. Методы определения группы крови по системе АВО. МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУПП КРОВИ Определение групповой принадлежности крови по системе АВО осуществляется при помощи реакции агглютинации. В настоящее время применяется три способа определения групп крови по системе АВО: • по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам, • по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам и стан- дартным эритроцитам (перекрестный способ), • с помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В). Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам (простой метод) Материальное оснащение: стандартные сыворотки 0(I), А(II), В(III), АВ(IV) групп двух серий, изотонический раствор хлорида натрия, иглы, тарелки, стеклянные палочки или предметные стекла, пипетки, песочные часы, резиновые перчатки, маска, очки, клеенча- тый передник. Для определения группы крови используют блюдцеоб- разные пластины (тарелки) с лунками, над которыми имеются обозна- чения соответственно стандартным сывороткам. Методика выполнения: Определение группы крови производится при температуре не ниже +150 С и не выше +250 С. 1. Надеть маску и передник, обработать руки антисептиком для обработки рук, надеть перчатки и защитные очки. 2. Осмотреть стандартные гемагглютинирующие сыворотки, чтобы они не содержали осадка, не был просрочен срок годности, бы- ли правильно расположены по отношению друг к другу. 3. На пластинке (тарелке) написать фамилию больного. 4. Согласно обозначениям групп крови на тарелке, в каждую лунку нанести отдельной пипеткой по одной капле стандартной сыво- ротки - первой, второй и третьей группы двух серий образуя два ряда по три капли в каждом. 5. Взять кровь. Кровь для исследования берется из пальца или вены. При взятии крови из пальца в левую руку взять левую кисть больного, обработать спиртом дистальную фалангу IV пальца и про- колоть стерильной иглой, при этом первую каплю крови удалить. 6. Шесть капель крови перенести стеклянной палочкой на те- релку, размещая их рядом с каплей стандартной сыворотки. Можно на тарелку нанести одну большую каплю крови, а затем уголком пред- метного стекла перенести в капли сыворотки. Каждый раз кровь берут новым уголком стекла. Соотношение исследуемой крови и стандарт- ной сыворотки должно быть 1:10. 7. Место укола пальца обработать спиртом. 8. Каждую каплю крови и сыворотки на пластинке смешать от- дельной палочкой. 9. Пластинку осторожно покачивать в течение 5 минут, посто- янно обращая внимание на лунки, где может наступить аггютинация (склеивание эритроцитов). По мере наступления агглютинации, но не раньше чем через три минуты в капли на пластинке (тарелке) доба- вить по одной капле изотонического раствора хлорида натрия. 10. Реакция агглютинации может быть положительной или отри- цательной. Агглютинация наступает обычно в течение первых 10-30 се- кунд. Визуально в капле появляются мелкие красные зернышки (аг- глютинаты), которые состоят из эритроцитов. Мелкие агглютинаты сливаются в более крупные. Сыворотка обычно частично обесцвечи- вается. Если агглютинация не происходит сыворотка остается окра- шенной в красный цвет, агглютинатов в ней нет. Следует помнить, что кровь содержащая агглютиноген А2 дает позднюю агглютинацию (на 3-4 минуте). Результаты исследования в одной и той же группе двух серий должны совпадать. Оценка результатов Стандартные сыворотки трех групп не вызывают агглютинации эритроцитов во всех лунках - группа крови О (I) первая; Стандартные сыворотки О (I) и В (III) группы агглютинировали эритроциты в первой и третьей лунках, а не агглютинировали во вто- рой - группа крови А (II) вторая; Наличии агглютинации в первой и второй лунках и отсутствии в третьей - группа В (III) третья; Стандартные сыворотки всех трех групп агглютинировали эрит- роциты во всех лунках - данная кровь относится к четвертой группе АВ(IV). Если исследуемая кровь оказалась АВ(IV), группы проводит- ся дополнительное контрольное исследование со стандартной сыво- роткой АВ(IV) группы. При отсутствии агглютинации исследуемой крови с сывороткой АВ(IV) группы данную кровь можно отнести к четвертой группе. Примечание: Во всех сомнительных случаях необходимо про- вести повторное исследование с гемагглютинирующими сыворотками другой серии. Определение группы крови двойной реакцией (по стандартным сывороткам и стандартным эритроцитам) (перекрестный способ) Суть метода – с помощью стандартных изогемагглютинирую- щих сывороток определяется наличие или отсутствие в исследуемой крови групповых антигенов А и В, а с помощью стандартных эритро- цитов наличие или отсутствие в плазме групповых антител α и β. Стандартные эритроциты представляют собой 10-20 % взвесь эритро- цитов 0(I), A(II) и B(III) групп в цитратно-физиологическом растворе. Их готовят из крови доноров с заранее известной группой крови, хра- нят при +4-8°С. Срок годности 2-3 дня. Материальное оснащение: стандартные сыворотки 0(I), А(II), В(III), групп двух серий, стандартные эритроциты 0(I), А(II), В(III) групп, изотонический раствор хлорида натрия, иглы, тарелки, стек- лянные палочки или предметные стекла, пипетки, песочные часы, ре- зиновые перчатки, маска, очки, клеенчатый передник. Методика выполнения: 1. Надеть маску и передник, обработать руки антисептиком для обработки рук, надеть перчатки и защитные очки. 2. Взять 3-5 мл исследуемой крови в пробирку без стабилизато- ра. Кровь должна отстояться, или ее центрифугируют для получения сыворотки. 3. На планшет нанести по две капли стандартных сывороток группы 0(I), А(II), В(III), двух серий. 4. Соответственно каждой группе сывороток расположить по одной капле стандартных эритроцитов группы 0(I), А(II), В(III), . 5. В стандартные сыворотки добавить по одной капле испытуе- мой крови, а в стандартные эритроциты - по две капли испытуемой сыворотки. 6. Капли перемешать углом предметного стекла, всякий раз из- меняя угол так, чтобы не произошло смешивание разных сывороток и разных эритроцитов. 7. Покачивая планшет в руках в течение 5 минут, следят за наступлением агглютинации. Оценка результатов: При трактовке результатов оценивают данные, полученные при обеих реакциях (со стандартными изогемагглютинирующими сыво- ротками и стандартными эритроцитами) 1. Эритроциты группы О (I) являются контрольными, агглюти- нация с ними не происходит. 2. Агглютинация со стандартными эритроцитами А и В и нет аг- глютинации в трех стандартных сыворотках двух серий - в исследуемой сыворотке присутствуют оба агглютинина α и β, а в испытуемых эритро- цитах нет агглютиногенов, т. е. кровь относится к группе O(I). 3. Агглютинация со стандартными эритроцитами группы B(III) и со стандартной сывороткой группы O(I), B(III) - в исследуемых эритроцитах имеется агглютиноген А, а в сыворотке исследуемой крови - агглютинин β. Следовательно, кровь относится к группе A(II). 4. Агглютинация со стандартными эритроцитами группы A(II) и со стандартной сывороткой группы A(II), O(I) – в исследуемых эрит- роцитах имеется агглютиноген В, а в исследуемой сыворотке - агглю- тинин α. Следовательно, кровь относится к группе B(III). 5. Нет агглютинации со стандартными эритроцитами и есть агглю- тинация со стандартными сыворотками - в исследуемых эритроцитах имеются оба агглютиногена А и В, а в сыворотке исследуемой крови от- сутствуют оба агглютинина, кровь относится к группе AB(IV). Примечание. Результат перекрестного способа считается до- стоверным только в случае совпадения ответов о группе исследуемой крови и со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и со стандартными эритроцитами. При несовпадении результатов обе реакции необходимо переделать. Определение групповой принадлежности крови с использованием антител Определение группы крови можно произвести с помощью мо- ноклональных антител (МКА). Для определения агглютиногенов эритроцитов используют стандартные реагенты цоликлоны анти-А и анти-В. Получают моноклональные антитела с применением гибри- домной битехнологии. Гибридома – это клеточный гибрид, возник- ший в результате слияния клетки опухоли костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, синтезирующим специфические монокло- нальные антитела. Гибридома приобретает свойства обоих “родите- лей”: способность к неограниченному росту, характерную для опухо- левой клетки, и возможность синтезировать антитела, присущую им- мунному лимфоциту. Цоликлоны анти-А и анти-В продуцируются двумя различными гибридомами. Они предназначены для определе- ния группы крови системы АВО человека взамен стандартных изоге- магглютинирующих сывороток. Цоликлоны анти-А (красного цвета) и анти-В (синего цвета) выпускаются как в нативной, так и в лиофили- зированной форме в ампулах по 20,50,100,200 доз с растворителем, при- ложенным к каждой ампуле по 2,5, 10,20 мл соответственно. Лиофилизи- рованный порошок разводят изотоническим раствором хлористого натрия непосредственно перед исследованием. Для каждого определения группы крови применяют по одной серии реагента анти-А и анти-В. Материальное оснащение: цоликлоны анти-А и анти-В, изото- нический раствор хлорида натрия, иглы, тарелки, стеклянные палочки или предметные стекла, пипетки, песочные часы, резиновые перчатки, маска, очки, клеенчатый передник. Методика выполнения: 1. Надеть маску и передник, обработать руки антисептиком для обработки рук, надеть перчатки и защитные очки. 2. Убедиться в пригодности цоликлонов, донорской крови. 3. На тарелке написать Ф. И. О. донора и реципиента. 241 4. Вскрыть ампулы с цоликлонами, растворителями, смешать все с помощью отдельных шприцев, разлить цоликлоны во флаконы с пипеткой (анти-А – красный, анти-В – синий). 5. Взять кровь реципиента и донора. 6. В две лунки под соответствующими надписями: анти-А или анти-В нанести по 1 капле (0,1мл) цоликлонов: в первую – цоликлон анти-А, во вторую – цоликлон анти-В. 7. Отдельным концом стеклянной палочки или отдельной пи- петкой для каждой лунки перенести каплю крови в 10 раз меньше капли цоликлона с предметного стекла в лунку и смешать с каплей цоликлона до гомогенного пятна. 8. Блюдце осторожно покачивать в течение 2,5 мин. 9. Оценить результат пробы без добавления изотонического раствора натрия хлорида. Оценка результатов: − При отсутствии агглютинации с двумя цоликлонаи группа крови 0(I) – первая. − При наличии агглютинации с цоликлоном анти-А группа крови А(II) – вторая. − При наличии агглютинации с цоликлоном анти-В группа крови В(III) – третья. − При наличии агглютинации с двумя цоликлонами группа крови АВ(IV) – четвертая. 82. Изогемагглюцинация. Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки. Понятие о титре. Изогемагглютинация (изо- + гемагглютинация) - агглютинация эритроцитов, наступающая при действии сыворотки крови, содержащей изоагглютинины, на эритроциты с соответствующими изоантигенами. СТАНДАРТНЫЕ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИЕ СЫВОРОТКИ Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки, используемые для определения группы крови, соответствуют четырем группам крови 0 (I), А (I I), В (I I I), AB (IV). Их получают из крови, реже из других жидкостей (асцитической, плеврального экссудата). Используется кровь от доноров, трупная или плацентарная кровь. Кровь отстаивается и забирается сыворотка, к которой добавляется консервант (борная кислота из расчета 3,0 г порошка на 100 мл сыворотки). После отстаи- вания сыворотка разливается по стерильным ампулам или флаконам, которые сразу же запаиваются или герметично закупориваются. Требования, предъявляемые к стандартным изогемагглютини- рующим сывороткам: 1. агглютинация с соответствующими эритроцитами должна появиться в течение 15-20 с, а через 2 мин. она должна быть четкой; 2. не давать агглютинацию с эритроцитами одноименной и пер- вой групп; 3. титр сыворотки должен быть не ниже 1 : 32; 4. сыворотка должна быть без признаков микробного загрязне- ния, прозрачной; 5. каждая ампула должна иметь паспорт с обозначением груп- пы, срока годности, титра, места и времени приготовления, нанесены соответствующего цвета полосы. Во избежание ошибок при определении групп крови сыворотки окрашивают в определенный цвет. Окраска стандартных изоге- магглютинирующих сывороток: 0(I)- неокрашивается, А(II) - синий цвет, B(III) – розовый, AB(IV)- желтый. Сыворотки хранят герметично закрытыми в темном месте, лучше в холодильнике. ПОНЯТИЕ О ТИТРЕ Реакция агглютинации с различными сыворотками и эритроци- тами может в одних случаях наступить довольно быстро и быть четко выражена, в других она менее выражена и возникает более медленно. Иногда агглютинация и при большом разведении сыворотки четко выявляется, в других случаях даже слабое разведение приводит к не проявлению её. Все это обусловлено тем, что чувствительность эрит- роцитов и сыворотки подвержена значительным колебаниям. Под титром агглютинации понимается максимальное разведение сыворот- ки, при котором еще может наступать реакция агглютинации. При определении титра сыворотки, постоянной величиной являются стан- дартные эритроциты; при определении титра эритроцитов, постоян- ной величиной является стандартная сыворотка. Титр понятие относи- тельное, так как титр эритроцитов точно устанавливается только по отношению к испытуемой сыворотке, а титр сыворотки только к ис- пытуемым эритроцитам. К другим эритроцитам он может быть дру- гой, но колебания его обычно бывают небольшими. Однако целый ряд эритроцитов обладает одинаковой чувствительностью, также как и ряд сывороток имеет одинаковый титр. Титр зависит и от метода определения. При определении капельным методом на тарелке у здо- ровых людей титр сыворотки колеблется в пределах 1:8-1:32. Если титр определяется в пробирках, он получается значительно выше. Практическое значение имеет тот факт, что титр агглютининов новорожденных крайне низкий, а по мере развития человека он по- вышается; достигая максимума в возрасте от 5 до 20 лет, дальше он начинает падать. Титр агглютиногенов может меняться при заболе- ваниях. Повышение его отмечается при ряде воспалительных процес- сов, резкое снижение бывает при тяжелой общей инфекции. Слабый титр сыворотки отмечен при лейкемии. У здоровых же людей титр сыворотки остается почти неизменным. 83. Зависимость реакции агглютинации от физико-химических условий. На ход агглютинации может оказывать влияние целый ряд фи- зических и химических факторов. Температура. При низкой температуре происходит неспецифи- ческая "холодовая агглютинация". Для неё характерно возникновение агглютинации вне зависимости от группы крови. "Холодовая агглю- тинация" обусловлена наличием в сыворотке особого холодового аг- глютинина, который может давать реакцию агглютинации только при низких температурах. При температуре выше 20°С он никогда агглю- тинации не дает. Поэтому несоблюдение температурного режима при определении группы крови может привести к ошибке. Химические факторы. Течение агглютинации зависит от степе- ни концентрации солевого раствора, в котором находятся эритроциты. Повышение его концентрации приводит к её ослаблению, а при со- держании 4, 25 % во взвеси эритроцитов агглютинация уже не насту- пает. Ускорение агглютинации наблюдается при добавление 10 % рас- твора лимоннокислого натрия. Феномен Томсена. Агглютинация, возникающая при взаимодей- ствии одноименных агглютиногенов и агглютининов, является специ- фической. Неспецифическая агглютинация может быть обусловлена рядом факторов. Одним из видов такой агглютинации является фено- мен Томсена, описанный в 1927 г. Суть этого феномена заключается в следующем: нестерильно взятые и отмытые эритроциты, независимо от их групповой принадлежности, простояв в течение суток при ком- натной температуре, начинают давать агглютинацию с сыворотками всех групп включая собственную. Причина возникновения феномена Томсена - бактериальное загрязнение крови. При микроскопическом исследовании такой агглютинации видно, что эритроциты лежат близко один к другому, а между ними заметны границы, чего нет при истинной агглютинации. Макроскопически агглютинацию при этом феномене нельзя отличить от истинной. Поэтому можно неправильно определить групповую принадлежность крови, все эритроциты будут трактоваться как принадлежащие к группе (AB)IV. Панагглютинация (аутоагглютинация). Явление неспецифиче- ской агглютинации может наблюдаться и в свежей бактериально не загрязнённой крови. Встречается она сравнительно редко и называет- ся панагглютинацией, или аутоагглютинацией. При этом виде агглю- тинации сыворотка при комнатной температуре дает агглютинацию со всеми эритроцитами, даже собственной группы, а эритроциты в то же время дают агглютинацию со всеми сыворотками, в том числе с сыво- роткой группы (AB)IV. Панагглютинация может возникать при целом ряде заболеваний (болезнях крови, септикопиемии, заболеваниях ге- патолиенальной системы, пневмонии, нефритах и т. д.), иногда выяв- ляется и у здоровых людей. Панагглютинация возникает только при комнатной температуре, при температуре, близкой к температуре те- ла, она обычно не наступает. До настоящего времени причина этого явления неизвестна. Макроскопически панагглютинация неотличима от специфической агглютинации. Псевдоагглютинация. Явление псевдоагглютинации обусловле- но склеиванием эритроцитов в монетные столбики независимо от их агглютинабельных свойств. При этом они не разрушаются, мембраны сохраняются, что четко видно под микроскопом. При добавлении 1-2 капель изотонического раствора хлорида натрия псевдоагглютинация исчезает. 84. Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сыворот-кам. Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам (простой метод) Материальное оснащение: стандартные сыворотки 0(I), А(II), В(III), АВ(IV) групп двух серий, изотонический раствор хлорида натрия, иглы, тарелки, стеклянные палочки или предметные стекла, пипетки, песочные часы, резиновые перчатки, маска, очки, клеенча- тый передник. Для определения группы крови используют блюдцеоб- разные пластины (тарелки) с лунками, над которыми имеются обозна- чения соответственно стандартным сывороткам. Методика выполнения: Определение группы крови производится при температуре не ниже +150 С и не выше +250 С. 1. Надеть маску и передник, обработать руки антисептиком для обработки рук, надеть перчатки и защитные очки. 2. Осмотреть стандартные гемагглютинирующие сыворотки, чтобы они не содержали осадка, не был просрочен срок годности, бы- ли правильно расположены по отношению друг к другу. 3. На пластинке (тарелке) написать фамилию больного. 4. Согласно обозначениям групп крови на тарелке, в каждую лунку нанести отдельной пипеткой по одной капле стандартной сыво- ротки - первой, второй и третьей группы двух серий образуя два ряда по три капли в каждом. 5. Взять кровь. Кровь для исследования берется из пальца или вены. При взятии крови из пальца в левую руку взять левую кисть больного, обработать спиртом дистальную фалангу IV пальца и про- колоть стерильной иглой, при этом первую каплю крови удалить. 6. Шесть капель крови перенести стеклянной палочкой на те- релку, размещая их рядом с каплей стандартной сыворотки. Можно на тарелку нанести одну большую каплю крови, а затем уголком пред- метного стекла перенести в капли сыворотки. Каждый раз кровь берут новым уголком стекла. Соотношение исследуемой крови и стандарт- ной сыворотки должно быть 1:10. 7. Место укола пальца обработать спиртом. 8. Каждую каплю крови и сыворотки на пластинке смешать от- дельной палочкой. 9. Пластинку осторожно покачивать в течение 5 минут, посто- янно обращая внимание на лунки, где может наступить аггютинация (склеивание эритроцитов). По мере наступления агглютинации, но не раньше чем через три минуты в капли на пластинке (тарелке) доба- вить по одной капле изотонического раствора хлорида натрия. 10. Реакция агглютинации может быть положительной или отри- цательной. Агглютинация наступает обычно в течение первых 10-30 се- кунд. Визуально в капле появляются мелкие красные зернышки (аг- глютинаты), которые состоят из эритроцитов. Мелкие агглютинаты сливаются в более крупные. Сыворотка обычно частично обесцвечи- вается. Если агглютинация не происходит сыворотка остается окра- шенной в красный цвет, агглютинатов в ней нет. Следует помнить, что кровь содержащая агглютиноген А2 дает позднюю агглютинацию (на 3-4 минуте). Результаты исследования в одной и той же группе двух серий должны совпадать. Оценка результатов Стандартные сыворотки трех групп не вызывают агглютинации эритроцитов во всех лунках - группа крови О (I) первая; Стандартные сыворотки О (I) и В (III) группы агглютинировали эритроциты в первой и третьей лунках, а не агглютинировали во вто- рой - группа крови А (II) вторая; Наличии агглютинации в первой и второй лунках и отсутствии в третьей - группа В (III) третья; Стандартные сыворотки всех трех групп агглютинировали эрит- роциты во всех лунках - данная кровь относится к четвертой группе АВ(IV). Если исследуемая кровь оказалась АВ(IV), группы проводит- ся дополнительное контрольное исследование со стандартной сыво- роткой АВ(IV) группы. При отсутствии агглютинации исследуемой крови с сывороткой АВ(IV) группы данную кровь можно отнести к четвертой группе. Примечание: Во всех сомнительных случаях необходимо про- вести повторное исследование с гемагглютинирующими сыворотками другой серии. 85. Определение групп крови двойной реакцией. Суть метода – с помощью стандартных изогемагглютинирую- щих сывороток определяется наличие или отсутствие в исследуемой крови групповых антигенов А и В, а с помощью стандартных эритро- цитов наличие или отсутствие в плазме групповых антител α и β. Стандартные эритроциты представляют собой 10-20 % взвесь эритро- цитов 0(I), A(II) и B(III) групп в цитратно-физиологическом растворе. Их готовят из крови доноров с заранее известной группой крови, хра- нят при +4-8°С. Срок годности 2-3 дня. Материальное оснащение: стандартные сыворотки 0(I), А(II), В(III), групп двух серий, стандартные эритроциты 0(I), А(II), В(III) групп, изотонический раствор хлорида натрия, иглы, тарелки, стек- лянные палочки или предметные стекла, пипетки, песочные часы, ре- зиновые перчатки, маска, очки, клеенчатый передник. Методика выполнения: 1. Надеть маску и передник, обработать руки антисептиком для обработки рук, надеть перчатки и защитные очки. 2. Взять 3-5 мл исследуемой крови в пробирку без стабилизато- ра. Кровь должна отстояться, или ее центрифугируют для получения сыворотки. 3. На планшет нанести по две капли стандартных сывороток группы 0(I), А(II), В(III), двух серий. 4. Соответственно каждой группе сывороток расположить по одной капле стандартных эритроцитов группы 0(I), А(II), В(III), . 5. В стандартные сыворотки добавить по одной капле испытуе- мой крови, а в стандартные эритроциты - по две капли испытуемой сыворотки. 6. Капли перемешать углом предметного стекла, всякий раз из- меняя угол так, чтобы не произошло смешивание разных сывороток и разных эритроцитов. 7. Покачивая планшет в руках в течение 5 минут, следят за наступлением агглютинации. Оценка результатов: При трактовке результатов оценивают данные, полученные при обеих реакциях (со стандартными изогемагглютинирующими сыво- ротками и стандартными эритроцитами) 1. Эритроциты группы О (I) являются контрольными, агглюти- нация с ними не происходит. 2. Агглютинация со стандартными эритроцитами А и В и нет аг- глютинации в трех стандартных сыворотках двух серий - в исследуемой сыворотке присутствуют оба агглютинина α и β, а в испытуемых эритро- цитах нет агглютиногенов, т. е. кровь относится к группе O(I). 3. Агглютинация со стандартными эритроцитами группы B(III) и со стандартной сывороткой группы O(I), B(III) - в исследуемых эритроцитах имеется агглютиноген А, а в сыворотке исследуемой крови - агглютинин β. Следовательно, кровь относится к группе A(II). 4. Агглютинация со стандартными эритроцитами группы A(II) и со стандартной сывороткой группы A(II), O(I) – в исследуемых эрит- роцитах имеется агглютиноген В, а в исследуемой сыворотке - агглю- тинин α. Следовательно, кровь относится к группе B(III). 5. Нет агглютинации со стандартными эритроцитами и есть агглю- тинация со стандартными сыворотками - в исследуемых эритроцитах имеются оба агглютиногена А и В, а в сыворотке исследуемой крови от- сутствуют оба агглютинина, кровь относится к группе AB(IV). Примечание. Результат перекрестного способа считается до- стоверным только в случае совпадения ответов о группе исследуемой крови и со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и со стандартными эритроцитами. При несовпадении результатов обе реакции необходимо переделать. 86. Определение групп крови с использованием моноклональных антител. Определение группы крови можно произвести с помощью мо- ноклональных антител (МКА). Для определения агглютиногенов эритроцитов используют стандартные реагенты цоликлоны анти-А и анти-В. Получают моноклональные антитела с применением гибри- домной битехнологии. Гибридома – это клеточный гибрид, возник- ший в результате слияния клетки опухоли костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, синтезирующим специфические монокло- нальные антитела. Гибридома приобретает свойства обоих “родите- лей”: способность к неограниченному росту, характерную для опухо- левой клетки, и возможность синтезировать антитела, присущую им- мунному лимфоциту. Цоликлоны анти-А и анти-В продуцируются двумя различными гибридомами. Они предназначены для определе- ния группы крови системы АВО человека взамен стандартных изоге- магглютинирующих сывороток. Цоликлоны анти-А (красного цвета) и анти-В (синего цвета) выпускаются как в нативной, так и в лиофили- зированной форме в ампулах по 20,50,100,200 доз с растворителем, при- ложенным к каждой ампуле по 2,5, 10,20 мл соответственно. Лиофилизи- рованный порошок разводят изотоническим раствором хлористого натрия непосредственно перед исследованием. Для каждого определения группы крови применяют по одной серии реагента анти-А и анти-В. Материальное оснащение: цоликлоны анти-А и анти-В, изото- нический раствор хлорида натрия, иглы, тарелки, стеклянные палочки или предметные стекла, пипетки, песочные часы, резиновые перчатки, маска, очки, клеенчатый передник. Методика выполнения: 1. Надеть маску и передник, обработать руки антисептиком для обработки рук, надеть перчатки и защитные очки. 2. Убедиться в пригодности цоликлонов, донорской крови. 3. На тарелке написать Ф. И. О. донора и реципиента. 241 4. Вскрыть ампулы с цоликлонами, растворителями, смешать все с помощью отдельных шприцев, разлить цоликлоны во флаконы с пипеткой (анти-А – красный, анти-В – синий). 5. Взять кровь реципиента и донора. 6. В две лунки под соответствующими надписями: анти-А или анти-В нанести по 1 капле (0,1мл) цоликлонов: в первую – цоликлон анти-А, во вторую – цоликлон анти-В. 7. Отдельным концом стеклянной палочки или отдельной пи- петкой для каждой лунки перенести каплю крови в 10 раз меньше капли цоликлона с предметного стекла в лунку и смешать с каплей цоликлона до гомогенного пятна. 8. Блюдце осторожно покачивать в течение 2,5 мин. 9. Оценить результат пробы без добавления изотонического раствора натрия хлорида. Оценка результатов: − При отсутствии агглютинации с двумя цоликлонаи группа крови 0(I) – первая. − При наличии агглютинации с цоликлоном анти-А группа крови А(II) – вторая. − При наличии агглютинации с цоликлоном анти-В группа крови В(III) – третья. − При наличии агглютинации с двумя цоликлонами группа крови АВ(IV) – четвертая. |