Микробиология. микра зачет. Микробиологическая диагностика и специфическая профилактика кишечных инфекций
 Скачать 57.17 Kb.
|
|
16. Микробиологическая диагностика дизентерии. Серодиагностика. РНГА с эритроцитарными шигеллезными диагностикумами Материал: сыворотка крови Компоненты: ИХН, сыворотка больного, эритроцитарный диагностикум Реакцию ставят в планшетах. Вносят в лунки по 1 капле ИХН, разводят сыворотку, добавляют одинаковое количество эритроцитарного диагностикума. В контроль сыворотки добавляют только ИХН и сыворотку, в контроль диагностикума – ИХН и диагностикум. Помещают в термостат на 18-24 ч при 37С. Проводят макроскопический учет – положительный результат – зонтик – рыхлый садок их склеившихся эритроцитов на дне и боковых поверхностях лунок. Отрицательный – пуговка – плотный осадок их эритроцитов на дне. 17.Агглютинирующие ОВ коли-сыворотки поливалентные. Получение. Назначение. Содержание: агглютинирующие антитела к О- и В-антигенам кишечной палочки. Получение: гипериммунизация кролика О- и В-антигенами кишечной палочки. Применение: для диагностики в бактериологическом методе, постановка реакции агглютинации- для идентификации энтеропатогенных эшерихий. 18. Протей. Свойства. Значение протея при пищевых отравлениях Род Ptoteus Виды P. vulgaris/ P. mirabilis Морфология: палочки, располагаются попарно или цепочками, не образуют капсулу, подвижны Культуральные: растут на простых питательных средах. На плотных образуют 2 типа колоний – Н-формы (колонии роятся, образуя дочерние отростки) и О-формы (при неблагоприятных условиях, колонии крупные и ровными краями) Биохимические: гнилостные бактерии. Продуцируют фенилаланиндезаминазу, расщепляют мочевину, продуцируют сероводород, не расщепляют лактозу, разжижают желатин Антигенные: обладают О- и Н-антигеном Резистентность: переносят нагревание 60С в течение 1 ч, длительно сохраняют жизнеспособность в слабых растворах фенола и другие дез. средств Входят в состав факультативной микрофлоры толстой кишки и влагалища. Патогенез: Вызывают гнойно-септическую инфекцию, дисбактериоз кишечника, инфекцию мочевыводящих путей, пиелонефрит. В результате расщепления мочевины повышается pH мочи, создаются условия для образования почечных камней. Лечение: используют колипротейный бактериофаг и проводят этиотропную антибиотикотерапию Иммунитет не формируется Микробиологич. диагностика – бактериологическое исследование - посев на лактозосодержащие дифференциальные среды и на скошенный агар. Пищевое отравление: Инкубационный период - 4 - 20 часов. Болезнь может иметь внезапное начало, сопровождаться схваткообразными, режущими болями в кишечнике, тошнотой и рвотой, поносом. В фекальных и рвотных массах иногда отмечают наличие крови. В тяжелых случаях наблюдают судороги, падение сердечной деятельности, побледнение слизистых. Длительность болезни до 5 дней. Смертельный исход возможен в пределах 1,5 %. 19. Микробиологическая диагностика дизентерии. Бактериологический метод. Материалы: испражнения, еже – рвотные массы и промывные воды желудка и кишечника, продукты питания Испражнения засевают на среду Плоскирева и Эндо в чашках, а также для накопления на селенитовую среду. Со среды накопления материал высеивают через 16-18 ч на те же плотные среды. Посевы в термостат на 18-24 ч 37С. Макро- и микроскопическое изучение. Бесцветные лактозоотрицательные колонии для накопления ЧК пересевают на полиуглеводную среду (Ресселя) или на скошенный агар. В термостат Учет характера роста, пересев на дифференциальные среды (среду Гисса) Учет изменений: не ферментируют лактозу, не образуют газ из глюкозы и не декарбоксилируют лизин 20. Люминесцирующая брюшнотифозная сыворотка. Получение. Назначение. Получают путем гипериммунизации животных S.typhi, после получения сыворотки проводят обработку ее флюорохромом. Применяется для быстрого обнаружения в исследуемом материале возбудителя брюшного тифа в прямой РИФ. 21. Возбудители дизентерии. Биологические свойства (морфологические, культуральные, ферментативные, антигенные, токсинообразование). Морфология: шигеллы – грамотрицательные неподвижные палочки с закругленными концами, взаимное расположение беспорядочное, жгутиков, спор и капсул не образуют, имеют фибрии общего типа Культуральные: условия роста: 24ч, 37С, наличие кислорода, pH=6,7-7,2. На МПА – колонии круглые полупрозрачные (S-формы) или плоские, тусклые и шероховатой поверхностью и неровными краями (R-формы). На среде Эндо - колонии бесцветные, аналогичной формы. На МПБ – равномерное помутнение (S-формы), придонный осадок, надосадочная жидкость прозрачная (R-форсы). Биохимические: не имеют протеолитических ферментов (желатин не разжижают, сероводород, индол не выделяют, мочевину не разлагают). Сахарозу, лактозу не ферментируют. Маннит, мальтозу, глюкозу – до кислоты. Антигенные: имеют соматический О-антиген, S. sonnei имеет К-антиген Факторы патогенности: 1. эндотоксин 2. S. dysenteriae вырабатывает экзотоксин (шига-токсин). Он необратимо ингибирует синтез белков рибосомами клеток кишечного эпителия, разрушает эндотелий капилляров и вызывает ишемию в тканях кишечника. Следствием системной адсорбции этого экзотоксина может стать гемолитический уремический синдром и тромботическая микроангиопатия. 3. Шигеллы обладают инвазивностью, колициногенностью, образуют БАВ и ферменты (гиалуронидазу, фибринолизин, лецитиназу) 22 .Микробиологическая диагностика брюшного тифа на 2-й неделе заболевания. Выбор материала и метода микробиологической диагностики брюшного тифа зависит от стадии патогенеза. На 1 неделе заболевания возбудитель выделяют из крови (гемокультура), с конца 2 недели и на 3 неделе- из мочи (уринокультура), испражнений (копрокультура), костного мозга, ликвора. Основным методом диагностики является бактериологический, начиная со 2 недели проводят серологическое исследование. Серологический метод исследования: 1.Для серологической диагностики брюшного тифа используют развернутую реакцию агглютинации (РА)- реакцию Видаля, основанную на обнаружении в сыворотке крови людей агглютининов (АТ), которые появляются в конце 1, начале 2 недели заболевания, и на изучении динамики нарастания и длительности сохранения антител. Реакция ставится с антигенами: О- и Н-брюшнотифозными. Боюшнотифозные монодиагностикумы применяются для установления стадии болезни: О-антитела накапливаются в разгар болезни, Н-антитела- появляются к концу заболевания и сохраняются у переболевших в течение длительного времени. Для реакции Видаля берут 2-3 мл крови из вены. Реакцию Видаля ставят в 4 рядах пробирок по 7 пробирок в каждом ряду ( 5 опытных и 2 контрольных- контроль сыворотки и контроль АГ). Сначала готовят основное разведение сыворотки. Титры: 1:50, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800. Затем делают серию разведений сыворотки путем последовательного переноса 1 мл из предыдущей пробирки в следующую пробирку ряда. Из последней пробирки 1 мл удаляют для сохранения объема. В контроль АГ вносят 1 мл ИХН. В каждую пробирку с разведениями сыворотки и в контрольную пробирку сыворотки вносят по 2 капли взвеси бактерий(диагностикума). Пробирки встряхивают и помещают в термостат при 37 гр на 2ч. , затем сутки выдерживают при комнатной температуре. Учет РА проводят оценивая каждую пробирку, начиная с контрольных. В контрольной пробирке (без диагностикума) не должно быть хлопьев. Контроль сыворотки- светло-желтая жидкость, контроль АГ- равномерно мутная жидкость. Реакцию учитывают как положительную при наличии отчетливой агглютинации во 2 опытной пробирке, и её отсутствие в обеих контрольных пробирках. Титр сыворотки- наименьшее разведение, где наблюдается положительный результат, т.е. титр реакции Видаля равен 1:200. 2.РНГА с эритроцитарными групповыми (A, B, C, D, E) и монорецепторными диагностикумами. 3.ИФА, которые ставят с парными сыворотками в динамике заболевания. 4.Реакция пассивной Vi-гемагглютинации , с помощью которой определяют Vi-антитела в сыворотки крови больного. В качестве АГ используют эритроцитарный Vi-диагностикум. Испытуемую сыворотку разводят от 1:10 до 1:1280. При положительном результате эритроциты покрывают дно пробирки в виде диска с зазубренными краями, а надосадочная жидкость остается прозрачной. При отрицательном- диск с ровными краями. Диагностический титр- 1:40 и выше. 23. Лактобактерин сухой. Холерная вакцина. Лактобактерин сухой. Содержание: Лактобактерин сухой представляет собой микробную массу живых, лиофилизированных в среде культивирования лактобактерий L. plantarum или L.fermentum. Получение: клетки выращивают в достаточном объеме, отделяют от жидкой среды центрифугированием, суспендируют осадок в стерильном криопротекторе. Суспесию заливают в ампулы, замораживают в течение часа, затем подвергают лиофильной сушке. Применение: предназначен для лечения детей и взрослых, страдающих: •хроническими колитами различной этиологии, в том числе неспецифическими язвенными колитами; •соматическими заболеваниями, осложненными дисбактериозами, возникшими в результате применения антибиотиков, сульфаниламидных препаратов и других причин; •для лиц, перенесших острые кишечные инфекции, при наличии дисфункций кишечника или выделении патогенных и условно-патогенных бактерий; •в акушерско-гинекологической практике для санации половых путей при неспецифических воспалительных заболеваниях гениталий и предродовой подготовке беременных группы "риска" с нарушениями чистоты вагинального секрета до III-IV степени. Холерная вакцина. Содержание: взвесь убитых холерных вибрионов Получение: готовится из вибрионов Эль-Тори классических холерных вибрионов серотипов Инаба и Огава. Получают путем выращивания на искусственных питательных средах возбудителей холеры, которые затем подвергают инактивации, разрушению, выделению антигенных комплексов, очистке, конструированию в виде сухого или лиофильно высушенного препарата. В препарат обязательно добавляют консервант, иногда- адъюванты. Проводят контроль вакцины. Применение: для активной иммунизации против холеры. 24.Возбудители дизентерии Зонне. Биологические свойства (морфологические, культуральные, ферментативные, антигенные, токсинообразование). Дизентерия Зонне- анторпонозное инфекционное заболевание с преимущественным поражением толстой кишки и общей интоксикацией, вызываемое Shigella Sonnei. Вызывает шигеллез в легкой форме, часто в виде бактерионосительства. Возбудитель: семейство : Enterobacteriaceae, род: Shigella, вид: S.Sonnei. (1 серовар). Морфологические свойства: неподвижные (не имеют жгутиков) грамотрицательные палочки, размером 0.5-0.7*2-3 мкм. Спор и капсул не образуют. Многие имеют половые пили, а также снабжены фимбриями(для адгезии). Культуральные свойства: хорошо растут на простых питательных средах. На плотных средах образуют мелкие гладкие блестящие полупрозрачные колонии, на жидких- диффузное помутнение. Образуют два типа колоний: S-формы (1 фаза) и R-формы (2 фаза). Ферментативные (биохимические) свойства: S. Sonnei является наиболее биохимически активным видом, по биохимической активности подразделяется на хемовары. 1. Не образуют газ при ферментации глюкозы. 2. Способен ферментировать лактозу и сахарозу медленно, в течение 72 ч. 3. Не прдуцирует сероводород и индол 4. Ферментирует маннит. Антигенные свойства: О-антиген, также обладает антгеном фазы 1, который является К-антигеном. Токсинообразование: S. Sonnei продуцирует шигаподобные токсины- белковые токсины, состоящие из 1 субъединицы А- энзиматическая и 5 субъединиц В- рецепторные (имеют сродство к рецептору Gb3 на эндотелии капилляров). Субъединица А, проникнув в клетку, взаимодействует с субъединицей рибосом, необратимо блокируя синтез белка. Шигаподобные токсины накапливаются в периплазматическом пространстве и выделяются в окружающую среду после гибели шигелл. Эндотоксин защищает шигеллы от действия низких значений рН и желчи. 25. Микробиологическая диагностика брюшного тифа на 3-й неделе заболевания. Выбор материала и метода микробиологической диагностики брюшного тифа зависит от стадии патогенеза. На 1 неделе заболевания возбудитель выделяют из крови (гемокультура), с конца 2 недели и на 3 неделе- из мочи (уринокультура), испражнений (копрокультура), костного мозга, ликвора. Основным методом диагностики является бактериологический, начиная со 2 недели проводят серологическое исследование. Бактериологический метод исследования: материал исследования- копрокультура. 1 этап: испражнения засевают на одну из дифференциально-диагностических сред (Эндо, Левина или Плоскирева). Для этого петлю с испражнениями вносят в пробирку с изотоническим раствором хлорида натрия и готовят суспензию; после оседания крупных комочков петлю тонкой суспензии наносят на поверхность агаровой среды-на одну половину чашки. Материал растирают шпателем по одной, затем по другой половине чашки для получения изолированных колоний. Инкубация при 37 градусах 24 часа. 2 этап: Изучение характера колоний: 1. Макроскопия: бесцветные, прозрачные, блестящие, гладкие колонии с ровными краями. 2. Микроскопия- окраска по Граму: обнаружение грамотрицательных палочек. Пересев 2-3 бесцветных колоний на скошенный питательный агар(для выделения чистой культуры) или среду Ресселя (внизу она в виде столбика, а верхняя часть имеет скошенную поверхность) (наблюдается изменение цвета среды и разрывы столбика, что свидетельствует о газообразовании, сероводород обнаруживают по почернению среды): исследуемую культуру засевают уголком в столбик и на поверхность среды. Инкубация при 37 градусах 24 часа. 3 этап: Изучение характера колоний (чистой культуры): 1. Макроскопия: колонии одинаковой формы, гомогенный рост. 2. Микроскопия- окраска по Граму: обнаружение грамотрицательтных палочек- проверка чистоты культуры. Реакция агглютинации на стекле со смесью групповых сывороток, а затем с адсорбированными монорецепторными О- и Н-сальмонеллезными сыворотками: определение О-антигена (определяет серогруппу), Н-антигена (определяет тип сальмонеллы), Vi-антиген определяется по таблице. Посев на пёстрый ряд: на среду Гисса: кислота образуется, газ не образуется, индол не образуется, сероводород образуется. Фаготипирование- определение чувствительности возбудителя к бактериофагу. Выделенную культуру засевают газоном на питательный агар в чашки Петри; затем наносят на агар по 1 капле типовых фагов и инкубируют при 37 градусах 24 часа. Наличие лизиса (стерильных пятен в газоне роста) позволяет определить принадлежность выделенного штамма к определенному фаговару. 4 этап: проводится учет полученных результатов. 26. Бифидумбактерин сухой. Содержание: содержит липофильно высушенную взвесь живых клеток B. Bifidum. Получение: Биологическим агентом для получения бифидумбактерина является штамм Bifidobacterium bifidum № 1. Вначале получают культуру 1 поколения, затем 2 и 3 поколения (нативная взвесь) - выращивают чистую культуру бифидобактерий в биореакторе. По окончании процесса культивирования микробную взвесь с биореактора сливают в стерильные баллоны емкостью 16 л. Затем призводят лиофильную сушку. Применение: лечение дизентерии и хронических кишечных инфекций невыясненной этиологии у детей. Применяется при дисбактериозах, пищевых токсикоинфекциях, синдроме мальабсорбции. 27. Сальмонеллы – возбудители паратифа В .Биологические свойства (морфологические, культуральные, ферментативные, антигенные). Патогенез. Паратиф В – острая антропонозная инфекция, вызываемая S. schotmuelleri. Возбудитель: семейство: Enterobacteriaceae, род: Salmonella, вид: S. schotmuelleri (серовар S.paratyphi B). Морфологические свойства: типичны для рода сальмонеллы, подвижные мелкие грамотрицательные палочки размером 0.7-1.5* 2-5 мкм. Капсулу не образуют, окружены микрокапсулой. Подвижность обеспечивается за счет перитрихиально расположенных жгутиков. Культуральные свойства: хорошо растут на простых питательных и желчесодержащих средах. При росте на плотных средах образует слизистые валики. На плотных средах могут образовывать колонии в S- и R-формах, на жидких- диффузное помутнение. S-форма колоний: средних размеров, гладкие, блестящие, полупрозрачные с голубоватым оттенком. Жидкие среды обогащения при посеве крови: триптозосоевый бульон, бульон с сердечно- мозговой вытяжкой, желчный бульон; при посеве фекалий, желчи, мочи, пищевых продуктов: селенитовый бульон, тетратионатовый бульон. На лактозосодержащих дифференциальных средах (Эндо, Плоскирева, Мак-Конки) образуют бесцветные колонии; на висмут-сульфитном агаре- колонии черного цвета, на среде BGA- розовые колонии. Ферметативные (биохимические) свойства: в основном типичны для рода сальмонелла. 1.ферментация глюкозы, мальтозы, арабинозы до кислоты и газа. 2. Отсутствуют: ферментация лактозы, индолообразование, расщепления мочевины. 3. Продукция сероводорода-вариабельный признак. 4. Декарбоксилирование лизина. Антигенные свойства: 1. О-антиген (соматический)- связан с клеточной стенкой, по структуре- липополисахарид. 2. Н-антиген (жгутиковый)- входит в состав жгутиков бактерий, по структуре- белок флагеллин. Может присутствовать К-антиген. По классификации сальмонелл по антигенной структуре ( по Кауфману) S. parathyfi B относится к серогруппе B, О-антиген-1,4,5,12, Н- антиген: фаза 1-с, фаза 2-1,5. |