Микробиология. микра зачет. Микробиологическая диагностика и специфическая профилактика кишечных инфекций
 Скачать 57.17 Kb.
|
|
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ 1. Холерные вибрионы, биологические свойства(морфологические, культуральные, ферментативные, антигенные). Холерный вибрион –грамотрицательная палочка в форме запятой. Спор и капсул не образует. Чрезвычайно подвижен за счет монотриха. Культуральные св-ва: · температура 37 · рН= 8.5-9 · требует наличия в среде 0,5% хлорида натрия. Факультативный анаэроб. Но предпочитает аэробные условия роста. На жидкой пит. Среде образует пленку. Среда накопления – 1%щелочная пептонная вода, на которой в течение 6-8 ч. Образует пленку. Элективные среды – тиосульфат– цитратный, сахарозо – желчесодержащий агар. На них обр. колонии желтого цвета. Б/х св-ва: Обладает протеолитическими и сахаролитическими св-вами: · продуцируют индол · лизин декарбоксилазу · разжижает в воронковидной форме желатин · сероводород не продуцирует. Ферментирует: глюкозу,сахарозу, маннозу, крахмал, лактозу. Не сбраживает: рамнозу,арабинозу, инозит, инулин. Чувствительность к фагу: классический вибрион – к бактериофагам IV группы, а эль-тор к фагу V группы. Эль-тор вибрион гемолизирует эритроциты барана, аглютинирует куриные эритроциты. Антигенные св-ва: · О1 и О139 (серовары Огава, Инаба, Гикошима) · Н- антиген. 2. Микробиологическая диагностика эшерихиозов (экспресс-диагностика с помощью прямой РИФ, ингредиенты, положительный и отрицательный результаты). Ингредиенты: 1)ВЧК из материала от больного 2)Иммунная сыворотка с АТ, меченными флюорохромом. Исследуемый материал помещают на стекло и фиксируют, чаще всего ацетоном, высушивают, в течение 20 мин. При температуре 37. Наносят иммунную сыворотку с АТ, меченными флюорохромом. В результате взаимодействия АГ и АТ обр. иммунные комплексы. Затем АТ, непрореагировавшие с АГ эшерихий, смывают. Образовавшиеся иммунные комплексы дают зеленое свечение в УФ- лучах люминесцентного микроскопа. Это положительная реакция. При отрицательной реакции , т.е. если не обр. иммунные комплексы, свечения не наблюдается. 3.Сальмонеллы – возбудители госпитальных инфекций, их свойства. Сальмонеллы – короткие грамотрицательные палочки с закруглёнными концами, в большинстве случаев подвижные (перитрихи), спор и капсул не имеют. Культуральные св-ва: · Хорошо растут на простых питательных средах и желчесодержащих. · Температура 37 · рН= 7,2 – 7,4 На жидких средах обр. помутнение, а на плотных колонии в R и S формах. S-колонии: средних размеров, гладкие, блестящие, полупрозрачные с голубоватым оттенком. Некоторые виды приросте на плотных средах обр. слизистые валики. · На лактозосодержащих средах обр. бесцветные колонии · на висмут-сульфитном агаре обр. черные колонии · на среде BGA –розового цвета. Б/х св-ва: · ферментация глюкозы, маннита и мальтозы до кислоты и газа · не ферментирует лактозу и сахарозу · продукция сероводорода · декарбоксилирование лизина · отсутствие обр. индола и расщепления мочевины. Антигенные св-ва: · соматический О-антиген · жгутиковый Н-антиген · К-антиген у некоторых · Vi- антиген ( у S. Thyphi ) 4. Санитарно-показательное значение кишечной палочки. Определение коли-титра воды. Кишечная палочка — самый многочисленный и постоянный обитатель толстого отдела кишечника человека и всех теплокровных животных. Она выделяется" во внешнюю среду с фекальными массами, поэтому используется как индикатор фекального загрязнения внешней среды и косвенный показатель наличия в воде болезнетворных микробов — возбудителей кишечных инфекций человека, выделяемых с фекалиями в воду и другие объекты. Таким образом, кишечная палочка служит санитарно-показательным микроорганизмом воды. Поскольку она не образует спор и гибнет при относительно щадящих методах обеззараживания, ее присутствие в консервированных продуктах или воде указывает на нарушение режима консервирования и на недостаточность обработки воды. Так как если кишечная палочка сохранила жизнеспособность, значит, могли выжить и другие не спорообразующие бактерии, такие, как дизентерийная шигелла, брюшнотифозная сальмонелла и другие патогенные бактерии — возбудители. Коли-титр — наименьшее количество жидкости (выраженное в миллилитрах), в котором обнаруживаются кишечные палочки. Коли-титр определяют бродильным методом, заключающимся в посеве определенных объемов исследуемого субстрата на среды накопления. Глюкозопептонную или лактозопептонную с индикатором и поплавком и другие подобные среды, которые выдерживают t° 37°. Большие объемы засевают на концентрированную среду, малые объемы — в пробирки со средой нормальной концентрации. Из всех помутневших пробирок вне зависимости от образования кислоты и газа делают высевы на среду Эндо с последующей идентификацией выросших колоний (красные или розовые колонии с металлическим блеском). Ориентировочно за коли-титр принимают тот наименьший объем, при посеве которого на среды накопления выявлены кишечные палочки. 5. Монофаги диагностические холерные жидкие, состав, назначение. Диагностические жидкие холерные монофаги представляют собой МБП, предназначенные для дифференцировки классического холерного вибриона от эльтор. Данный МБП содержит холерный фаг С, который активен только в отношении классического холерного вибриона, или холерный фаг Эль – Тор, который активен только в отношении холерного вибриона эльтор. Для постановки реакции в чашки разливают щелочной агар. После застывания агара и подсушивания его в течение 30 мин при температуре 37 °С дно чашек делят на квадраты по количеству образцов фагов и 10-кратных разведений фага. В пробирку с 5 мл 0,5 - 0,7 %-го питательного агара, расплавленного и охлажденного до 45 °С, добавляют 0,1 - 0,2 мл бульонной культуры, тщательно смешивают и выливают на поверхность агара. Чашки оставляют при комнатной температуре с приоткрытыми крышками на 30 мин. В центр квадратов наносят пастеровской пипеткой по капле монофагов в соответствующих разведениях. После подсыхания капель чашки переворачивают вверх дном и помещают в термостат при температуре 37,0. Результаты учитывают через 3 - 4 и 18 - 20 ч. Наличие лизиса в виде одного «стерильного» пятна или группы мелких негативных колоний оценивается как положительный результат. 6. Шигеллы. Патогенез дизентерии. Роль факторов инвазии, распространение. Входные ворота – ротовая полость, где активируются факторы неспецифической защиты ( лизоцим, макрофаги, нейтрофилы) Желудок: под действием соляной кислоты и ферментов честь гибнет, высвобождается эндотоксин. Тонкая кишка: желчь часть шигелл разрушает, высвобождается эндотоксин, который обуславливает первые признаки заболевания – озноб и лихорадку. Оставшиеся шигеллы проникают в дистальные отделы толстого кишечника, происходит адгезия их к слизистой кишечника, колонизация, отторжение ворсин кишечника в местах прикрепления, развитие воспаление. С помощью белков-инвазинов проникают в энтероциты, активно размножаются в них. Выделяют шигатоксин и шигаподобный токсины, которые нарушают обмен в-в (водно-солевой, углеводный и белковый). Разрушается эпителиальный покров кишечника, развитие катарально-язвенного воспаления. 7. Микробиологическая диагностика брюшного тифа и паратифов. Серодиагностика (РИФ, РПГА). Антитела к возбудителям брюшного тифа и паратифов обнаруживаются в сыворотке крови больных с 8-10 дня заболевания. РИФ: Ингредиенты: 1)Сыворотка крови больного 2)Диагностикум 3)антиглобулиновые антитела, меченные флюорохромом. АГ помещают на стекло и фиксируют. Наносят сыворотку больного. В результате взаимодействия АГ и АТ обр. иммунные комплексы. Затем АТ, непрореагировавшие с АГ диагностикума, смывают. Наносят антиглобулиновые антитела, меченные флюорохромом. Они взаимодействуют с обр. иммунными комплексами. Затем непрореагировавшие антиглобулиновые антитела, меченные флюорохромом, смывают. Образовавшиеся иммунные комплексы дают зеленое свечение в УФ- лучах люминесцентного микроскопа. Это положительная реакция. При отрицательной реакции , т.е. если не обр. иммунные комплексы, свечения не наблюдается. РПГА. Ингредиенты: 1)ИХН ( во все лунки) 2)сыворотка крови больного 3) антигенный эритроцитарный диагностикум. В 5 опытных лунках титруем сыворотку больного от 1:20 до 1:320. 2 контрольные лунки: контроль сыворотки и контроль диагностикума. В опытные лунки добавляем одинаковое количество антигенного эритроцитарного диагностикума. В термостат. Учет результатов: «+» реакция – обр. зонтиков. «-» реакция – обр. пуговок. 8. Сыворотка диагностическая холерная люминесцирующая, приготовление, назначение. Сыворотка диагностическая холерная люминесцирующая – это МБП, содержащий АТ, дающие свечение в люминесцентном микроскопе и предназначенные для идентификации холерного вибриона. Изготовления холерных флуоресцирующих иммуноглобулинов включает в себя следующие этапы: · получение антигена, · гипериммунизацию кроликов-продуцентов с целью получения сыворотки-полуфабриката; · выделение из гипериммунной сыворотки серологически активной иммуноглобулиновой фракции; · конъюгирование иммуноглобулиновой фракции с флуорохромом; · контроль уровня специфической активности и специфичности конъюгата; · стабилизацию препарата флуоресцирующих антител. Можно применять в экспрес-диагностике холеры – проведение прямой РИФ. 9. Факторы патогенности холерного вибриона. Токсины и их характеристика. Главными факторами патогенности явл.: · Токсинкорегулируемые пили– обеспечивают колонизацию вибриона на микроворсинках тонкой кишки. · Холерный энтеротоксин – белок, состоящий из 1субъединицы А и 5 субъединиц В. В- субъединицы ответственны за связывание всей молекулы токсина с клеточным рецептором слизистой тонкой кишки. А-субъединица проникает внутрь клетки, активирует АЦ, усиленный синтез цАМФ, это изменяет активный транспорт ионов: усиленно выделяются ионы хлора, затрудняется всасывание хлора и натрия, что составляет осмотическую основу для выделения в просвет кишечника воды. · Нейраминидаза укрепляет связь В-субъединицы с эпителиоцитами и облегчает проникновение энтеротоксина внутрь клеток · Растворимая гемагглютинин/протеаза способствует отделению вибрионов от рецепторов эпителиоцитов и их выходу из кишечника во внешнюю среду, обеспечивая им эпидемическое распространение. · Эндототсин – ЛПСЮ, выделяется при разрушении вибриона. Активирует каскад арахидоновой кислоты, запускает синтез простагландинов, происходит сокращение гладкой мускулатуры и развитие тенезм. 10.Бактериологическоеисследование при пищевых токсикоинфекциях. Особенности. Материал для исследования: - Испражнения - Рвотные массы - Промывные воды желудка - Пищевые продукты и сырье, с которыми связывают развитие болезни Для обнаружения безусловно-патогенных микробов на соответствующие накопительные и селективные среды засевают неразведенный исследуемый материал. Для выявления УПМ готовят серийные разведения материала в ИХН или в0,1% пептонной воде. Плотный материал перед посевом измельчают в асептических условиях с добавлением ИХН. Делают мазок, окраска по Граму. Для выявления и идентификации бактерий используют подходящие пит. среды и тесты: · Среда Левина или Эндо – выявление энтеробактерий · ЖСА –стафилококки · МПА с фурагином –псевдомонады · МПА - бациллы · Среда Китта-Тароцца – клостридии. Выделяют чистую культуру, проводят идентификацию, определяют чувствительность к антибиотикам, определяют факторы патогенности, б/х св-ва. 11.Агглютинирующие сыворотки шигелл Флекснера, Зонне и др., состав, назначение. Содержание: агглютинирующие антитела к антигенам шигелл. Получение: путем иммунизации кроликов определенными видами и сероварами шигелл дизентерии Флекснера, Зонне, Бойда. Применение: для диагностики в бактериологическом методе: постановке реакции агглютинации. 12. Семейство энтеробактерий. Таксономия. Общая характеристика. Морфология, культуральные, биохимические свойства. Антигенная структура. Семейство – Еnterobacteriaceae Роды – Proteus Providencia Klebsiella Enterobacter Escherichia Shigella Salmonella Морфология: грамотрицательные палочки, спор не образуют ( искл. Shigella и Klebsiella), подвижны за счет перитрихиально расположенных жгутиков, некоторые образуют капсулу. Культуральные: растут на простых питательных средах, при 37 С, факультативные анаэробы Биохимические: оксидазоотрицательные, обладают нитратредуктазой, ферментируют глюкозу с образование кислоты, некоторые с образованием газа, роды различаются по способности ферментировать лактозу, продуцировать сероводород, индол, расщеплять мочевину и т.д. Антигенные: обладают соматическим О-антигеном, могут иметь жгутиковый Н-антиген, поверхностный К-антиген. 13. Микробиологическая диагностика сальмонеллезов. Проводится бактериологическим и серологическим методом. Бактериологический метод: Материал для исследования: испражнения, рвотные массы, промывные воды, желчь, костные мозг, кровь, продукт питания 1. Посев в чашки с висмут-сульфитным агаром и в среды накопления (магниевая, селенитовая), из которых через 6-10 часов делают пересев на висмут-сульфитный агар. Инкубация 37С 24 ч 2. Макро- и микроскопическое изучение. Отбирают колонии черного цвета и пересевают на полиуглеводную среду Олькеницкого. Инкубация 37С 24 ч 3. Макро- и микроскопическое исследование. Пересев на «пестрый» ряд и проведение РА. 4. Учет изменений на «пестром» ряде. Не ферментируют лактозу и сахарозу, расщепляют глюкозу, манит и мальтозу с образованием кислоты и газа, не образуют индол и сероводород Серологический метод: РНГА с сальмонеллезными поливалентными и групповыми диагностикумами 14. Брюшнотифозный ОН-диагностикум, получение, назначение. Брюшнотифозный ОН – диагностикум взвесь бактерий S. Typhi, убитых обработкой формалином. Применяется для серодиагностики брюшного тифа в развернутой реакции агглютинации (РА) Видаля. Реакция основана на обнаружении в сыворотке крови больных людей антител-агглютининов, которые появляются в конце 1-й – начале 2-й недели заболевания. Позволяет оценивать динамику нарастания и длительность сохранения антител. Диагностическим титром реакции Видаля считается разведение сыворотки больного не ниже 1:200. 15. Сальмонеллы. Особенности антигенной структуры по Кауфману-Уайту. Патогенность для человека и животных. Сальмонеллы обладают соматическим О-антигеном, жгутиковым Н-антигеном, некоторые К-антигеном. Дифференциация внутри рода проводится по антигенной структуре. В основе классификации Кауфмана-Уайта лежит подразделение сальмонелл на серологические группы по общности строения О-антигена и внутри серогруппы – на серовары в соответствии со строением Н-антигена. О-антиген состоит из R-ядра и боковой S-цепи. К s-цепи присоединяются сахара, которые называются рецепторами и обозначаются цифрами. H-антиген является двухфазным. Его синтез кодируется двумя независимыми генами, работа одного из которых исключает работу другого. Поэтому в каждой клетке может быть синтезирована только одна фаза. Первая фаза обозначается буквами и считается специфической, вторая – цифрами, неспецифическая. в таблице Кауфмана-Уайта серогруппы обозначаются цифрами согласно номеру группового рецепторов. А-2, В-4, С1-С4 – 6,7, D1 – 9. Внутри серогруппы серовары расположены в алфавитном порядке. Сальмонеллы являются возбудителями брюшного тифа и паратифа, а также вызывают сальмонеллез |