Микробиология. микра зачет. Микробиологическая диагностика и специфическая профилактика кишечных инфекций
 Скачать 57.17 Kb.
|
|
Патогенез: основные факторы патогенности: микрокапсула, белок инвазин, эндотоксин. Патогенез: за счет микрокапсулы возбудитель прилипает к энтероцитам тонкой кишки; после адгезии происходит частичная колонизация слизистой; затем происходит инвазия (с помощью трансцитоза) слизистой кишечника через М-клетки, не повреждая слизистую; из М-клеток возбудитель транспортируется в пейеровы бляшки, где захватываются макрофагами, в которых они размножаются (вызывая воспаление с лимфаденитом), образуя первичный очаг инфекции; это приводит к нарушению барьерной функции, с последующим попаданием возбудителя в общий ток лимфы и затем в кровь, вызывая бактериемию (10-14 сутки), которая сопровождает период интенсивной лихорадки. С током крови возбудитель разносится по всему организму, оседая в ретикулоэндотелиальных элементах паренхиматозных органов: печени, селезенке, легких, костном мозге, где также размножаются в макрофагах. Также возбудитель заносится по желчным протокам, диффундируя из Купферовских клеток печени, в желчный пузырь, где интенсивно размножается, т.к. желчь для них- элективная питательная среда. Накапливаясь в желчном пузыре, сальмонеллы вызывают в нем воспалительный процесс и с током желчи реинфицируют тонкий кишечник. Повторное введение сальмонелл в сенсибилированные пейеровы бляшки, приводит гиперергическому воспалению, некрозу и изъязвлению, следовательно к кишечному кровотечению и перфорации стенки кишечника, с последующим перитонитом.При разрушении сальмонелл выделяется эндотоксин, котрый приводит к интоксикации организма. Выделяются сальмонеллы из организма с испражнениями и мочой. 28. Колибактерин сухой. Холероген-анатоксин. Колибактерин сухой. Содержание: высушенные живые клетки Е. coli штамма М17, обладающего выраженными антагонистическими свойствами в отношении ряда кишечных патогенных бактерий Получение: биологическим агентом для получения колибактерина является E.Coli. Клетки выращивают в достаточном объеме, отделяют от жидкой среды центрифугированием, суспендируют осадок в стерильном криопротекторе. Суспесию заливают в ампулы, замораживают в течение часа, затем подвергают лиофильной сушке. Применение: лечение дисбактериоза и дизентерии, главным образом у детей, при диарее (острой и хронической форме). Холероген-анатоксин: Содержание: взвесь убитых холерных вибрионов, выращенных в жидкой питательной среде. Препарат очищен от балластных веществ, выпускается в сухом виде. Получение: Для получения препарата этот штамм (отличается от других штаммов стабильностью образования токсина), который хранится в высушенном виде в запаянных, ампулах, вначале подготавливают - тренируют путем пересевов на жидких и плотных питательных средах и лишь после этого, убедившись в полноценности его свойств, используют для посева на 250 л жидкой питательной среды, загруженной в реактор-культиватор, снабженный мешалкой. Выращивание в реакторе осуществляется в течение 10-11 часов при 34-37°С и постоянной аэрации подогретым до 30°С стерильным воздухом. С целью интенсификации токсинообразования осуществляется подкормка культуры заданными объемами 40% раствора глюкозы и 10% раствора аммиака в строго определенные сроки. После завершения цикла выращивания в бульонную культуру добавляют формалин до 0,6% концентрации для умерщвления вибрионов. Инактивация вибрионов наступает через 14-18 ч. Убедившись в полноте инактивации, бульонную взвесь вибрионов и их токсинов обрабатывают на суперцентрифуге со скоростью 8000 - 10 000 об/мин с последующим восполнением испарившегося формалина. Полученный формалинизированный безмикробный центрифугат собирают в бутыли и для полного обезвреживания токсина и О-антигена выдерживают при 10-12°С в течение 30-35 дней. После этого с помощью двукратного переосаждения сульфатом аммония в различных концентрациях в специальных реакторах вначале центрифугат освобождают от балластных фракций, а затем из раствора строго определенной оптической плотности высаливают необходимые антигены холерного вибриона, которые выпадают в осадок за 8-10 ч при 18-22°С. Полученный осадок отжимают на ультрацентрифуге, диализируют для освобождения от сульфата аммония и используют в качестве основы изготовления химической вакцины. Для этого взвесь антигенов разводят физиологическим раствором до концентрации белка, равной 5 мг/мл, стерилизуют фильтрованием через бактериальные свечи под вакуумом и разливают во флаконы или ампулы. Вакцину контролируют на: физические свойства; стерильность ; токсичность; холерогенность; антигенную активность; иммуногенность; содержание О-антигена; реактогенность для людей. Применение: для специфической профилактики холеры. 29. Сальмонеллы – возбудители паратифа А .Биологические свойства (морфологические, культуральные, ферментативные, антигенные). Патогенез. Паратиф А – острая антропонозная инфекция, вызываемая S.Paratyphi A. Возбудитель: семейство: Enterobacteriaceae, род: Salmonella, вид: S. Paratyphi A. Морфологические свойства: типичны для рода сальмонеллы, подвижные мелкие грамотрицательные палочки размером 0.7-1.5* 2-5 мкм. Капсулу не образуют, окружены микрокапсулой. Подвижность обеспечивается за счет перитрихиально расположенных жгутиков. Культуральные свойства: хорошо растут на простых питательных и желчесодержащих средах. На плотных средах могут образовывать колонии в S- и R-формах, на жидких- диффузное помутнение. S-форма колоний: средних размеров, гладкие, блестящие, полупрозрачные с голубоватым оттенком. Жидкие среды обогащения при посеве крови: триптозосоевый бульон, бульон с сердечно- мозговой вытяжкой, желчный бульон; при посеве фекалий, желчи, мочи, пищевых продуктов: селенитовый бульон, тетратионатовый бульон. На лактозосодержащих дифференциальных средах (Эндо, Плоскирева, Мак-Конки) образуют бесцветные колонии; на висмут-сульфитном агаре- колонии черного цвета, на среде BGA- розовые колонии. Ферметативные (биохимические) свойства: в основном типичны для рода сальмонелла. 1.ферментация глюкозы, мальтозы, арабинозы до кислоты и газа. 2. Отсутствуют: ферментация лактозы, индолообразование, расщепления мочевины.3. Нет продукции сероводорода 4. Декарбоксилирование лизина не происходит. Антигенные свойства: 1. О-антиген (соматический)- связан с клеточной стенкой, по структуре- липополисахарид. 2. Н-антиген (жгутиковый)- входит в состав жгутиков бактерий, по структуре- белок флагеллин. Может присутствовать К-антиген. По классификации сальмонелл по антигенной структуре ( по Кауфману) S. parathyfi A относится к серогруппе A, О-антиген-1,2, 12, Н- антиген: фаза 1-а, фаза 2-нет. Патогенез: основные факторы патогенности: микрокапсула, белок инвазин, эндотоксин. Патогенез: за счет микрокапсулы возбудитель прилипает к энтероцитам тонкой кишки; после адгезии происходит частичная колонизация слизистой; затем происходит инвазия (с помощью трансцитоза) слизистой кишечника через М-клетки, не повреждая слизистую; из М-клеток возбудитель транспортируется в пейеровы бляшки, где захватываются макрофагами, в которых они размножаются (вызывая воспаление с лимфаденитом), образуя первичный очаг инфекции; это приводит к нарушению барьерной функции, с последующим попаданием возбудителя в общий ток лимфы и затем в кровь, вызывая бактериемию (10-14 сутки), которая сопровождает период интенсивной лихорадки. С током крови возбудитель разносится по всему организму, оседая в ретикулоэндотелиальных элементах паренхиматозных органов: печени, селезенке, легких, костном мозге, где также размножаются в макрофагах. Также возбудитель заносится по желчным протокам, диффундируя из Купферовских клеток печени, в желчный пузырь, где интенсивно размножается, т.к. желчь для них- элективная питательная среда. Накапливаясь в желчном пузыре, сальмонеллы вызывают в нем воспалительный процесс и с током желчи реинфицируют тонкий кишечник. Повторное введение сальмонелл в сенсибилированные пейеровы бляшки, приводит гиперергическому воспалению, некрозу и изъязвлению, следовательно к кишечному кровотечению и перфорации стенки кишечника, с последующим перитонитом.При разрушении сальмонелл выделяется эндотоксин, котрый приводит к интоксикации организма. Выделяются сальмонеллы из организма с испражнениями и мочой. 30.Физиологическая роль в кишечнике человека и санитарно-показательное значение эшерихий. Коли-титр. Коли-индекс. Определение. Санитарно-показательные микроорганизмы- микробы, являющиеся представителями нормальной микрофлоры организма человека и служащие показателями санитарного неблагополучия объекта, т.е. его загрязнения выделениями человека. Непатогенные кишечные палочки вида E.coli являются санитарно-показательными бактериями. Этот вид имеет наибольшее санитарно- показательное значение, соответствует следующим требованиям СПМ: постоянно и в больших количествах присутствует в выделениях человека, не имеет других природных резервуаров и мест обитания, легко идентифицируется, поддается количественному определению. Физиологическая роль эшерихий: способствует гидролизу лактозы, участвует в продукции витаминов, выделяет колицины, которые тормозят рост энетеропатогенных кишечных палочек (т.е. угнетает патогенные микробы), стимулирует антителообразование и оказывает мощное иммуномодулирующее действие, способствует активации гуморального и местного иммунитета. Коли-титр- минимальный объем (в мл) или весовое количество (в г) маткриала, в котором обнаруживаются БГКП. Коли-индекс- количество БГКП в единице объема материала (1л, 1г, 1м3). Определение коли-титра воды: Бродильный метод: Для исследования водопроводной воды делают посев 4 проб по 100 мл и 10 проб по 10 мл- в концентрированную среду; или 3 проб по 10 мл и 3 проб по 100 мл- в глюкозопептонную среду. Посевы инкубируют 24 ч при 37 градусах. Брожение- наличие пузырьков газа в поплавке. Из забродивших проб производят посевы на среду Эндо. Из выросших колоний делают мазки, окрашивают по Граму и ставят оксидазный тест для дифференцировки эшерихий: стеклянной палочкой снимают 2-3 изолированные колонии с поверхности среды и наносят штрихом на фильтровальную бумагу смоченную диметил-п-фенилендиамином. При отрицательном оксидазном тесте- цвет бумаги не изменится, при положительном- окрашивается в синий в течение 1 мин. Эшерихии- оксидазотрицательны. При положительном результате определяют коли-титр и коли-индекс по таблицам ГОСТ. 31. Бактериофаг протейный жидкий. Содержание: содержит фаги, лизирующие наиболее распространенные серогруппы энтеропатогенных эшерихий и протей. Выпускается в жидком виде Получение: Для выделения бактериофага исследуемый материал (воду, испражнения, гноя, почву и др.) засевают в жидкую питательную среду, наиболее благоприятную для развития тех микроорганизмов, против которых ищут бактериофаг. Среду оставляют в термостате на 18-20 часов. Иногда производят предварительное обогащение среды чистой культурой соответствующего микроба, заведомо нелизогенного, т.е. не выделяющего бактериофаг. Помутневшую питательную среду пропускают через бумажный, а затем через бактериальный фильтр, асбестовые пластины, керамические свечи. Полученный фильтрат испытывают на присутствие бактериофага путем засева совместно с соответствующей микробной культурой на плотные (методом стекающей капли - проба Отто) или жидкие питательные среды. При наличии бактериофага после 18-часовой инкубации на поверхности агара, обнаруживается сплошной налет культуры, а па месте растекающейся, капли, в зависимости от содержания частиц бактериофага в фильтрате, бактериальный рост полностью отсутствует или наблюдаются округлые «стерильные пятна» - колонии бактериофага. На жидкой питательной среде присутствие бактериофага обусловливает просветление культуры. Для выделения чистой культуры бактериофага материал из развившегося отдельного стерильного пятна переносят бактериологической иглой в суспензию молодой микробной культуры. Применение: лечебно-профилактическое- для лечения и профилактики энтероколитов и лечения колитов коли-протейной этиологии. 32. Сальмонеллы – возбудители брюшного тифа .Биологические свойства (морфологические, культуральные, ферментативные, антигенные). Патогенез. Брюшной тиф- острое антропонозное инфекционное заболевание с фекально- оральным механизмом передачи. Характкризуется циклическим течением. Протекает в генерализованной форме с поражением лимфатического аппарата тонкого кишечника, мезентериальных лимфоузлов, паренхиматозных органов, с бактериемией. Клинически проявляется выраженной интоксикацией с лихорадкой, развитием гепатолиенального синдрома, иногда- розеолезной сыпью и энтеритом. Возбудитель: семейство: Enterobacteriaceae, род: Salmonella, вид: S. Typhi, серовар S. typhi . Впервые обнаружен К. Эбертом (1880 г.) в срезах селезенки. Морфологические свойства: типичны для рода сальмонеллы, подвижные мелкие грамотрицательные палочки размером 0.7-1.5* 2-5 мкм. Капсулу не образуют, окружены микрокапсулой. Подвижность обеспечивается за счет перитрихиально расположенных жгутиков. Культуральные свойства: хорошо растут на простых питательных и желчесодержащих средах. На плотных средах могут образовывать колонии в S- и R-формах, на жидких- диффузное помутнение. S-форма колоний: средних размеров, гладкие, блестящие, полупрозрачные с голубоватым оттенком. Жидкие среды обогащения при посеве крови: триптозосоевый бульон, бульон с сердечно- мозговой вытяжкой, желчный бульон; при посеве фекалий, желчи, мочи, пищевых продуктов: селенитовый бульон, тетратионатовый бульон. На лактозосодержащих дифференциальных средах (Эндо, Плоскирева, Мак-Конки) образуют бесцветные колонии; на висмут-сульфитном агаре- колонии черного цвета, на среде BGA- розовые колонии. Ферметативные (биохимические) свойства: в основном типичны для рода сальмонелла. 1.отсутствие газообразования (т.е. ферметации глюкозы то кислоты и газа), ферментации лактозы, индолообразования, расщепления мочевины. 2. Продукция сероводорода. 3. Декарбоксилирование лизина. Антигенные свойства: 1. О-антиген (соматический)- связан с клеточной стенкой, по структуре- липополисахарид. 2. Н-антиген (жгутиковый)- входит в состав жгутиков бактерий, по структуре- белок флагеллин. 3. Vi- антиген- антиген вирулентности, по структуре- полисахарид. По классификации сальмонелл по антигенной структуре ( по Кауфману) S.typhi относится к серогруппе D, О-антиген-9, 12, Н- антиген: фаза 1-d, фаза 2-нет. Патогенез: основной фактор вирулентности- Vi-антиген (защищает от фагоцитоза и комплемента), основные факторы патогенности: микрокапсула, белок инвазин, эндотоксин. Патогенез: за счет микрокапсулы возбудитель прилипает к энтероцитам тонкой кишки; после адгезии происходит частичная колонизация слизистой; затем происходит инвазия (с помощью трансцитоза) слизистой кишечника через М-клетки, не повреждая слизистую; из М-клеток возбудитель транспортируется в пейеровы бляшки, где захватываются макрофагами, в которых они размножаются (вызывая воспаление с лимфаденитом), образуя первичный очаг инфекции; это приводит к нарушению барьерной функции, с последующим попаданием возбудителя в общий ток лимфы и затем в кровь, вызывая бактериемию (10-14 сутки), которая сопровождает период интенсивной лихорадки. С током крови возбудитель разносится по всему организму, оседая в ретикулоэндотелиальных элементах паренхиматозных органов: печени, селезенке, легких, костном мозге, где также размножаются в макрофагах. Также возбудитель заносится по желчным протокам, диффундируя из Купферовских клеток печени, в желчный пузырь, где интенсивно размножается, т.к. желчь для них- элективная питательная среда. Накапливаясь в желчном пузыре, сальмонеллы вызывают в нем воспалительный процесс и с током желчи реинфицируют тонкий кишечник. Повторное введение сальмонелл в сенсибилированные пейеровы бляшки, приводит гиперергическому воспалению, некрозу и изъязвлению, следовательно к кишечному кровотечению и перфорации стенки кишечника, с последующим перитонитом.При разрушении сальмонелл выделяется эндотоксин, котрый приводит к интоксикации организма. Выделяются сальмонеллы из организма с испражнениями и мочой. 33. Микробиологическая диагностика эшерихиозов. Осуществляется с помощью бактериологического метода исследования. Материал для исследования: фекалии, кот. берут у больного трижды в первые сутки от начала болезни с интервалом 3-4ч., промывные воды желудка и кишечника, кровь при сепсисе, от трупов- содержимое кишечника, кусочки селезенки. Посевы лучше делать у постели больного. На первом этапе бактериологического метода исследования делаем посев материала на среду Эндо(диф-диагн.среда) и инкубируем чашки на 24ч., 37град. На втором этапе производим: макроскопию полученных колоний –малиновые металлическим блеском, гладкие, микроскопия-при окраске по Граму выявляем отрицательные палочки. Далее проводим ОРА ,т.к. эшерихии патогенных сероваров не отличаются от эшерихий, обитающих в кишечнике человека по культуральным свойствами по способности ферментировать лактозу. При этом на среде отмечают любые 10 лактозоположительных колоний и агглютинируют их на стекле со смесью ОК-сывороток в разведении 1:10,1:20.Если образуются хлопья-реакция положительная, а если нет- отрицательная.Это говорит об отсутствии пат.КП. При положительном результате РА подозрительные колонии пересеваем на скошенный агар. Инкубируем пробирки в термостат на 24ч, 37 град. На третьем этапе производим макроскопию полученных колоний-гомогенный рост, микроскопия- отриц. палочки. Это проверка чистоты культуры. Далее проводим идентификацию ЧК.Делаем посев ЧК на пестрый ряд. Проверяем биохимические свойства выделенного микроорганизма: наблюдается ферментация лактозы, глюкозы с образованием кислоты и газа, образуется индол и сероводород. На четвертом этапе учитываем результаты. Это энтеропатогенная КП. Серодиагностика является вспомогательным методом и направлено на направлена на обнаружение антител различных классов. Наличие в сыворотке АТ только класса Iq G характерно для бактерионосительства. Уточнить диагноз эшерихиоза помогает обнаружение АТ в РА с гретой культуроу аутоштамма.Результаты исследования сывороток имеют значение для эпидемиологического анализа. |